原發(fā)性肝癌的分子診斷標(biāo)記物研究進(jìn)展

文 /黃志卓

我國肝癌（HCC）患病率占全球一半左右，全球新發(fā)HCC病例約為40萬，我國占20萬左右，且每年11萬人中死亡率占50%左右，占全球HCC死亡率45%左右[1-2]。該疾病主要是機體肝內(nèi)膽管細(xì)胞及肝細(xì)胞受到多種因素影響而產(chǎn)生癌變，若未對其實施針對性治療，可嚴(yán)重危及患者生命安全[3]。相關(guān)研究顯示[4]，HCC在惡性腫瘤可極易誘發(fā)患者死亡，且多見于男性患者，年齡主要集中在40歲左右，同時具有預(yù)見性差、發(fā)病快等癥狀，因此針對性對該疾患者實施早治療、早診斷具有重要意義。由于病因眾多，發(fā)病機制復(fù)雜，只有在早期檢測診斷中及時發(fā)現(xiàn)問題，采取相關(guān)治療措施，才能保證患者存活率和生活質(zhì)量。臨床檢測中對于原發(fā)性肝癌的診斷通常以影像學(xué)檢查、肝穿刺、血清甲胎蛋白（AFP）檢測為主。取活體組織進(jìn)行肝臟疾病的診斷，但肝臟穿刺比較痛苦，常常出現(xiàn)患者不愿配合、感染、出血等諸多問題[5-6]。目前采用血清進(jìn)行肝功能檢查逐漸成為臨床上常用的診斷方式，具有無創(chuàng)性、重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高、患者配合程度高、能反映不同肝病患者的肝功損害程度等優(yōu)點[7]。雖然基本可以有效檢測患者的腫瘤情況，但是檢測結(jié)果詳細(xì)情況和準(zhǔn)確率仍有待提高。

1 HCC血清診斷分子

1.1 甲胎蛋白（AFP）

AFP在結(jié)構(gòu)上與人類的血清蛋白十分相似，是由胎兒發(fā)育早期肝臟與卵黃囊組成的一種血清蛋白，在肝細(xì)胞受損后，肝功能下降，其數(shù)值也會出現(xiàn)增高，肝癌細(xì)胞產(chǎn)生的AFP具有促進(jìn)腫瘤生長的作用，并抑制免疫系統(tǒng)作用，因此AFP水平可反映腫瘤生長情況是臨床診斷肝癌重要參考指標(biāo)[8-9]。目前AFP是國際上公認(rèn)的用于篩查肝癌的最好的腫瘤標(biāo)記物，若患者的AFP水平長時間持續(xù)高于400～500 ug/L時，采用肝臟超聲與AFP的聯(lián)合檢測可以有效地早期診斷早期肝癌[10]。

1.2 血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）

血清GGT與AFP均有癌胚特性，GGT是一種質(zhì)膜糖蛋白，血清中的GGT主要來自肝臟，主要存在于人體肝腎腸道等組織中，當(dāng)肝內(nèi)阻塞時，能誘導(dǎo)肝細(xì)胞分泌大量的GGT[11-12]。當(dāng)肝臟實體腫瘤組織生長時，細(xì)胞腫脹、壓迫肝細(xì)胞，肝細(xì)胞受到擠壓的刺激，使得正常肝細(xì)胞受激產(chǎn)生大量GGT，合成和分泌GGT增加，同時肝癌細(xì)胞本身也能產(chǎn)生大量GGT，釋放到外周血液中，故血清GGT水平明顯增加，有時甚至高達(dá)600IU/L以上[13]。

1.3 透明質(zhì)酸

透明質(zhì)酸是一種氨基葡萄糖聚糖，它由一系列重復(fù)的二糖組成，β-dN-乙酰葡糖胺和β-d-葡萄糖醛酸通過β-1,4和β-1,3糖苷結(jié)合連接，肝臟是合成透明質(zhì)酸的重要器官。在肝臟中，透明質(zhì)酸被竇狀內(nèi)皮細(xì)胞降解，血清透明質(zhì)酸水平可能受肝細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)的星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞的影響，因此透明質(zhì)酸在肝內(nèi)的半衰期非常短（2-5分鐘），當(dāng)發(fā)生肝癌時，肝細(xì)胞清除及降解透明質(zhì)酸的能力下降，血清透明質(zhì)酸濃度升高，因此透明質(zhì)酸濃度升高可能和肝細(xì)胞受損相關(guān)。

2 HCC候選組織診斷分子

2.1 熱休克蛋白70(Heat Shock Protein 70，HSP70)

HSP70在正常細(xì)胞中表達(dá)較低，但在應(yīng)激后表達(dá)明顯增加。寡核苷酸芯片被用于檢測人類肝細(xì)胞癌及其鄰近組織，結(jié)果顯示，95個基因可區(qū)分早期肝癌及其周圍組織，92個基因可區(qū)分早期肝癌和晚期肝癌，實時RT-PCR和免疫組化證實HSP70表達(dá)上調(diào)，因此，HSP70可能是鑒別肝臟良惡性疾病一個潛在的組織分子標(biāo)志物[14]。

2.2 谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase，GS)

GS催化腫瘤細(xì)胞主要能量來源于谷氨酰胺的合成，GS在癌前病變、早期肝癌和晚期肝癌中的陽性率分別為1/23、4/31、19/149。GS、HSP70的敏感性和特異性分別為72%和100%。因此，聯(lián)合檢測GS、HSP70是肝癌早期診斷的理想指標(biāo)[15]。

3 其他相關(guān)分子

3.1 DNA甲基化

DNA甲基化是腫瘤中最常見的分子改變之一，采用甲基化敏感性隨機擴增PCR技術(shù)對92個HCC基因的甲基化譜進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，有32個基因的甲基化頻率有變化，其中與早期肝癌相關(guān)的基因有14個，如CSPG2、OXCT、cyclin和RASSF1A等；與晚期肝癌相關(guān)的基因有9個，如DBCCR1、PENK、IRF7等[16]。這些基因的甲基化變化有待進(jìn)一步驗證，其中一些可能是診斷肝癌的潛在分子。

3.2 微RNA(microRNA，miRNA)

MiRNA作為單鏈非編碼的小分子RNA，能夠與靶基因mRNA發(fā)生結(jié)合，從而引發(fā)降解或者翻譯抑制效果，進(jìn)一步對靶蛋白表達(dá)水平進(jìn)行影響，同時在信號通路中具有意義。MiRNA異常的表達(dá)水平與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)MiRNA與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成、浸潤甚至治療耐受等有密切關(guān)系[17]。近年來，眾多研究表明MiRNA與腫瘤發(fā)生關(guān)系密切，主要是通過下調(diào)抗腫瘤免疫反應(yīng)而發(fā)揮作用，由于相關(guān)的靶基因?qū)δ[瘤的作用不同，不同MiRNA在腫瘤中表達(dá)情況也存在差異，因而可以根據(jù)這種表達(dá)差異來判斷MiRNA對腫瘤的調(diào)控作用[18]。

4 小結(jié)

新的分子標(biāo)記物在研究人員的不懈努力下不斷被發(fā)現(xiàn)，分子標(biāo)記物作為在肝細(xì)胞肝癌中起調(diào)控作用的非編碼小分子，在肝癌的診斷、治療和預(yù)后中都有一定的價值[19-20]，可以為腫瘤的早期診斷、靶向治療、預(yù)后評估等提供新思路和新方法，已成為研究熱點[21-22]。但每種腫瘤標(biāo)記物在具體的臨床應(yīng)用當(dāng)中均會受到不同條件的限制，因此，需要對多種腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行臨床檢測，聯(lián)合檢測可在一定程度上提高診斷準(zhǔn)確率，進(jìn)而指導(dǎo)臨床的針對性治療，改善預(yù)后[23-25]。