山東肉鴨主要細菌病調查與耐藥性分析

魏中鋒 樊祜卿 王文秀 朱峰亮 姚靜

摘 要：為了解山東肉鴨主要細菌病流行情況，本試驗從山東菏澤、臨沂、濰坊3個地區采取86個肉鴨養殖場發病病料進行細菌分離鑒定和耐藥性進行分析。結果顯示，大腸桿菌病陽性場68個，占比79.1%;漿膜炎陽性場78個，占比90.7%;沙門氏菌陽性場46個，占比53.5%;從3個地區共分離出埃希氏菌64種、里默氏桿菌34種、沙門氏菌53種。耐藥性顯示主要病原菌對20種抗菌藥呈現多重耐藥現象，埃希氏菌、里默氏桿菌呈現14重以上耐藥，細菌性疾病控制愈發困難;沙門氏菌耐藥以5～9重耐藥為主。

關鍵詞：肉鴨;細菌;耐藥性

中圖分類號：S858.32 文獻標識碼：B文章編號：1673-1085（2021）9-0052-05

隨著鴨養殖業的規模化與集約化發展，鴨細菌病已成為阻礙養鴨業發展的重要因素[1]，山東省作為中國肉鴨養殖大省，尤其是菏澤、臨沂和濰坊地區是山東肉鴨養殖較大地區之一。近年來，隨著集約化、高密度化的增加，肉鴨細菌病呈現高發和多發態勢，并且抗生素治療效果較差，這給養殖場造成較大的經濟損失。引起養鴨場發生細菌性疾病的病原較多，如大腸埃希氏菌、沙門氏菌、葡萄球菌、里默氏桿菌等，但不同地區分離的病原菌有所不同，山東主要流行的為大腸桿菌、沙門氏菌和鴨傳染性漿膜炎。本研究擬通過對菏澤、臨沂和濰坊地區肉鴨場主要細菌進行分離鑒定、耐藥性分析和耐藥基因檢測，以期為肉鴨養殖細菌病預防與控制提供科學的防控方法。

1 材料與方法

1.1 病料來源

病料來自菏澤、臨沂和濰坊地區臨床具有典型癥狀的肉鴨，解剖有心包炎、肝周炎、腹膜炎、氣囊炎等明顯病變，無菌采取腦、肝臟、脾臟等病變組織。

1.2 主要藥品和試劑

麥康凱瓊脂、營養瓊脂、MH培養基、LB肉湯培養基、緩沖蛋白胨水（ BPW） 、四硫磺酸鈉煌綠（ TTB） 增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（ SC） 增菌液、亞硒酸鹽煌綠（ SBG） 增菌液、藥敏紙片均購自天津市英博生化試劑有限公司。

1.3 方法

1.3.1 細菌分離鑒定 無菌采集病死鴨的肝臟、脾臟、腎臟、氣囊等樣本，劃線接種于普通瓊脂培養基和鮮血瓊脂培養基。將普通瓊脂培養基于恒溫培養箱中37 ℃培養24 h;將鮮血瓊脂平板分成兩組，分別置于恒溫培養箱中有氧和厭氧條件下，37 ℃培養48 h，期間觀察細菌生長情況。然后挑取單個菌落進行純化培養，對純化培養物進行革蘭氏染色鏡檢和生理生化鑒定，分析致病菌種類。

1.3.2 病原菌耐藥性分析 將鑒定完的細菌培養物接種于胰蛋白胨大豆肉湯培樣24 h，取100 μL細菌液體培養物，均勻涂布于鮮血瓊脂平板，待培養基表面菌液晾干后，將藥敏紙片貼于培養基上，恒溫培養箱37 ℃培養36 h，測定抑菌圈直徑，分析分離細菌的耐藥情況。

2 結果與分析

2.1 菏澤、臨沂和濰坊地區肉鴨發病情況

統計結果見表1。

本次調查共調查86個養殖場，采集了258個樣品，其中大腸桿菌病陽性場68個，占比79.1%;漿膜炎陽性場場78個，占比90.7%;沙門氏菌陽性場46個，占比53.5%;大腸桿菌和漿膜炎混合感染場81個，占比94.2%;大腸桿菌和沙門氏菌混合感染44個，占比51.2%;漿膜炎和沙門氏菌混合感染43個，占比50%;大腸桿菌、漿膜炎和沙門氏菌3種菌混合感染27個場，占比31.4% 。

2.2 細菌分離鑒定結果

取純培養的細菌接種細菌生化管，恒溫箱37 ℃培養48 h，觀察分離細菌發酵情況，并根據培養菌落形態特點和菌體染色特征，判定分離細菌種類，結果如表2所示。

本試驗共分離埃希氏菌64種，其中肝臟分離32種，脾臟分離17種，腎臟分離13種，氣囊分離2種。分離里默氏桿菌34種，其中肝臟分離22種，脾臟分離0種，腎臟分離0種，氣囊分離12種.分離沙門菌53種，其中肝臟分離23種，脾臟分離7種，腎臟分離6種，氣囊分離17種。

從表3可知，養鴨場主要病原菌均有不同程度的耐藥現象。埃希氏菌分離株的耐藥率：頭孢吡肟（73.4%）、頭孢噻肟（84.4%）、亞胺培南（81.3%）、氨芐西林（95.3%）、頭孢曲松（92.2%）、慶大霉素（59.4%）、鏈霉素（37.5%）、新霉素（31.3 %）、卡那霉素（56.3 %）、四環素（96.9%）、強力霉素（84.4%）、紅霉素（76.6%）、氯霉素（71.9 %）、乙酰螺旋霉素（93.8%）、阿奇霉素（67.2%）、環丙沙星（81.3 %）、氧氟沙星（93.8 %）、磺胺甲基異惡唑（90.6 %）、甲氧芐氨嘧啶（84.4 %）、復方新諾明（76.6 %）、林可霉素（87.5 %）、氟苯尼考（96.9 %），其中只有鏈霉素、新霉素卡拉霉素對埃希氏菌較為敏感。

里默氏桿菌分離株的耐藥率：頭孢吡肟（79.4%）、頭孢噻肟（88.2%）、亞胺培南（82.4%）、氨芐西林（100.0%）、頭孢曲松（94.1%）、慶大霉素（76.5%）、鏈霉素（67.6%）、新霉素（47.1%）、卡那霉素（55.9%）、四環素（79.4%）、強力霉素（64.7%）、紅霉素（82.4%）、氯霉素（73.5 %）、乙酰螺旋霉素（88.2%）、阿奇霉素（47.1%）、環丙沙星（76.5 %）、氧氟沙星（88.2%）、磺胺甲基異惡唑（82.4%）、甲氧芐氨嘧啶（88.2%）、復方新諾明（76.5%）、林可霉素（88.2%）、氟苯尼考（94.1%），其中新霉素、卡那霉素、阿奇霉素對里默氏桿菌較為敏感。

沙門氏菌的耐藥率：頭孢吡肟（3.8%）、頭孢噻肟（5.7%）、亞胺培南（1.9%）、氨芐西林（9.4%）、頭孢曲松（7.5%）、慶大霉素（15.1%）、鏈霉素（3.8%）、新霉素（5.7%）、卡那霉素（9.4%）、四環素（39.6%）、強力霉素（30.2%）、紅霉素（34.0%）、氯霉素（41.5%）、乙酰螺旋霉素（45.3%）、阿奇霉素（17.0%）、環丙沙星（5.7%）、氧氟沙星（3.8%）、磺胺甲基異惡唑（49.1%）、甲氧芐氨嘧啶（50.9%）、復方新諾明（45.3%）、林可霉素（17.0%）、氟苯尼考（26.4%），大多抗生素對沙門氏菌敏感，其中磺胺甲基異惡唑、甲氧芐氨嘧啶、復方新諾明為較為敏感。

2.4 肉鴨場病原菌多重耐藥性分析

分析結果見表4。

由表4 結果可知，肉鴨場分離的細菌均存在多重耐藥現象，其中埃希氏菌分離株多重耐藥現象最為嚴重，呈現14重以上耐藥;里默氏桿菌分離株多重耐藥現象次之，以5～13重常見;沙門菌分離株多重耐藥現象相對較少，以5～9重耐藥為主。

3 討論與小結

隨著肉鴨養殖越來越向集約化和規模化發展，飼養密度越來越大，細菌病的發生日益頻繁，而且隨著細菌耐藥性的增加，細菌病更加難以控制，常給養殖業造成嚴重的經濟損失[2]。大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌和沙門氏菌是引起鴨群細菌病的最常見病原，對我國肉鴨養殖的發展以及人類公共衛生安全構成嚴重威脅[3]，并且這3種病的臨床癥狀很相似，肉鴨感染大多為2種以上混合感染[4]，因此從臨床上難以診斷。本試驗從菏澤、臨沂、濰坊3個地區86個肉鴨養殖場病死鴨病料中分離出埃希氏菌64種、里默氏桿菌34種、沙門菌53種，說明在山東這3個地區肉鴨養殖場中細菌性污染較為普遍，并且出現多重感染越來越嚴重的趨勢。隨著抗菌藥的廣泛應用，細菌耐藥現象不斷增多[5]。本試驗研究發現，肉鴨場中埃希氏菌、里默氏桿菌耐藥性越來越普遍，呈現14重以上耐藥，細菌性疾病控制愈發困難;沙門菌耐藥以5～9重耐藥為主，形勢也不容樂觀。

大腸桿菌作為一種條件性疾病，與養殖場的飼養條件有很大的關系，養殖設施和條件相對較好的發病率明顯低于設施簡陋的養殖場[6]，大腸桿菌的控制從根本上主要是改善養殖條件。鴨傳染性漿膜炎作為常見肉鴨疾病，發病具有季節性，需要加強日常飼養管理，加強鴨舍的通風、環境干燥、清潔衛生、消毒，采用全進全出的飼養制度。沙門氏菌作為一種肉禽常見細菌病，在山東省養殖肉鴨中較為普遍，發病率也比較高[7]，感染可能與種禽場有關。

參考文獻

[1] 張大丙.當前鴨病流行現狀及防控對策[J].中國家禽，2012，34（7） ： 38-40.

[2] 林安，喻元，胡嵐嵐，等.鴨源大腸桿菌和沙門菌混合感染的分離鑒定及藥敏試驗[J].中國獸醫雜志，2012，48（4） ： 45-47.

[3] 陸新浩，陳秋英，劉鴻等.當前鴨傳染病的流行特點及防控建議[J].水禽世界，2012（02）：7-12.

[4] Wei B， Cha S Y， Kang M， Park I J， Moon O K， Park C K， Jang H K.Development and application of a multiplex PCR assay for rapid detection of 4 major bacterial pathogens in ducks[J]. Poultry Science， 2013，92（5）：1164-70.

[5] 張濟培，韋慶蘭，譚華龍，等.廣東水禽源大腸埃希氏菌耐藥性及氨基糖苷類耐藥基因研究[J].動物醫學進展，2016，37（ 5） ： 42-46.

[6] 劉英龍.濰坊地區鴨大腸桿菌病流行病學調査及防治措施研究[D].泰安：山東農業大學，2009.

[7] 王健丞.山東省部分地區雞源致病菌耐藥性及中藥防治研宄[D].泰安：山東農業大學，2016.