復方卡森顆粒成型工藝及質量標準研究*

康雨彤，蔡曉翠，王新堂，賀金華

(新疆維吾爾自治區藥物研究所，烏魯木齊 830004)

復方卡森顆粒為新疆維吾爾醫學專科學校直屬醫院院內制劑，是按照維吾爾醫理論組方的維藥復方制劑。處方由玫瑰花、小茴香、黃瓜子和葫蘆子仁等藥材組成，具有通滯利肝、利尿消腫的功效，在新疆維吾爾自治區維吾爾醫院和新疆維吾爾醫學專科學校直屬醫院臨床應用多年，用于治療肝炎。該品種原醫療機構制劑標準處方組成明確，但制備工藝參數不明確，且質量標準為院內制劑內部標準，只有玫瑰花的薄層色譜定性鑒別，質量可控性差，易使成品質量差異較大，從而影響其臨床治療效果。為充分發揮民族醫藥的療效優勢，遵循維吾爾醫用藥理論，按照中藥新藥研究的技術要求及《中華人民共和國藥典》2020年版的規定[1]，運用現代先進制藥技術和生產工藝，制成特色鮮明、劑型合理、使用方便的復方卡森顆粒，并采用現代質量控制研究方法，對復方卡森顆粒的制劑工藝和質量標準進行了系統的研究，保證了該制劑的可控性、有效性和安全性，為我區維吾爾新藥研究和開發奠定了基礎，也為推進民族醫藥現代化做出積極貢獻。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器 U3000高效液相色譜儀(Thermo Fisher Scientific)；BP211D電子分析天平(Sartorius，感量：0.01 mg)；SK3300H型超聲清洗儀(頻率59 kHz，功率160 W，上海科導超聲儀器有限公司)；DT-500A型電子計數天平(常熟市金羊砝碼儀器有限公司金羊天平儀器廠，感量：0.01 g)；WFH-201B紫外透射反射儀(上海精科實業有限公司)；SP-20E型全自動點樣儀(上海科哲生化科技有限公司)；DHG-9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)。

1.1.2試藥 沒食子酸(批號：100831-201204，純度89.9%)、茴香醛(批號：110838-201106)、玫瑰花對照藥材(批號：121508-200702)均來源中國食品藥品檢定研究院。乳糖(批號：20140008)為上海華茂藥業有限公司生產；糊精(批號：140310)、可溶性淀粉(批號：131209)為陜西奧克藥用輔料有限公司生產；微晶纖維素(批號：140226)為安徽山河藥用輔料股份有限公司生產。復方卡森顆粒，批號：20170418，20170426，20170428，由新疆西部加斯特藥業有限公司提供。甲醇為美國Fisher公司產色譜純，其他試劑均為國產分析純。

1.2方法

1.2.1復方卡森顆粒成型工藝條件的優選 本方為維吾爾藥復方制劑，前期以玫瑰花中沒食子酸為指標性成份，篩選和優化了水提取、除雜、減壓濃縮和干燥工藝，最終得干膏粉，溶解性相對較好。但中藥復方藥粉大都具有不同程度的吸潮性，故選用具有防潮作用的輔料作為制劑的賦形劑具有重要的意義[2-3]。

(1)吸濕率的測定。將底部裝有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器置于25 ℃的恒溫培養箱內恒溫24 h，使干燥器內的相對濕度達75%[4]。取浸膏粉適量，分別與乳糖、糊精、淀粉和微晶纖維素按1：1比例混合，取適量置于已干燥恒重的稱量瓶底部，厚度約2 mm，準確稱定質量后，置于上述玻璃干燥器內(稱量瓶蓋揭開)于25 ℃保存，放置168 h定時稱質量(6，12，24，48，72，96，120，144，168 h)，計算吸濕百分率，吸濕百分率(%)=(吸濕后的質量-吸濕前的質量)/吸濕前的質量×100。

(2)混合輔料的選擇。按表1稱取規定量的浸膏粉與混合輔料混勻，用適量80%乙醇做潤濕劑制軟材，制粒，烘干，過篩整粒。不同處方要求易制粒整核測定顆粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸濕性，并以各指標的綜合評分評價，優選最佳混合輔料[5-6]。綜合評分=(最小吸濕率值/吸濕率值)×25+(成型性值/最大成型性值)×25+(溶化性值/最大溶化性值)×20+(堆密度值/最大堆密度值)×15+(最小休止角值/休止角值)×15。

(3)混合輔料比例的選擇。稱取規定量的浸膏粉與混合輔料混勻，用適量的80%乙醇做潤濕劑制軟材，制粒，烘干，過篩整粒。測定顆粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸濕性，并以各指標的綜合評分評價，優選最佳混合輔料比例。見表2。

表2 不同混合輔料比例的篩選

(4)浸膏粉和混合輔料比例的選擇。稱取規定量的浸膏粉與混合輔料混勻，用適量的80%乙醇做潤濕劑制軟材，制粒，烘干，過篩整粒。測定顆粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸濕性，并以各指標的綜合評分評價，優選最佳浸膏粉和混合輔料比例。見表3。

表3 不同比例浸膏粉與混合輔料的篩選

(5)潤濕劑的選擇。稱取規定量的浸膏粉與混合輔料混勻，分別用適量60%，70%，85%，87%，90%乙醇做潤濕劑制軟材，制粒，烘干，過篩整粒。測定顆粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸濕性，并以各指標的綜合評分評價，優選最佳潤濕劑。見表4。

(6)驗證實驗。為進一步確認工藝穩定可行，按上述工藝進行了中試放大生產，并按《中華人民共和國藥典》2020年版四部附錄0104顆粒劑項下規定，對3批中試樣品進行檢查。

1.2.2復方卡森顆粒質量標準研究

(1)薄層色譜鑒別。①玫瑰花鑒別：取本品3 g，加乙醇30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液；另取玫瑰花對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液；取處方中缺玫瑰花陰性樣品，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(通則0502)實驗，吸取上述兩種溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水(3：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，熱風吹干，放置10 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視[7-8]。

②小茴香鑒別：取本品100 g，照揮發油測定法(2020年版《中華人民共和國藥典》四部通則2204)實驗，自測定器上端加水使充滿刻度部分并溢流入燒瓶時為止，加入正己烷2 mL，加熱回流1.5 h，分取正己烷層，作為供試品溶液；另取茴香醛對照品，加無水乙醇制成每毫升含1 μL的溶液，作為對照品溶液；取處方中缺小茴香陰性樣品，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(通則0502)實驗，吸取供試品溶液10 μL、對照品溶液1 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(17：3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，放置20 min，日光下檢視[9-11]。

(2)沒食子酸含量測定。①色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動相A，0.05%磷酸為流動相B，進行梯度洗脫(0.00～15.00 min，3%A；15.00～20.00 min，3%→90%A；20.00～25.00 min，90%→3%A；25.00～35.00 min，3%A)[12-13]；檢測波長：272 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1。

表4 不同潤濕劑的篩選

②對照品溶液的制備：精密稱取沒食子酸對照品適量，加水制成每毫升含沒食子酸50 μg的溶液，即得。

③供試品溶液制備方法的考察：Ⅰ供試品溶液處理溶劑的確定：供試品溶液的制備：取本品約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入水和流動相50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(電壓：220 V，頻率：50 Hz)30 min，放冷，再次稱定質量，并用相應的溶劑補足減失質量，搖勻，濾過，取續濾液即得。每種溶劑平行處理兩份。依法測定沒食子酸的含量，結果用水處理的樣品含量為9.46 mg·g-1，用流動相處理含量為9.30 mg·g-1，用水作溶劑處理樣品時，樣品中沒食子酸含量較大，結合藥典和文獻中的方法，選擇用水作為處理樣品的溶劑[14-15]。

Ⅱ 供試品溶液的處理方式及時間的確定。供試品溶液的制備：取本品約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入水50 mL，密塞，稱定質量，分別回流提取和超聲提取(電壓：220 V，頻率：50 Hz)45，60，90，120 min，放冷，再次稱定質量，并用水補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液即得。每種提取方式和時間平行處理兩份。依法測定沒食子酸的含量，結果相同提取時間下，回流提取均比超聲提取含量高；隨著回流提取時間的增加，含量也隨之增加，回流1.5 h后含量也不再增加，故確定供試品溶液的處理方式：回流提取，提取時間：1.5 h。

④專屬性考察：按照處方工藝制備不含玫瑰花的樣品作為陰性樣品，將沒食子酸對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進行測定，記錄色譜圖。

⑤線性關系考察：精密稱取沒食子酸對照品適量，加水制成每毫升含500 μg 的溶液，搖勻，即得對照品儲備液。分別吸取上述儲備液0.25，0.5，1，1.25，2 mL，置于10 mL量瓶中，加水稀釋制成不同濃度的對照品溶液，分別精密吸取上述溶液各10 μL注入液相色譜儀，進行線性關系考察。

⑥精密度：Ⅰ儀器精密度：取同一份對照品溶液，連續進樣6次。

Ⅱ 重復性：取本品約0.25 g，精密稱定，平行6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入水50 mL，密塞，稱定質量，回流提取1.5 h，放冷，再次稱定質量，并用水補足減失質量，搖勻，濾過，取續濾液即得。按上述含量測定方法測定。

Ⅲ中間精密度：取本品，在不同日期，經不同人員按“2.2.2.⑥.Ⅱ”項下供試品處理方法進行制備，按上述含量測定方法測定。

⑦對照品和供試品溶液的穩定性：取對照品溶液和重復性1#供試品溶液置于冰箱4 ℃冷藏，分別放置不同時間，按上述含量測定方法測定。

⑧加樣回收率：取本品約0.125 g，精密稱定，平行6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入沒食子酸對照品溶液(C=1.223 mg·mL-1，純度89.9%)1.0 mL，再精密加入水49 mL，按“2.2.2.⑥.Ⅱ”項下供試品處理方法進行制備，按上述含量測定方法測定。

⑨3批樣品含量測定結果：取3批樣品，采用“1.2.2(2)③”建立的供試品溶液的制備方法制備，并按含量測定方法測定。

2 結果

2.1成型工藝研究

2.1.1吸濕率 各樣品放置168 h后，浸膏粉的吸濕百分率高達23.97%，且吸濕現象非常嚴重；而浸膏粉與各輔料混合后的吸濕百分率大大降低，其中乳糖的抗濕能力最強，但浸膏粉與乳糖混合物的液化現象較其他輔料混合物嚴重，綜合考慮選擇使用混合輔料作為本制劑輔料使用。見圖1。

圖1 浸膏粉與不同輔料的混合物吸濕曲線

2.1.2混合輔料的選擇 按各處方的綜合評分，混合輔料乳糖：糊精=1：1的綜合評分最高，確定混合輔料為乳糖和糊精。見圖2。

圖2 不同混合輔料篩選結果

2.1.3混合輔料比例的選擇 按各處方的綜合評分，乳糖：糊精=1：1的綜合評分最高，確定混合輔料比例為乳糖：糊精為1：1。見圖3。

圖3 不同混合輔料比例的篩選結果

2.1.4浸膏粉和混合輔料比例的選擇 按各處方的綜合評分，浸膏粉：乳糖：糊精=2：1：1的綜合評分最高，確定浸膏粉和混合輔料比例為1：1。見圖4。

圖4 不同比例浸膏粉與混合輔料的篩選結果

2.1.5潤濕劑的選擇 由圖5不同潤濕劑結果可知，處方組成及比例為浸膏粉：乳糖：糊精=2：1：1，潤濕劑為75%乙醇的綜合評分最高，故確定潤濕劑為75%乙醇。

圖5 不同潤濕劑的篩選結果

2.1.6驗證實驗 3批樣品的溶化性、粒度、裝量差異等均符合規定。見表5。

2.2復方卡森顆粒質量標準研究

2.2.1薄層色譜鑒別 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖6。供試品薄層色譜圖中與對照品薄層色譜圖相應位置上，顯相同顏色的斑點，見圖7。

2.2.2沒食子酸含量測定 ①專屬性考察：陰性無干擾，此方法專屬性良好。見圖8。

表5 復方卡森顆粒檢查項結果

1.樣品；2.樣品；3.樣品；4.玫瑰花對照藥材。

1.樣品；2.樣品；3.樣品；4.茴香醛對照。

②線性關系考察：沒食子酸對照品溶液的濃度在11.25～89.97 μg·mL-1范圍內，與其峰面積顯示有良好的線性關系，回歸方程：Y=0.396 3X+0.350 5，r=0.999 9。

圖8 沒食子酸對照品(A)、樣品(B)及陰性品(C) HPLC色譜圖

③精密度：Ⅰ儀器精密度：峰面積均值為18.315，RSD為0.06%，儀器精密度良好。Ⅱ重復性：含量均值為8.56 mg·g-1，RSD為1.40%，建立的含量測定方法重復性良好。Ⅲ中間精密度：含量均值為8.51 mg·g-1，RSD為1.03%，建立的含量測定方法中間精密度良好。

④對照品和供試品溶液的穩定性：對照品溶液在26 h內的峰面積均值為18.243，RSD為0.58%；供試品溶液在21 h內的峰面積均值為17.312，RSD為0.003%，供試品溶液在21 h內穩定性良好。

⑤加樣回收率：回收率實驗結果符合要求。見表6。

⑥三批樣品含量測定：批號為20170418，20170426，20170428的樣品中，沒食子酸含量分別為8.82，9.55，9.37 mg·g-1，平均含量8.99 mg·g-1。

3 討論

醫院制劑臨床疾病治療工作中發揮著重要的作用，是新藥開發的基礎和重要來源。讓院內中藥制劑走向市場，開發成新藥，要求新制劑確有療效，安全無毒，具有嚴格的質控標準。新疆維吾爾醫學專科學校直屬醫院院內制劑復方卡森顆粒，質量標準只列入了性狀、玫瑰花的薄層鑒別及顆粒劑項下規定的檢查項，無其他藥材的鑒別及處方中特征成分的含量測定，標準較低，不能很好的控制本品的質量。因此，需要發揮臨床與基礎，多學科合作的優勢，對復方卡森顆粒進行全面研究，提高質量標準，使產品的質量更加的穩定可靠，從而擴大本品的用藥范圍，使其成功地走向市場。

表6 沒食子酸加樣回收率實驗

中藥浸膏粉易吸濕，吸濕后易導致顆粒變軟、化學成分發生變化、流動性降低、結塊甚至霉變，給中藥顆粒劑的生產和儲存帶來較大困難，甚至影響制劑的質量和療效。輔料作為藥物制劑的基礎材料和重要組成部分，對制劑的吸潮性有著明顯的影響。原院內制劑復方卡森顆粒制劑所用輔料為蔗糖，而通過篩選研究發現輔料選擇乳糖和糊精更為合理，減少了患者糖的攝入量，擴大了用藥人群。

本實驗對處方中的玫瑰花、小茴香、黃瓜子和葫蘆子仁等藥材進行了薄層色譜條件的摸索，發現黃瓜子、葫蘆籽仁等藥材均有陰性干擾，因此確定了玫瑰花和小茴香薄層色譜鑒別方法，并對鑒別方法分別進行了不同溫度(10，25，45 ℃)和濕度(45%，75%)的耐用性考察，結果玫瑰花和小茴香藥材薄層色譜鑒別方法耐用性均良好，重現性好，結果可靠。

由于本組方成分復雜，藥材有效成分和藥理作用的研究報道相對較少。在前期生產工藝指標性成分篩選基礎上，采用HPLC法，以沒食子酸為含量測定指標，對本品含量進行控制。參照2020版《中華人民共和國藥典》一部中地榆、廣棗、委陵菜、拳參等藥材中沒食子酸測定所用波長270～273 nm相近，故選擇272 nm作為沒食子酸含量測定用波長，選定用甲醇-0.05%磷酸系統進行測定。結果在此條件下沒食子酸保留時間較短，分離效果良好，陰性樣品溶液中其他成分對測定無干擾，符合測定要求。

本研究所建立的TLC 和HPLC 方法專屬性強、靈敏度高、重現性好，可用于復方卡森顆粒的質量控制。