熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染患者中的診斷分析

劉磊

（遼寧省阜新市第二人民醫(yī)院（阜新市婦產(chǎn)醫(yī)院）檢驗(yàn)科，遼寧 阜新 123000）

B族鏈球菌位于人體下消化道或者陰道，其成年人攜帶率較高，尤其是孕婦。B族鏈球菌可影響孕婦免疫功能與嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育，造成早產(chǎn)、流產(chǎn)，甚至導(dǎo)致腦膜炎、敗血癥等，不利于新生兒與孕婦健康[1]。因此，產(chǎn)前對(duì)B族鏈球菌感染進(jìn)行篩查尤為重要?；驕y(cè)序是診斷孕晚期B族鏈球菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但其對(duì)檢測(cè)技術(shù)與設(shè)備要求較高，目前尚無(wú)普及。細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)是B族鏈球菌的傳統(tǒng)檢測(cè)方式，但其檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，且靈敏度較低，其應(yīng)用受到一定限制[2]。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）法準(zhǔn)確率較高，且簡(jiǎn)便易行[3]。熒光定量PCR法打破了細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)的局限，其無(wú)需進(jìn)行培養(yǎng)，具有簡(jiǎn)便、快捷的優(yōu)勢(shì)，尤其適用于臨床大量樣本的篩查，可利用試劑盒對(duì)標(biāo)本直接進(jìn)行處理，受到廣大醫(yī)護(hù)人員的青睞。目前，臨床關(guān)于熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值比較研究較少?；诖?，本研究分析熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中的應(yīng)用，以期為臨床診治提供參考經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月至2019年1月于本院檢查的80例疑似B族鏈球菌感染孕晚期孕婦，年齡23～46歲，平均（35.24±2.21）歲；體重指數(shù)19.2～24.6 kg/m2，平均（22.31±0.63）kg/m2；孕周32～37周，平均（34.53±1.21）周；孕次1～3次，平均（1.02±0.25）次。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：B族鏈球菌感染患者經(jīng)基因測(cè)序確診；無(wú)妊娠期合并甲狀腺疾病或糖尿??；采集標(biāo)本前2周內(nèi)未應(yīng)用抗生素類藥物；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：陰道分泌物有衣原體感染、滴蟲(chóng)性陰道炎、外陰道假絲酵母菌等其他菌群感染；存在染色不良、涂片過(guò)厚等涂片不符合要求者；取樣前24 h內(nèi)接受過(guò)洗液或栓劑。

1.3 方法 ①標(biāo)本采集方式：應(yīng)用無(wú)菌拭子對(duì)孕婦陰道分泌物進(jìn)行采集，先將孕婦外陰過(guò)多分泌物擦去，使用無(wú)菌窺器使陰道暴露，在插入孕婦陰道后將無(wú)菌拭子旋轉(zhuǎn)1周，對(duì)陰道內(nèi)1/3處的分泌物進(jìn)行采集。②熒光PCR檢測(cè)：在標(biāo)本中加入1 mL緩沖液并進(jìn)行震蕩，離心，將下層沉淀取出，加入緩沖液，離心，下層沉淀重懸，加入核酸提取劑，破碎細(xì)胞后100℃離心10 min，取上清液，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，應(yīng)用熒光PCR檢測(cè)試劑盒（北京博爾誠(chéng)有限公司，ABI7500）進(jìn)行檢測(cè)。CT指標(biāo)＜36、熒光信號(hào)曲線呈S形時(shí)判為陽(yáng)性。細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)：在培養(yǎng)基上將標(biāo)本涂勻接種，進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為5%CO2，培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時(shí)間為24 h，根據(jù)培養(yǎng)后菌落的染色、形態(tài)等進(jìn)行鑒別。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，繪制ROC曲線得到AUC，檢驗(yàn)熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染診斷價(jià)值：AUC＜0.5無(wú)價(jià)值，0.5～0.7診斷價(jià)值較低，0.7～0.9診斷價(jià)值中等，＞0.9診斷價(jià)值高，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果 基因測(cè)序結(jié)果顯示，80例孕婦中，陽(yáng)性52例，陰性28例；熒光定量PCR法檢出真陽(yáng)性52例，假陰性0例，假陽(yáng)性1例，真陰性27例；細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)檢出真陽(yáng)性44例，假陰性8例，假陽(yáng)性8例，真陰性20例，見(jiàn)表1。

表1 兩種檢測(cè)方式診斷結(jié)果Table 1 Diagnostic results of two detection methods

2.2 診斷效能 以基因測(cè)序作為金標(biāo)準(zhǔn)，熒光定量PCR法對(duì)B族鏈球菌感染的診斷靈敏度、準(zhǔn)確性、特異度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩種檢測(cè)方式診斷效能Table 2 Diagnostic efficacy of two detection methods

2.3 熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)診斷價(jià)值 將2.2中兩種診斷方式作為檢驗(yàn)變量，將陰陽(yáng)性作為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線得到熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染的AUC分別為0.982、0.780，均＞0.75，有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，且以熒光定量PCR法效能更高，見(jiàn)表3。ROC曲線圖見(jiàn)圖1。

圖1 熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染的ROC曲線圖Figure 1 The ROC curve of fluorescence quantitative PCR and bacterial culture for diagnosis of group B streptococcus infection in the third trimester of pregnancy

表3 熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)診斷價(jià)值Table 3 Diagnostic value of fluorescence quantitative PCR and bacterial culture detection

3 討論

女性陰道中存在多種微生物菌落，其間相互協(xié)調(diào)與制約，從而平衡陰道微生態(tài)系統(tǒng)，當(dāng)菌群失調(diào)時(shí)可引起陰道感染。其中，B族鏈球菌感染較為常見(jiàn)，可能對(duì)孕婦妊娠進(jìn)展、胚胎發(fā)育等造成較大影響，誘發(fā)產(chǎn)褥感染、新生兒腦膜炎等，嚴(yán)重威脅新生兒與孕婦生命健康[4]。因此，在產(chǎn)前開(kāi)展篩查具有重要意義，臨床應(yīng)積極探索結(jié)果直觀、耗時(shí)短、操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)方式，及時(shí)檢出B族鏈球菌感染，從而指導(dǎo)臨床治療，有效保證產(chǎn)婦及新生兒安全[5]。

B族鏈球菌感染的傳統(tǒng)檢測(cè)方式為細(xì)菌培養(yǎng)法，但具有重復(fù)性低、干擾多、操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn)。由于細(xì)菌培養(yǎng)法需依賴肉眼對(duì)菌落狀態(tài)進(jìn)行觀察，且其菌落污染率較高，部分B族鏈球菌感染無(wú)法有效檢出，降低陽(yáng)性率，對(duì)診斷結(jié)果造成影響，不利于臨床后續(xù)治療。加之細(xì)菌培養(yǎng)法中培養(yǎng)過(guò)程比較繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，容易延誤病情[6]。熒光定量PCR法是一種新型檢測(cè)方式，打破了傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法的局限性，無(wú)需進(jìn)行培養(yǎng)，在試劑盒輔助下直接處理標(biāo)本，具有簡(jiǎn)便易行的優(yōu)勢(shì)，逐漸受到廣泛應(yīng)用[7]。同時(shí)，熒光定量PCR法可將熒光標(biāo)記和擴(kuò)增應(yīng)用于B族鏈球菌特異性核酸序列，在對(duì)B族鏈球菌感染進(jìn)行診斷時(shí)，使微量病原菌被檢出，提升診斷的準(zhǔn)確性。相比較于細(xì)菌培養(yǎng)法，熒光定量PCR法無(wú)需進(jìn)行接種、培養(yǎng)、鑒別等操作，流程簡(jiǎn)化，操作較為簡(jiǎn)便，耗時(shí)較短，縮短孕婦等待時(shí)間，且其檢驗(yàn)的重復(fù)性與工作效率更高[8]。另外，標(biāo)本的保存環(huán)境基本不影響熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果，死亡的B族鏈球菌亦可在該方式下被檢出，以提升檢測(cè)準(zhǔn)確率，有利于促進(jìn)孕婦早期用藥干預(yù)進(jìn)程與效果，從而保障孕婦與胎兒的安全與健康。另外，熒光定量PCR法在早產(chǎn)、胎膜早破等緊急情況下可對(duì)其進(jìn)行快速檢測(cè)，有利于減少新生兒的發(fā)病與死亡。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以基因測(cè)序作為金標(biāo)準(zhǔn)，熒光定量PCR法對(duì)B族鏈球菌感染的診斷靈敏度、準(zhǔn)確性、特異度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)；繪制ROC曲線得到熒光定量PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染的AUC分別為0.982、0.780，均＞0.75，有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，且以熒光定量PCR法效能更高。結(jié)果提示，熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中診斷效能較高，可有效應(yīng)用于早期預(yù)防治療。陳明發(fā)等[9]研究表明，熒光定量PCR法可有效將B族鏈球菌感染病例檢出，與本研究結(jié)果相符。向燕群等[10]研究中，試驗(yàn)組應(yīng)用熒光PCR檢測(cè)B族鏈球菌感染，對(duì)照組應(yīng)用細(xì)菌培養(yǎng)法，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組診斷準(zhǔn)確率為準(zhǔn)確率為97.4%，高于對(duì)照組的76.9%，說(shuō)明熒光PCR技術(shù)陽(yáng)性檢出率較高，與本研究結(jié)果一致。且其結(jié)果中表明實(shí)驗(yàn)組妊娠結(jié)局優(yōu)于對(duì)照組，說(shuō)明熒光定量PCR法對(duì)預(yù)防產(chǎn)婦發(fā)生不良妊娠結(jié)局有積極作用。

綜上所述，熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中診斷效能較高，可有效應(yīng)用于臨床早期診斷與預(yù)防治療孕晚期B族鏈球菌感染，保證孕婦與胎兒的安全與健康。