PLEK2 和β- 連接蛋白在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及臨床意義

劉秀華，楊韻，葉美治

廈門市海滄醫(yī)院病理科 （福建廈門 361000）

結(jié)直腸癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率和病死率均較高，嚴(yán)重威脅人們的生命健康[1]。目前，臨床治療結(jié)直腸癌患者的方式仍以手術(shù)加新輔助化療及分子靶向治療為主，但術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移常導(dǎo)致治療失敗。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，并不是所有的結(jié)直腸癌均會發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，部分患者的癌組織已經(jīng)浸潤至腸壁漿膜層，但并未發(fā)現(xiàn)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；相反，部分患者的癌組織雖然只浸潤至腸壁肌層，但已發(fā)生了區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此，目前部分臨床研究重點(diǎn)關(guān)注于導(dǎo)致淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原因和機(jī)制。

研究證明，PLEK2在人類多種腫瘤中呈高表達(dá)[2-4]，且其高表達(dá)可能與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展相關(guān)[2]。相關(guān)研究表明，結(jié)直腸癌的發(fā)生與Wnt 信號通路的異常調(diào)節(jié)有關(guān)，而β-連接蛋白（β-catenin）是Wnt 信號通路的關(guān)鍵分子，其在結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制中起重要作用[5]。本研究通過分析PLEK2、β-catenin 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，探討其在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用，以期為結(jié)直腸癌的分子靶向治療提供新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及分組

收集我院病理科2015年1月至2020年5月間存檔的浸潤至結(jié)直腸漿膜層的結(jié)直腸癌組織的石蠟包埋組織標(biāo)本和相應(yīng)的臨床病理資料共154例，其中男86例，女68例；年齡46～79歲，中位年齡59.43歲；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移79例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例；病理分級按WHO2010版結(jié)直腸癌的分級方法，Ⅰ級21例，Ⅱ級89例，Ⅲ級44例。另選取正常結(jié)直腸上皮組織30例（來自結(jié)直腸癌切除標(biāo)本的陰性切緣）做對照。所有患者在取材前均未接受放化療、免疫及分子靶向治療。

1.2 試劑

濃縮型兔抗人PLEK2多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術(shù)公司；即用型鼠抗人β-catenin 單克隆抗體、EnVision 兩步法免疫組化反應(yīng)試劑盒、PBS 磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、DAB 顯色試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.3 方法及步驟

于顯微鏡下定位組織標(biāo)本后，于對應(yīng)蠟塊位置采集芯片組織，放置于芯片模具內(nèi)，二次包埋后，制成組織芯片微陣列，3 μm 連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)EnVision 兩步法染色，抗PLEK2一抗工作濃度均為1∶400，抗β-catenin 工作濃度為1∶100，PBS 磷酸鹽緩沖液代替一抗做陰性對照，嚴(yán)格按照試劑盒說明書完成染色步驟。

1.4 結(jié)果判斷

PLEK2 陽性表達(dá)定位于胞漿，胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，每例組織隨機(jī)計(jì)數(shù)500 個以上細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，≥10%為陽性。β-catenin 陽性表達(dá)定位于胞質(zhì)/胞核，結(jié)果判讀同上。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PLEK2、β-catenin 在結(jié)直腸組織中的表達(dá)

結(jié)直腸癌組織中的PLEK2陽性表達(dá)率高于正常結(jié)直腸上皮組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中的PLEK2陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但不同組織學(xué)分級結(jié)直腸癌組織的PLEK2陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；結(jié)直腸癌組織中的β-catenin 陽性表達(dá)率高于正常結(jié)腸上皮組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中的β-catenin 陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且不同組織學(xué)分級結(jié)直腸癌組織的β-catenin 陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。PLEK2、β-catenin 的免疫組化染色圖見圖1、2。

表1 PLEK2、β-catenin 在結(jié)直腸組織中的表達(dá)

圖1 PLEK2 免疫組化染色（×200）

圖2 β-catenin 免疫組化染色（×200）

2.2 PLEK2和β-catenin 的相關(guān)性

Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中PLEK2的表達(dá)與β-catenin 的表達(dá)成正相關(guān)（P＜0.05），見表2。

表2 PLEK2和β-catenin 的相關(guān)性

3 討論

3.1 PLEK2的表達(dá)與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

本研究所選擇的標(biāo)本均為浸潤至結(jié)直腸漿膜層的腺癌組織，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組織中的PLEK2陽性表達(dá)率高于正常結(jié)直腸上皮組織，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中的PLEK2陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織，表明PLEK2參與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程。Zhang 等[3]采用腫瘤基因組圖譜和組織基因型表達(dá)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PLEK2表達(dá)水平上調(diào)與肺腺癌的細(xì)胞侵襲、DNA 損傷及DNA 修復(fù)成正相關(guān)。Liu 等[4]在骨肉瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，PLEK2的促腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移作用是通過激活上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程實(shí)現(xiàn)的。本研究與上述研究結(jié)果相似，表明PLEK2參與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程，其高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。

3.2 β-catenin 的表達(dá)與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的研究證明Wnt/β-catenin 信號傳導(dǎo)通路在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用，而β-catenin 作為該通路上重要的轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞內(nèi)呈高表達(dá)[6]。β-catenin定位于細(xì)胞膜，在細(xì)胞癌變過程中逐漸游離并聚集于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF 結(jié)合，促進(jìn)下游靶基因的激活與異常轉(zhuǎn)錄[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，正常結(jié)直腸上皮組織中β-catenin 表達(dá)定位于細(xì)胞膜，而在結(jié)直腸癌組織中主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，與金雯等[8]研究結(jié)果相似。本研究結(jié)果顯示，β-catenin 在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率高于正常結(jié)腸上皮組織，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織，且其表達(dá)隨著組織分級增高而增強(qiáng)，表明其異常高表達(dá)與腫瘤的分化、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

3.3 PLEK2與β-catenin 的相關(guān)性

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多基因參與、多步驟協(xié)同完成的過程。目前國內(nèi)外關(guān)于PLEK2在這一過程中所發(fā)揮作用的研究較少。本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中PLEK2的過表達(dá)與β-catenin 的過表達(dá)成正相關(guān)（P＜0.05），兩者具有協(xié)同作用，提示PLEK2在結(jié)直腸癌組織中過表達(dá)促進(jìn)了β-catenin 的活性，從而激活了Wnt/β-catenin 信號傳導(dǎo)通路，進(jìn)而促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。但PLEK2在Wnt/β-catenin 信號傳導(dǎo)通路中如何協(xié)同β-catenin 促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移還需要分子生物學(xué)的進(jìn)一步研究。

綜上所述，PLEK2、β-catenin 在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，并且兩者協(xié)同作用可能是通過Wnt 信號通路促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，提示PLEK2可作為結(jié)直腸癌治療的潛在靶點(diǎn)。