PLEK2 和β- 連接蛋白在結直腸癌轉移中的作用及臨床意義

劉秀華，楊韻，葉美治

廈門市海滄醫院病理科 （福建廈門 361000）

結直腸癌是臨床常見的消化系統惡性腫瘤，發病率和病死率均較高，嚴重威脅人們的生命健康[1]。目前，臨床治療結直腸癌患者的方式仍以手術加新輔助化療及分子靶向治療為主，但術后發生復發或轉移常導致治療失敗。臨床實踐發現，并不是所有的結直腸癌均會發生淋巴結轉移，部分患者的癌組織已經浸潤至腸壁漿膜層，但并未發現區域淋巴結轉移；相反，部分患者的癌組織雖然只浸潤至腸壁肌層，但已發生了區域淋巴結轉移。因此，目前部分臨床研究重點關注于導致淋巴結轉移的原因和機制。

研究證明，PLEK2在人類多種腫瘤中呈高表達[2-4]，且其高表達可能與腫瘤的侵襲、轉移及進展相關[2]。相關研究表明，結直腸癌的發生與Wnt 信號通路的異常調節有關，而β-連接蛋白（β-catenin）是Wnt 信號通路的關鍵分子，其在結直腸癌的發病機制中起重要作用[5]。本研究通過分析PLEK2、β-catenin 在結直腸癌中的表達，探討其在結直腸癌轉移中的作用，以期為結直腸癌的分子靶向治療提供新的靶點。

1 材料與方法

1.1 標本來源及分組

收集我院病理科2015年1月至2020年5月間存檔的浸潤至結直腸漿膜層的結直腸癌組織的石蠟包埋組織標本和相應的臨床病理資料共154例，其中男86例，女68例；年齡46～79歲，中位年齡59.43歲；存在淋巴結轉移79例，無淋巴結轉移75例；病理分級按WHO2010版結直腸癌的分級方法，Ⅰ級21例，Ⅱ級89例，Ⅲ級44例。另選取正常結直腸上皮組織30例（來自結直腸癌切除標本的陰性切緣）做對照。所有患者在取材前均未接受放化療、免疫及分子靶向治療。

1.2 試劑

濃縮型兔抗人PLEK2多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術公司；即用型鼠抗人β-catenin 單克隆抗體、EnVision 兩步法免疫組化反應試劑盒、PBS 磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、DAB 顯色試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術公司。

1.3 方法及步驟

于顯微鏡下定位組織標本后，于對應蠟塊位置采集芯片組織，放置于芯片模具內，二次包埋后，制成組織芯片微陣列，3 μm 連續切片，采用免疫組織化學EnVision 兩步法染色，抗PLEK2一抗工作濃度均為1∶400，抗β-catenin 工作濃度為1∶100，PBS 磷酸鹽緩沖液代替一抗做陰性對照，嚴格按照試劑盒說明書完成染色步驟。

1.4 結果判斷

PLEK2 陽性表達定位于胞漿，胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性，每例組織隨機計數500 個以上細胞，陽性細胞數＜10%為陰性，≥10%為陽性。β-catenin 陽性表達定位于胞質/胞核，結果判讀同上。

1.5 統計學處理

采用SPSS 16.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，相關性采用Spearman 秩相關檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PLEK2、β-catenin 在結直腸組織中的表達

結直腸癌組織中的PLEK2陽性表達率高于正常結直腸上皮組織，差異有統計學意義（P＜0.05）；存在淋巴結轉移的結直腸癌組織中的PLEK2陽性表達率高于無淋巴結轉移的結直腸癌組織，差異有統計學意義（P＜0.05）；但不同組織學分級結直腸癌組織的PLEK2陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；結直腸癌組織中的β-catenin 陽性表達率高于正常結腸上皮組織，差異有統計學意義（P＜0.05）；存在淋巴結轉移的結直腸癌組織中的β-catenin 陽性表達率高于無淋巴結轉移的結直腸癌組織，差異有統計學意義（P＜0.05）；且不同組織學分級結直腸癌組織的β-catenin 陽性表達率比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。PLEK2、β-catenin 的免疫組化染色圖見圖1、2。

表1 PLEK2、β-catenin 在結直腸組織中的表達

圖1 PLEK2 免疫組化染色（×200）

圖2 β-catenin 免疫組化染色（×200）

2.2 PLEK2和β-catenin 的相關性

Spearman 秩相關檢驗結果顯示，結直腸癌組織中PLEK2的表達與β-catenin 的表達成正相關（P＜0.05），見表2。

表2 PLEK2和β-catenin 的相關性

3 討論

3.1 PLEK2的表達與結直腸癌轉移的關系

本研究所選擇的標本均為浸潤至結直腸漿膜層的腺癌組織，發現結直腸癌組織中的PLEK2陽性表達率高于正常結直腸上皮組織，存在淋巴結轉移的結直腸癌組織中的PLEK2陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移的結直腸癌組織，表明PLEK2參與結直腸癌的發生、發展及轉移過程。Zhang 等[3]采用腫瘤基因組圖譜和組織基因型表達試驗發現，PLEK2表達水平上調與肺腺癌的細胞侵襲、DNA 損傷及DNA 修復成正相關。Liu 等[4]在骨肉瘤的研究中發現，PLEK2的促腫瘤侵襲、轉移作用是通過激活上皮間質轉化過程實現的。本研究與上述研究結果相似，表明PLEK2參與腫瘤的轉移過程，其高表達可能促進腫瘤的轉移。

3.2 β-catenin 的表達與結直腸癌轉移的關系

隨著分子生物學技術的發展，越來越多的研究證明Wnt/β-catenin 信號傳導通路在結直腸癌的發生、發展及轉移過程中發揮著重要的作用，而β-catenin 作為該通路上重要的轉錄因子在細胞內呈高表達[6]。β-catenin定位于細胞膜，在細胞癌變過程中逐漸游離并聚集于細胞質和細胞核中，與轉錄因子TCF/LEF 結合，促進下游靶基因的激活與異常轉錄[7]。本研究發現，正常結直腸上皮組織中β-catenin 表達定位于細胞膜，而在結直腸癌組織中主要表達在細胞質和細胞核，與金雯等[8]研究結果相似。本研究結果顯示，β-catenin 在結直腸癌組織中的陽性表達率高于正常結腸上皮組織，在淋巴結轉移結直腸癌組織中的陽性表達率高于無淋巴結轉移的結直腸癌組織，且其表達隨著組織分級增高而增強，表明其異常高表達與腫瘤的分化、侵襲、轉移密切相關。

3.3 PLEK2與β-catenin 的相關性

腫瘤的發生發展是多基因參與、多步驟協同完成的過程。目前國內外關于PLEK2在這一過程中所發揮作用的研究較少。本研究結果顯示，結直腸癌組織中PLEK2的過表達與β-catenin 的過表達成正相關（P＜0.05），兩者具有協同作用，提示PLEK2在結直腸癌組織中過表達促進了β-catenin 的活性，從而激活了Wnt/β-catenin 信號傳導通路，進而促進結直腸癌的發生、發展及轉移。但PLEK2在Wnt/β-catenin 信號傳導通路中如何協同β-catenin 促進腫瘤的侵襲、轉移還需要分子生物學的進一步研究。

綜上所述，PLEK2、β-catenin 在結直腸癌的發生、發展中起重要作用，并且兩者協同作用可能是通過Wnt 信號通路促進腫瘤的轉移，提示PLEK2可作為結直腸癌治療的潛在靶點。