甘薯脫毒苗快繁技術(shù)

劉 洋 陶春來 崔紹玉 石 穎 靳國旺 曹立娜 高君慧 張 丹 杜德玉

（廊坊市農(nóng)林科學(xué)院 河北 廊坊 065000）

甘薯屬于無性繁殖作物，在種植過程中容易受到病毒侵染，造成產(chǎn)量降低、品質(zhì)變差，近年來發(fā)現(xiàn)的甘薯復(fù)合病毒病(SPVD)更成為甘薯的毀滅性病害，對產(chǎn)量影響巨大，減產(chǎn)幅度高達(dá)50%~90%[1-2]。

1 脫毒培養(yǎng)

1.1 莖尖剝離。選取生長健碩、莖尖飽滿的甘薯植株，取頂芽2 cm，用水沖洗2~3 遍備用。于無菌環(huán)境中，將幼芽用75%的酒精浸泡30 s 后，再用2%的次氯酸溶液消毒5 min，浸泡于無菌水中備用。將莖尖置于解剖鏡下，用手術(shù)刀將莖段上可見葉片剝離，切取0.1~0.3 mm 的莖尖分生組織，接種到分化培養(yǎng)基(MS 培養(yǎng)基+1.0 mg/L 6BA+0.5 mg/L IAA)上。于27 ℃±1 ℃、光強3 000 lx、每天13 h 光照處理條件下培養(yǎng)，誘導(dǎo)芽的形成。

1.2 成苗。在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20 d，待莖尖膨大變綠后，將其轉(zhuǎn)入MS 培養(yǎng)基上培養(yǎng)成苗，30 d 后將小苗轉(zhuǎn)入MS 培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)。

1.3 病毒檢測。組培苗擴繁后，長至5~6 片葉時進(jìn)行病毒檢測。采用RT-PCR 檢測[3]或甘薯病毒芯片快速檢測方法，針對甘薯褪綠矮化病毒(SPCSV)、甘薯羽狀斑駁病毒(SPFMV)、甘薯潛隱病毒(SPLV)、甘薯曲葉病毒(SPLCV)及甘薯病毒G(SPVG)等甘薯主要病毒進(jìn)行檢測。

1.4 組培苗擴繁。選取脫毒成功長至5~7 片葉的脫毒苗，在無菌環(huán)境中截取2 cm 左右莖段，每莖段須有2 ~ 3 個節(jié)，轉(zhuǎn)入MS 培養(yǎng)基上，于溫度27 ℃±1 ℃、光強3 000 1x、每天光照13 h 條件下培養(yǎng)，每30~40 d 擴繁1 次。

2 移栽馴化

選擇地勢高燥、通風(fēng)向陽、土壤肥沃疏松，并且3 年以上沒有種過甘薯且無根腐病、黑斑病、莖線蟲病等土傳病害的溫室進(jìn)行脫毒苗移栽馴化。溫室上下通風(fēng)口及入口須安裝60 目的防蟲網(wǎng)，入口要設(shè)2 道防蟲紗門。整平育苗畦，畦寬120~150 cm。將配好的育苗土鋪在畦上，厚10 cm。育苗土成分為草炭土∶蛭石=1∶1，最佳濕度(體積含水量)為15%~25%。

選取培養(yǎng)室內(nèi)生長健壯、苗齡35~40 d 的脫毒苗放于溫室中，培養(yǎng)1 d，再將培養(yǎng)瓶蓋全部打開馴化2~3 d 后移栽至苗床，行距8 cm，株距5 cm。移植后及時澆定根水，在畦上支小拱棚。育苗棚溫度應(yīng)保持在25 ℃~32 ℃。栽后3 d 需進(jìn)行底部小通風(fēng)，5~7 d后將膜全部揭開。前2~5 d 于弱光下培養(yǎng)。

揭開膜后1~2 d 內(nèi)結(jié)合澆水噴灑75%的百菌清可濕性粉劑800~1 000 倍液或50%的多菌靈可濕性粉劑600~800 倍液。每隔10~15 d 噴施10%吡蟲啉可濕性粉劑2 000 倍液和19%溴氰蟲酰胺50 ml/畝。溫室內(nèi)懸掛黃色粘蟲板，粘蟲板懸掛在甘薯苗上方15~ 20 cm 處。每畝懸掛規(guī)格為25 cm ×30 cm 的黃板25~30 塊，或20 cm×30 cm 的黃板30~35 塊。主要防治蚜蟲、煙粉虱等蟲害。

3 溫室擴繁

脫毒苗移栽前進(jìn)行深耕起壟，耕地深度25 cm，起壟高度20 cm，壟距100 cm，壟頂寬40 cm，壟底寬80 cm。起壟同時需鋪設(shè)滴灌帶，鋪地膜。結(jié)合耕地每畝施用腐熟有機肥15 00~2 500 kg，N 8~10 kg，P2058~10 kg，K2O 15~18 kg。并且移栽前需對土壤進(jìn)行消毒，每畝地用50%多菌靈可濕性粉劑1~1.2 kg或50%甲基托布津可濕性粉劑4 ~ 5 kg，10%噻唑磷顆粒劑1 ~ 1.5 kg，均勻撒在土壤中。溫室地溫達(dá)到16 ℃進(jìn)行脫毒苗移栽，株距13~16 cm，行距20 cm，雙行栽種，栽植密度8 000~10 000 株。溫室溫度控制在25 ℃~32 ℃為宜。視墑情及時澆水，生長期每隔10 ~ 15 d 噴1 次10%吡蟲啉可濕性粉劑1 500 ~2 000 倍液和19%溴氰蟲酰胺50 ml/畝，防治蟲害。

4 網(wǎng)室擴繁

地溫平均在16 ℃以上可進(jìn)行網(wǎng)室移栽。網(wǎng)室移栽前進(jìn)行深耕起壟，耕地深度25 cm，起壟高度30 cm，壟距120 cm，壟頂寬50 cm，壟底寬90 cm。起壟同時需鋪設(shè)滴灌帶，鋪地膜。脫毒苗按株距18~25 cm，行距30 cm 栽于壟上，雙行栽種，栽植密度4 500~6 000 株。網(wǎng)室土壤施肥、消毒及移栽后田間管理與溫室擴繁相同。