細胞死活的檢測方法舉隅

曹建平

農業上，播種之前需要檢測種子的活力;醫學上，為了檢測某一男子的生育能力，需要測定精子的活力;為了檢驗藥物對腫瘤細胞的殺傷力，需要測定腫瘤細胞的存活率等等.由此可見，細胞死活的鑒定在生產生活和醫學研究方面具有重要意義.本文簡單介紹幾種檢測細胞死活的方法，并結合部分試題進行分析.

一、檢測方法舉隅

1.臺盼藍染色法

臺盼藍是一種陰離子型染料，它只能透過

受損細胞或死亡細胞的細胞膜（質膜），而正常的活細胞能加以排除，即死細胞著色，活細胞不著色.

2.熒光染色法

熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的動植物細胞的生活力鑒定染料.FDA本身不產生熒光，也無極性，能自由出入細胞.當FDA進入活細胞，被細胞內的脂酶分解，產生有極性的、能發出熒光的熒光素，熒光素不能自由透過活細胞膜，積累在細胞內，使細胞產生綠色熒光.

3.美藍染色法

美藍是一種無毒染料，氧化型為藍色，還原型為無色，主要用于檢測酵母細胞死活.由于活細胞具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化型變為無色的還原型，因此美藍染色后活的酵母細胞無色;而死細胞或代謝緩慢的老細胞，被染成藍色或淡藍色.

4.TTC染色法

氯化三苯基四氮唑（TTC）常用于檢測種子的生活力以及哺乳動物組織的缺血梗塞.TTC溶于水中形成無色溶液，細胞中的脫氫酶可將TTC作為受氫體，使之還原成不溶于水的紅色穩定的三苯基甲臢（TTF）. 如果腦組織細胞或胚種細胞死亡或生活力衰退，則不能染色或染色較淺.

5.質壁分離法

質壁分離法主要是檢測成熟的植物細胞有無活性的方法.因為活細胞的原生質層具有選擇透過性，所以活的成熟的植物細胞才可發生質壁分離.

6.細胞質流動法

細胞質流動需要消耗細胞代謝產生的能量，活細胞才進行細胞代謝，所以活細胞具有胞質環流現象.

二、經典試題賞析

例1 TTC法和紅墨水染色法是檢測種子活力常用方法，下列說法錯誤的是（? ）.

A.在TTC法中，胚被染成紅色的是具有活力的種子

B.紅墨水染色法中，胚不著色或著色很淺的是具有活力的種子

C.這兩種方法在原理上相似，均應用了活細胞的膜具有選擇透透過性

D.在TTC染色法中，被染成紅色較深的種子細胞呼吸可能較強

解析 由于TTC能被細胞呼吸產生的＼[H＼]還原成紅色不溶于水的物質，胚是種子的主要結構，故胚被染成紅色的是具有活力的種子，A選項正確;紅墨水中的色素不是活細胞需要的物質，如果胚被染色較深，說明胚細胞死亡;如果胚不著色或著色很淺，說明胚具有活力，B選項正確;兩種染色方法的原理不同，紅墨水利用了細胞膜的選擇透過性，根據“TTC染色法”可知，TTC染色的原理是TTC被細胞呼吸產生的＼[H＼]還原成不溶于水的紅色，利用的是細胞的代謝產物，C選項錯誤;細胞呼吸越強，產生的＼[H＼]越多，TTC被還原產生的紅色不溶于水的物質越多，D選項正確.

參考答案：C

例2 在進行植物體細胞雜交前，必須先獲得有活力的原生質體.測定原生質體活力的常用方法之一是熒光素雙醋酸酯（FDA）染色法，其基本原理是FDA本身無熒光，可自由通過細胞膜，經細胞內酯酶分解產生積累在細胞內并能發出綠色熒光的熒光素.相關敘述正確的是（? ）.

A.FDA是一種大分子物質，通過胞吞進入細胞

B.熒光素分子能以自由擴散的方式通過細胞膜

C.實驗中配制的FDA溶液是一種低滲溶液

D.綠色熒光的強度與原生質體的活力呈正相關

解析 根據FDA可自由通過細胞膜，確定其不是大分子物質，A選項錯誤;根據熒光素積累在細胞內，確定其不能自由通過細胞膜，B選項錯誤;因為原生質體沒有細胞壁，若為低滲溶液，則原生質體會吸水漲破，不能完成實驗，C選項錯誤;原生質體的活力越強，酯酶活性越強，產生的熒光素越多，D選項正確.

參考答案：D

例3? 下列有關不同實驗中細胞死活的推測，正確的是（? ）.

A.在高倍鏡下觀察黑藻細胞，發現細胞質緩慢流動，表明此時細胞是死細胞

B.用臺盼藍染液處理酵母菌，細胞被染成藍色，表明酵母細胞是活細胞

C.健那綠染液染色后的口腔上皮細胞，線粒體為藍綠色，表明細胞是活細胞

D.將洋蔥鱗片葉細胞置于質量分數為10%的蔗糖溶液中未發生質壁分離，則確定此細胞是死細胞

解析 活細胞的細胞質不停地流動，黑藻的細胞質流動，表明細胞是活細胞，流動緩慢可能是溫度太低造成，A選項錯誤;活細胞的細胞膜能控制物質進出，使臺盼藍不能透過細胞膜，酵母細胞被染成藍色，說明細胞死亡，B選項錯誤;健那綠染液是專一性

染線粒體的活細胞染料，可以將線粒體染成藍綠色，C選項正確;將洋蔥鱗片葉細胞置于質量分數為10%的蔗糖溶液中，細胞不能發生質壁分離，原因可能是該蔗糖溶液濃度低于細胞液濃度或細胞是死細胞，D選項錯誤.

參考答案：C

（收稿日期：2021-07-28）