氣相色譜-三重四極桿質譜法測定生濕面制品中單辛酸甘油酯的研究

陳 彬，季葛振，楊 俊,*，朱 云

1南通市食品藥品監督檢驗中心 (南通 226006)2南通市經濟技術開發區市場監督管理局 (南通 226009)

生濕面制品是指經過壓延成型并未經干燥處理的面制品，由于含水量高，若不進行保鮮處理則極易生長微生物，并腐敗變質[1]，引起腐敗的主要微生物是細菌和霉菌[2-4]。單辛酸甘油酯作為一種新型無毒高效廣譜防腐劑，對細菌和霉菌均有抑制效果[5]。它在人體內和脂肪一樣，能分解代謝，無任何積蓄和不良反應。中國與世界各國和組織對于單甘油酯類的使用都有相關的規定，GB 2760—2011規定：“單辛酸甘油酯常用作面制品防腐劑用于濕切面，其最大使用量為1.0 g/kg”。

目前，單辛酸甘油酯的檢驗方法主要有氣相色譜法[6]和單四級桿氣質聯用法[7]，而三重四級桿氣質聯用法檢測單辛酸甘油酯的方法未見報道。本文建立了氣相色譜-三重四極桿質譜測定食品中單辛酸甘油酯的方法，處理方法簡單高效，適用于生濕面制品中單辛酸甘油酯的測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890B型氣相色譜儀，7000D型三重四極桿質譜儀，美國Agilent公司；乙腈，色譜純，德國Merk公司；氯化鈉，分析純，國藥集團；無水硫酸鈉(使用前在650 ℃灼燒 4 h ，貯于干燥器中，冷卻后備用)，分析純，國藥集團；單辛酸甘油酯標準品，99.0%，美國NU-CHEK-PREP公司；Milli-Q高純水，由Millipore純水儀制備。

單辛酸甘油酯標準儲備液：稱取單辛酸甘油酯標準品1 mg，用丙酮溶解并定容至10 mL，配制成100 μg/mL的標準儲備液。

單辛酸甘油酯標準工作液：分別吸取單辛酸甘油酯標準儲備液0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL容量瓶中，用空白基質溶液定容至刻度，此工作液濃度為分別為0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。

1.2 儀器條件

1.2.1氣相色譜條件

色譜柱1為HP-5石英毛細管柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，色譜柱2為HP-5石英毛細管柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，色譜柱1和色譜柱2串接，兩柱間連接反吹氣路；進樣口溫度300 ℃；脈沖分流進樣，脈沖壓力50 psi，脈沖時間為0.2 min，分流比為(5∶1)，進樣量1 μL；載氣、反吹氣為高純氦氣；色譜柱1流量1.0 mL/min，色譜柱2流量1.2 mL/min；升溫程序為初始溫度150 ℃保持10 min，以20 ℃/min升至280 ℃，保持5 min。

1.2.2質譜條件

離子源：電子轟擊源，70 eV；離子源溫度280 ℃，接口溫度280 ℃；淬滅氣(高純氦氣)流量為2.25 mL/min，碰撞氣(高純氮氣)流量為1.5 mL/min。掃描方式為MRM多反應監測，單辛酸甘油酯離子對及碰撞能量見表1。

表1 單辛酸甘油酯離子對和碰撞能量

1.3 樣品前處理

稱取2 g樣品，加入10 mL乙腈+水(1+1，v/v)溶液10 mL，10 000 r/min勻漿1 min，加入2 g氯化鈉，渦旋混合，6 000 r/min離心5 min，取上層清液，加入1 g無水硫酸鈉，渦旋1 min，經0.22 μm有機濾膜過濾，按儀器工作條件進行測定。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的優化

根據文獻資料，單辛酸甘油酯沸點較高，活性較大，在襯管中容易產生吸附。試驗選擇UI超高惰性襯管，并設置進樣口溫度為300 ℃，色譜柱起始溫度為150 ℃，降低單辛酸甘油酯在進樣環節產生的吸附。

試驗考察了脈沖分流(5∶1)和脈沖不分流兩種進樣方式對單辛酸甘油酯峰形的影響，結果表明：脈沖不分流進樣方式，響應值高，但峰形較差，容易產生拖尾。脈沖分流(5∶1)進樣加快單辛酸甘油酯進入色譜柱的速度，同時減少該物質進入色譜柱的量，所得峰形對稱，響應值適中，見圖1。試驗選擇脈沖分流(5:1)進樣，脈沖壓力50 psi，脈沖時間0.2 min。

圖1 單辛酸甘油酯總離子流圖

2.2 質譜條件的優化

采用全掃描采集方式掃描50～300 amu范圍內單辛酸甘油酯質譜圖，見圖2。根據質譜圖中離子的豐度和質量數，為提高方法的靈敏度和選擇性，確定特征離子m/z 127.2、m/z 145.2作為前級離子。

圖2 單辛酸甘油酯全掃描質譜圖

選擇高純氮氣作為碰撞氣、高純氦氣作為淬滅氣，并分別設置氣流量為1.5 mL/min和2.25 mL/min，采用產物離子掃描方式，選擇并豐度較大的離子對m/z 127.2～57.2作為定量離子，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1作為定性離子，見圖3、圖4。按照歐盟的法規，試驗選擇了兩個母離子和三個子離子，滿足4點鑒定法要求。

圖3 前級離子m/z 127.2二級全掃描質譜圖

圖4 前級離子m/z 145.2二級全掃描質譜圖

根據選擇的離子對，試驗考察了碰撞能量為5、10、15、20 eV下，m/z 127.2～57.2、m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1三組離子對的響應值。結果表明：m/z 127.2～57.2在10 eV下有較好的響應，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1在5 eV下有較好的響應。因此，在上述碰撞能量下，以m/z 127.2～57.2作為基峰，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1相對于基峰的比率分別為13.2%和4.2%，輔助定性，見圖5。

圖5 單辛酸甘油酯定量和定性離子對

2.3 樣品前處理條件的優化

單辛酸甘油酯極性較強[6]，根據相似相溶原理，選擇強極性溶劑乙腈、水作為提取溶劑。試驗比較了乙腈、乙腈+水((1+1，v/v)的提取效果，結果表明：乙腈+水(1+1，v/v)滲透性能好，能進入生濕面制品內部，有利于充分提取樣品中的單辛酸甘油酯。

2.4 線性范圍和檢出限

試驗考察了樣品的基質效應，結果表明：生濕面制品有較強的基質增強效應，且能較好地改善峰形，提高靈敏度。使用空白基質溶液配制標準曲線：0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL。以m/z 127.2～57.2離子對峰面積為縱坐標，基質標準溶液濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，得出線性方程和相關系數，單辛酸甘油酯在該濃度范圍內有良好的線性關系，其相關系數不小于0.998。在空白生濕面制品中加入將一定質量濃度的標準品，使樣品中的加標量為25 μg/kg。經過前處理，經儀器分析后，單辛酸甘油酯m/z 127.2～57.2定量離子信噪比大于3，因此，本試驗檢出限為25 μg/kg。

2.5 回收率和精密度

選擇餃子皮空白樣品，以10、25、50 mg/kg 3個水平進行添加回收試驗。每個水平做6次平行試驗，計算方法的回收率和精密度。平均回收率分別為108.2%、92.1%、80.5%，相對標準偏差(RSD)分別為5.2%、3.3%、7.8%。結果表明：該方法回收率穩定，數據精密度高，能滿足日常檢驗中單辛酸甘油酯準確定量的要求。

3 結論

本文建立了生濕面制品中單辛酸甘油酯的檢測方法，選用乙腈+水(1+1，v/v)混合溶劑高速勻漿提取樣品中單辛酸甘油酯，優化了氣相色譜、三重四級桿質譜儀的各項參數，采用脈沖分流(5:1)進樣方式，選擇m/z 127.2～57.2作為定量離子，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1作為定性離子，兩對定性離子對相對于m/z 127.2～57.2的比率分別為13.2%和4.2%。本方法處理方法簡單高效，定性定量準確，靈敏度高，回收率高，重現性好，適用于生濕面制品中單辛酸甘油酯的測定。