10%噁嗪草酮懸浮劑高效液相色譜串聯質譜分析

石先羅，卞傳飛，董澤民，李保同

(1.江西農業大學 國土資源與環境學院，江西 南昌 330045；2.江西水利職業學院 水利工程系，江西 南昌 330013)

噁嗪草酮(Oxaziclomefone)，分子式為C20H19Cl2NO2，結構式見圖1[1]。該制劑是一種內吸傳導性的有機雜環類除草劑，主要適用于水稻稻田雜草的防除，可用于秧田、直播田及移栽田[2-3]。目前關于噁嗪草酮原藥和殘留檢測方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法等[4-5]。氣相色譜法由于噁嗪草酮具有沸點高，難以氣化，需要對樣品進行前處理費時費力。高效液相色譜法檢測30%噁嗪草酮懸浮劑則保留時間較長(15.3 min)，不利于快速開展[6]。本文在上述研究基礎上，建立了高效液相色譜串聯質譜檢測10%噁嗪草酮有效成分分析方法，該方法操作簡便，可用于檢測分析10%噁嗪草酮懸浮劑。

圖1 噁嗪草酮化學結構式Fig.1 Oxaziclomefone chemical structural formula

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

乙腈、甲酸(88%)均為色譜純；超純水；10 mg噁嗪草酮標樣(純度99.3%)，由北京曼哈格生物科技有限公司提供；10%噁嗪草酮懸浮劑，由山東先達農化股份有限公司提供。

Agilent-1260的高效液相色譜儀(HPLC)含配套全自動進樣器，Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色譜柱；Agilent-6120質譜儀(MS，含單級四級桿液質聯用儀)。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的配制 取噁嗪草酮標準樣品 10 mg(純度99.3%)溶于100 mL容量瓶，加入乙腈超聲波溶解、定容、搖勻，此溶液為100 mg/L噁嗪草酮儲備液[7]。用乙腈按梯度依次稀釋上述噁嗪草酮儲備液，至6個濃度梯度依次為4.0，1.0，0.5，0.1，0.01，0.001 mg/L。

1.2.2 試樣溶液的配制 準確稱取10%噁嗪草酮懸浮劑200 mg(精確至1 mg)，轉移至50 mL容量瓶，加入乙腈作為溶劑，置于實驗室超聲波儀助溶 5 min 以上直至完全溶解，后定容、搖勻，配制成 400 mg/L。取0.5 mL上述配制溶液置于50 mL容量瓶，加入乙腈定容，得到4 mg/L的噁嗪草酮試樣溶液，冷藏備用。

1.2.3 測定 將配制好的溶液過0.22 μm有機濾膜，在上述設定好的儀器條件下，待基線平穩后，按照進樣順序連續進樣，依次為標樣→試樣→試樣→標樣，得到10%噁嗪草酮色譜圖見圖2。

圖2 噁嗪草酮色譜圖Fig.2 Chromatogram of oxaziclomefonea.10%噁嗪草酮懸浮劑；b.標樣，質量濃度均為1 mg/L

1.2.4 計算 利用上述測得的標準樣品溶液和試樣溶液中噁嗪草酮峰面積，根據如下公式計算試樣溶液中噁嗪草酮質量分數(w2，%)：

(1)

式中A1——標準樣品中噁嗪草酮峰面積；

A2——試樣中噁嗪草酮峰面積；

M1——噁嗪草酮標準樣品質量，g；

M2——噁嗪草酮試樣質量，g；

w1——取99.3%為標準樣品質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的確定

為找出最佳峰型及最佳保留時間，利用1 mg/L噁嗪草酮標準溶液對色譜條件進行優化，根據文獻研究發現乙腈-水流動相能較好地分離出峰型，但是檢測過程中發現較多雜質峰干擾，目前主要是以添加磷酸調整pH值為主。本次實驗中發現采用 0.1% 的甲酸相對于0.1%磷酸能獲得更好的峰型且主峰與雜峰完全分離，較傳統方法提高了峰的對稱性及提高了反應靈敏度。

同時為了獲得更好的峰形，同時減少雜質干擾，對乙腈與0.1%甲酸的體積比進行了多次調整，結果見表1。

表1 不同體積比的乙腈-0.1%甲酸水溶液對噁嗪草酮標樣保留時間和峰面積的關系Table 1 Relationship between retention time andpeak area in acetonitrile-formic acid aqueous

由表1可知，當乙腈-0.1%甲酸體積比為60∶40時噁嗪草酮保留時間為15.715 min，當比例為 70∶30 時噁嗪草酮保留時間為7.714 min；當體積比為80∶20時，時間為4.226 min，此時峰形更好，保留時間適中，相對于已有方法提升了檢測效率；當體積比為90∶10時，噁嗪草酮保留時間2.681 min，雖然縮短了時間但是與雜質峰時間接近。而后調整流動相的流速，相比0.8 mL/min，在1.0 mL/min的流速下其峰型更好，且多次進樣的結果更穩定，由此確定最終色譜條件[8]。最終色譜條件確定為：進量設置為5.00 μL，V乙腈∶V甲酸=80∶20，柱溫設置為 35 ℃，流速設置為1 mL/min。

2.2 質譜條件的確定

選擇scan，采用ESI離子源(+/-)對1 mg/L噁嗪草酮標準溶液全掃描，在正離子模式下可以獲得最強有效峰，因此確定正離子模式進行掃描[9-10]。由于噁嗪草酮的相對分子質量為376.3，所以在相對分子質量為200～500的范圍內進行全掃描，結果表明：在m/z為376.1時為最強有效峰。在SIM模式下，對碰撞誘導解離電壓等參數優化調整，使得儀器響應值最大化，由此確定最終質譜條件。最終質譜條件為：SIM質荷比選擇376.1(m/z)，介質氣體選擇干燥氮氣，溫度設置為350 ℃，流速設定為 12.0 L/min，碰撞誘導解離為100 V，毛細管電壓選擇正負3 000 V，霧化氣壓力35.0 kPa，駐留時間 590 ms，相對駐留選擇100%。

2.3 分析方法的線性相關性

制備質量濃度梯度為0.001，0.01，0.1，0.5，1，4 mg/L的噁嗪草酮試樣溶液，根據上述確定的液質聯用檢測條件，將噁嗪草酮質量濃度設為x軸，檢測得到的峰面積為y軸，線性回歸方程：y=2 168 083x+8 094.45(R2=0.999 9)。結果表明，其線性關系良好，線性關系見圖3。根據國家標準，實際進樣時儀器的信噪比(S/N)為3時，為該物質的最低檢出限，得出該儀器條件下噁嗪草酮的最低檢測限為 0.001 mg/L。

圖3 噁嗪草酮線性關系圖Fig.3 Linear relationship of oxaziclomefone

2.4 分析方法的精確度

從10%噁嗪草酮試樣溶液中準確吸取5份樣品，待儀器基線平穩后，在上述液質條件下連續進行測定[11]。計算得出測定10%噁嗪草酮懸浮劑的結果標準偏差和變異系數分別是0.087，0.81%(見表2)，符合CIPAC的要求(<1.17%)，證明此方法的精密度符合要求。

表2 10%噁嗪草酮懸浮劑精密度測定Table 2 Precision of oxaziclomefone 10% SC

2.5 分析方法的準確度

分別將5份等質量的10%噁嗪草酮懸浮樣品移于100 mL容量瓶中，并分別加入一定量的噁嗪草酮標準溶液，在液質條件下進行定量檢測[12]。結果表明(見表3)，該條件下噁嗪草酮的回收率在 98.235%～100.57%之間。

表3 10%噁嗪草酮懸浮劑準確度測定Table 3 Accuracy determination ofoxaziclomefone 10% SC

3 結論

(1)在色譜優化過程中，分別采用了乙腈-磷酸水和乙腈-甲酸水，結果發現乙腈-0.1%甲酸水具有更好效果。對比例進行優化，乙腈和甲酸配比分別采用了60∶40，70∶30，80∶20，90∶10的比例，結果表明，體積比為80∶20、溫度為35 ℃時噁嗪草酮保留時間適中、峰形最優且能與雜質具有較好的分離，因此采用該比例作為流動相。

(2)噁嗪草酮檢測結果表明，利用高效液相色譜串聯質譜測定10%噁嗪草酮懸浮劑含量檢測結果準確可靠、操作快速便捷，可用于10%噁嗪草酮懸浮劑的快速定量檢測分析。