淺析萊克多巴胺的危害及檢測方法

董 科，劉 超，朱慧敏，李 慧，孟美辰，張雪濤，何 琪

（1.句容市農產品質量安全監測中心，江蘇句容 212400；2.句容市農業農村局，江蘇句容 212400）

萊克多巴胺為醫藥名詞，主要用于治療人體肌肉萎縮和心力衰竭癥，也是治療支氣管擴張的有效試劑。作為一種人體興奮類型的藥劑，其可以減少人體脂肪的合成，增加肌肉的生成。正是由于這一特性，使其被一些生豬養殖企業所利用，在其他諸如肉雞、火雞等養殖業中也不同程度地存在這一情況［1］。

1 危害

人食用萊克多巴胺殘留的肉類后，會出現不同程度的肌肉顫動、心率過快等問題，嚴重的甚至出現輕微中毒反應，其癥狀類型與動物中毒癥狀基本相同。如果食用人本身就患有高血壓及心臟病等病癥，更易引發此類問題，甚至會造成死亡。萊克多巴胺作為一種醫藥材料，世界各國對其使用量均有規定，中國臺灣地區一律禁止使用萊克多巴胺，我國一些地區沒有完全禁止萊克多巴胺的使用，但要求養殖業的用量必須控制在規定值以內，一旦使用過量，在動物的體內就會有萊克多巴胺殘留，進入人體后會發生一系列癥狀反應。有學者以成年大鼠為例，研究萊克多巴胺對其的影響，得出的結論是使用該藥劑后，大鼠的睪丸和體重與對照組相比明顯增加，此試驗再次證明萊克多巴胺可以促進人體激素的分泌和生成，造成人體激素分泌紊亂，正常的新陳代謝被打亂［2］。有學者采用試驗的方法對萊克多巴胺在動物體內的殘留進行試驗，結果表明萊克多巴胺屬于腎上腺素受體激動劑類型，其作為添加劑對動物進行喂食后，動物生長速度明顯加快，同時飼料的轉化率大大提升，瘦肉率也大大提升。

2 檢測方法

2.1 酶聯免疫法（ELISA）

ELISA 是目前市場中比較主流的檢測方法之一，單克隆抗體技術研發取得的進展，使萊克多巴胺的檢測也逐漸從傳統的多抗體檢測試劑盒中轉變過來。采用單克隆抗體技術具有如下優勢：工業化生產方式較為簡單；選擇性較強；靈敏度較強，可達0.5 ng·mL-1；可測的范圍較廣，不僅僅是動物的內臟、肉，包括飼料中、尿液中的萊克多巴胺殘留均可測出。隨著研發技術的提升，單克隆抗體技術又可以區分為直接競爭和間接競爭2類，一般來說，國內生產的大多數為間接競爭ELISA，而國外生產的大多數均為直接競爭ELISA。目前，酶聯免疫法主要采取生物素鏈霉親和素放大酶聯免疫方法，同時結合了生物素—鏈霉親和素系統的放大作用，靈敏度進一步提升，達到（0.30±0.05）ng·mL-1。在目前主流的檢測方法中，酶聯免疫法具有較為明顯的優勢，由于其操作便捷，結果的一致性較高，十分適合對大批量樣品的檢測。

2.2 高效液相色譜法（HPLC）

HPLC 測定法主要采用C 18 分析柱實施分析，測定的步驟如下：利用乙腈和緩沖溶液配置流動相等溶劑洗脫來進行樣品預處理；采取電化學和HPLC 相結合的方法實施檢測，檢測主要針對豬血清血漿。利用庫侖檢測器也可以實施對飼料及豬組織器官的檢測，該方法也能進一步提升檢測的靈敏度［3］。

2.3 膠體金免疫層析法（GICA）

GICA 代表了目前萊克多巴胺檢測方法的研發方向，其具有的優勢有：操作較為簡單；不需要專業的檢測人員和儀器；基本不受環境的限制；得出結果的時間短，一般15 min 就可以知道結果。但該檢測方法的缺陷也是顯而易見的，就是不能實現定量分析。隨著科學研發能力的提升，在膠體金免疫層析法的基礎上，目前又發展了膠乳免疫層析法，膠乳免疫層析法的原理是利用膠乳與標記物發生反應，在氨基和羧基之間形成較為穩定的化學結構，相比膠體金免疫層析法，膠乳免疫層析法結構體的穩定性更好，表面結合力更強。此外膠乳免疫層析法還具備較好的靈敏度，且靈敏度可控性好，比膠體金高出10～1 000 倍。膠乳的分類主要區分為3類：熒光膠乳、彩色膠乳及磁膠乳。由于作用原理不同，實現的功能也各不相同，其中磁膠乳和熒光膠乳在實施檢測時，需要專門的儀器（熒光檢測儀和磁膠乳檢測儀），從而實現定性和定量檢測，這2 種儀器體積較小，搬移也較為便捷，所以可以滿足即時檢測的需要。彩色膠乳主要通過調節pH，產出顏色各異的微球膠乳，從而實現聯檢產品中不同指標的同步呈色，這是目前試驗室實施檢測檢驗的趨勢之一。

2.4 氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）

GC-MS 主要采用專門的儀器對生豬尿樣及組織器官中的萊克多巴胺殘留進行測定，由于其靈敏度較高，被廣泛使用。在此基礎上發展而來的液質聯用法（LC-MS），優點更為顯著：樣品無需進行衍生，本身的離子碎片就具有較強的特征性；可以提供較為豐富的信息。GC-MS和LC-MS 的檢測，均需要較為昂貴的儀器，樣品也需進行復雜的預處理環節，其檢測缺陷也十分明顯：前期耗費的時間較長，檢測效率不高；不適合進行大規模的檢測。但和酶聯免疫法（ELISA）相比，也有自身具有的特有優勢：準確性、有效性及敏感性均優于ELISA；檢測時，ELISA 需要先行使用試劑盒進行測定，而氣相色譜-質譜聯用法則不需要該步驟［4-5］。

2.5 毛細管電泳法（CE）

毛細管電泳法所采用的原理是采用加有S-α-CD 緩沖液的毛細管電泳法可以較好地實現相關物質的分離。這一方法對生豬預混料中的萊克多巴胺進行測定，具有顯著的優勢：具有較好的精確度；具有較好的回收率，一般能達到（92.6±4.6）%。與前文所闡述的方法相比，優勢更為明顯：對生豬尿樣的處理簡單；分析過程較短，檢測所需的成本大大降低；檢測過程比較穩定，干擾因素少，所以檢測的結果也較為可靠。毛細管電泳法（CE）的缺陷也較為明顯：使用樣品的量較少，因此對低濃度樣品的檢測具有較大難度；方法不具備可復制性。這類型缺陷可以采取等速電泳、電堆積技術加以改善。

2.6 化學發光免疫分析法（CLIA）

該方法主要利用的原理是在抗體上以酶或化學發光物質實施標記，在免疫反應結束后，加入發光的底物，從而測定發光信號的光強，再根據一定的計算公式計算出物質中萊克多巴胺的含量。該方法主要利用一定的化學原理實施分析，具備的優勢十分顯著：靈敏度較高；見效較快；成本較低；樣品的預處理較為便捷；有著較強的選擇性。由于該技術具有的比較優勢十分顯著，也是未來重點發展的主要趨勢之一。

2.7 免疫傳感器法

該方法的主要原理是利用免疫測定法和傳感技術結合使用。作為一種新型的生物傳感器技術，其主要利用抗體特異性、抗原原理實施。免疫傳感器法主要將抗原或抗體固定在傳感器基體上，致其發生化學、物理反應，同時通過傳感技術將化學反應轉變為可檢測的信號，以測定分子的濃度。實踐中，傳感器可以區分為2 類，標記型免疫傳感器和非標記型免疫傳感器。使用該技術的優勢有：穩定性較好，具有一定的可重復性；靈敏度較高。其使用劣勢主要是抗原抗體反應具有良好的可逆性。

3 結語

隨著科學技術的不斷發展，養殖業中萊克多巴胺殘留的測定可使用的方法越來越多，檢測的精確度也越來越高。但由于養殖業環境、生產條件及養殖方法的不同，使用一種檢測方法往往不能適用所有的檢測環境和條件。目前市場中成本低、操作便捷、適用性好及結果穩定的測定方法得到推廣應用。