HIV 篩查試驗與確證試驗結(jié)果比較分析

郭慧娟 陳 勛 張引強 鞏瑤瑤 鄭 穎 王鳳梅 李 琦

1.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院檢驗科，北京 100091；2.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院肝病科，北京 100091；3.河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系，河北張家口 075031

艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合征（aquired immune deficiency syndrome，AIDS），是艾滋病病毒即人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染引起的一類疾病[1]。當(dāng)前，臨床上主要使用的HIV 抗體的檢測方法包括篩查試驗和確證試驗。HIV 抗體篩查試驗有快速檢測法、酶聯(lián)免疫吸附試驗法、化學(xué)發(fā)光法等，而抗體確證試驗包括免疫印跡試驗（Western blot，WB）法和條帶免疫試驗法[2]。HIV 篩查試驗是初步判斷HIV 感染的常用手段[3]。篩查實驗要求高靈敏度，這不可避免會造成一定的假陽性。而確證試驗要求高特異性，避免假陽性的出現(xiàn)。所以篩查試驗和確證試驗相結(jié)合，既能防止陽性標(biāo)本的漏檢，又防止假陽性報告的出現(xiàn)。篩查試驗采用高敏感性的試劑能夠最大限度發(fā)現(xiàn)HIV 感染的患者或攜帶者，確證試驗則采用高特異度的方法進一步提高陽性的正確率[4-5]。篩查試驗陽性而確證試驗陰性為篩查試驗假陽性。目前由于篩查試驗的高靈敏度，臨床出現(xiàn)了一定數(shù)量的篩查試驗假陽性的標(biāo)本。本文對篩查試驗和確證試驗的報告進行分析，探討HIV 篩查試驗與確證試驗結(jié)果的關(guān)系，初步歸納HIV 篩查假陽性的原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017—2019 年在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院西苑醫(yī)院（以下簡稱“我院”）進行HIV 抗體篩查試驗，結(jié)果呈陽性的標(biāo)本184 例。184 例標(biāo)本均送至北京市海淀區(qū)疾病預(yù)防控制中心（center for disease control and prevention，CDC）進行確證試驗，確證試驗結(jié)果分為陰性、陽性、不確定（184 例標(biāo)本中有36 例標(biāo)本確證結(jié)果為“不確定”。“不確定”的標(biāo)本因未全部進行跟蹤隨訪，本研究不進行分析，主要討論確證試驗結(jié)果為“陰性”或“陽性”的標(biāo)本）。確證結(jié)果為“陰性”或“陽性”的共148 例標(biāo)本，其中男95 例，年齡22～90 歲，平均（56±21）歲；女53 例，年齡27～87 歲，平均（50±16）歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①研究對象為2017 年1 月至2019 年12 月在我院就診的進行HIV 抗體篩查的中國籍患者。②所有研究對象疾病診斷明確，未診斷疾病的患者未納入。③HIV抗體初篩陽性的標(biāo)本全部送往北京市海淀區(qū)CDC 確證實驗室。④根據(jù)北京市海淀區(qū)CDC 確證實驗室對所送檢測標(biāo)本結(jié)果分為：確證陰性、確證陽性、確證不確定。

1.3 儀器與試劑

全自動免疫分析儀Roche cobas 8000 及配套羅氏HIV（四代）試劑（批號：47329401）均購自羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司。WB 檢測儀Tecan（型號：Profi blot 48），檢測試劑公司為安倍生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司（批號：AE9017）。

1.4 研究方法

篩查試驗為HIV 抗原和抗體聯(lián)合檢測法。按照試劑說明書判定結(jié)果：S/CO≥1 為陽性，S/CO＜1 為陰性。確證試驗采用WB 檢測HIV 抗體。同時符合以下2 條標(biāo)準(zhǔn)判斷為陽性：①至少有2 條env 帶出現(xiàn)，或至少1 條env 帶和P24 帶同時出現(xiàn)；②符合試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。確證報告分為陽性、陰性和不確定。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t 檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，采用χ2檢驗或Bonferroni 校正。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 篩查陽性標(biāo)本的確證結(jié)果

2017、2018、2019 年篩查陽性的標(biāo)本各60、47 例和77 例。2017—2019 年HIV 篩查陽性標(biāo)本的確證試驗結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。見表1。

表1 2017—2019 年HIV 篩查陽性標(biāo)本的確證試驗結(jié)果（例）

2.2 HIV 確證試驗陽性例數(shù)與HIV 初篩檢測總標(biāo)本數(shù)

2017、2018、2019 年確證陽性的標(biāo)本與在我院初篩檢測HIV 抗體的總標(biāo)本數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。見表2。

表2 2017—2019 年HIV 確證試驗陽性標(biāo)本與在西苑醫(yī)院檢測HIV 抗體總標(biāo)本數(shù)（例）

2.3 假陽性標(biāo)本篩查檢測值分布特點

把篩查實驗陽性確證實驗陰性的標(biāo)本定義為篩查假陽性標(biāo)本，篩查假陽性標(biāo)本的篩查結(jié)果由低到高分為四組，依次為1≤S/CO＜10（102 例，96.23%）、10≤S/CO＜50（3 例，2.83%）、50≤S/CO＜100（1 例，0.94%）、S/CO≥100（0 例）。

2.4 確證試驗陽性標(biāo)本的篩查檢測值分布

確證試驗陽性標(biāo)本（42 例）的篩查S/CO 分為四組，分別1≤S/CO＜10（0 例）、10≤S/CO＜50（4 例，9.52%）、50≤S/CO＜100（3 例，7.15%）、S/CO≥100（35例，83.33%）。

2.5 不同S/CO 組陽性預(yù)測值

篩查S/CO 值升高，確證陽性預(yù)測值升高，假陽性率降低。見表3。

表3 篩查陽性結(jié)果與WB 結(jié)果比較

2.6 假陽性標(biāo)本和確證陽性標(biāo)本的篩查檢測值

篩查陽性確證陰性組的篩查S/CO 為（3.41±1.50）；篩查和確證皆陽性的篩查S/CO 為（478.78±56.78）。篩查和確證皆陽性的S/CO 值高于篩查陽性確證陰性組S/CO 值，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）。

2.7 2017—2019 年初篩陽性確證試驗陰性的病例特征

通過對假陽性患者共106 例進一步分析，2017—2019 年HIV 抗體初篩試驗假陽性患者分布特點如下：感染類疾病44 例（41.50%）、心腦血管疾病21 例（19.81%）、先兆流產(chǎn)5 例（4.72%）、自身免疫病8 例（7.56%）、腫瘤7 例（6.60%）、腎臟功能疾病6 例（5.66%）、皰疹病毒感染皮膚病4 例（3.77%）、混合痣3 例（2.83%）、其他疾病8 例（7.55%）。

3 討論

本研究HIV 篩查檢測使用的是羅氏第四代電化學(xué)發(fā)光檢測試劑。電化學(xué)發(fā)光法和羅氏HIV 第四代試劑高靈敏度疊加，使HIV 抗體檢測陽性率得以極大增加[6]。HIV 四代試劑能同時檢測HIV（1+2）抗體與P24 抗原。在HIV 感染的早期，通過檢測血清或血漿P24 抗原，可以將檢測窗口期縮短，故P24 抗原在HIV-1 型早期感染的檢測中有重要價值[7]。第四代HIV 檢測試劑，在固相載體上同時包被抗P24 的單克隆抗體和HIV 抗原P24，但是載體的表面積是固定的，在檢測過程中，吸附到固相載體上的HIV 抗體量和HIV 抗原量均受到限制，導(dǎo)致HIV 抗原和HIV 抗體檢測之間發(fā)生干擾現(xiàn)象而引起假陽性情況[8]。并且，篩查試驗在要求高靈敏度的同時常常伴隨著特異度下降[9]，即會出現(xiàn)一定數(shù)量的假陽性。

2017、2018、2019 年篩查陽性標(biāo)本假陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05），篩查假陽性率逐年增加。有研究發(fā)現(xiàn)，孕婦的HIV 假陽性率升高與近些年就診者普遍進行HIV 篩查所致的篩查率升高有關(guān)[10]。2017—2019 年逐年遞增的HIV 抗體篩查假陽性率可能與當(dāng)前醫(yī)師和患者對HIV 篩查重視程度有關(guān)。此外，2017—2019 年確證陽性的標(biāo)本與在我院當(dāng)年所有檢測HIV 抗體的標(biāo)本數(shù)比值分別是0.06%、0.03%、0.04%，各年比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。本研究HIV 抗體陽性率低于海南地區(qū)（0.22%）和廣東惠州地區(qū)（0.11%）的HIV 抗體陽性率[11-12]。這可能是時間、地區(qū)和人群的不同造成的差異。

假陽性標(biāo)本的篩查值集中在1≤S/CO＜10，確證陽性標(biāo)本的篩查值集中分布在S/CO≥100。如果患者HIV 抗體篩查檢測值在1≤S/CO＜10，要高度懷疑是干擾引起的假陽性。假陽性組篩查S/CO 要明顯低于確證陽性組，可見即使干擾引起HIV 抗體篩查假陽性，但是S/CO 數(shù)值會在一個比較低的數(shù)值。

假陽性組分布在不同的疾病中。有很多學(xué)者認(rèn)為，高濃度的異嗜性抗體與HIV 檢測試劑發(fā)生非特異性交叉反應(yīng)，是HIV 篩查試驗出現(xiàn)假陽性的原因[9]。由于HIV 結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具體是何種蛋白質(zhì)引起的異嗜性抗體增加，從而引起交叉反應(yīng)造成篩查試驗假陽性，目前還不十分明確[13]。吳志奇等[14]在HIV 診斷試劑假陽性原因分析中認(rèn)為血液病、腫瘤、老年心腦血管疾病可能對HIV 抗體有影響。有報道稱接受血液透析的腎功能衰竭患者體內(nèi)增高的自身抗體可使HIV 檢測呈假陽性[15]。此外，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)自身免疫性疾病相關(guān)的自身抗體是導(dǎo)致HIV 篩查假陽性的原因之一[16-18]。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者HIV 的假陽性率與類風(fēng)濕因子和抗環(huán)瓜氨酸抗體的高效價相關(guān)[16，19]。有報道認(rèn)為妊娠是HIV 篩查假陽性的危險因素，原因可能是由于妊娠期纖維蛋白濃度增高[20]，纖維蛋白原的聚集可非特異性地結(jié)合試劑中的HIV 抗體，干擾HIV篩查檢測結(jié)果[21-23]。同時，由于孕婦體內(nèi)存在其他抗體的干擾，導(dǎo)致HIV 抗體檢測也可能出現(xiàn)假陽性[24-25]。報道顯示，肝病、病毒感染會引起HIV 抗體確證檢測出現(xiàn)不確定性[26-27]。還有報道銀屑病也會導(dǎo)致HIV 篩查出現(xiàn)假陽性[17]。

綜上所述，HIV 篩查試驗受到多種干擾因素的影響，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。如果臨床患者出現(xiàn)較低數(shù)值的S/CO，應(yīng)懷疑是否存在干擾因素，在確證結(jié)果之前，對患者做好溝通和解釋工作，減輕患者的心理壓力和負(fù)擔(dān)。