豬圓環病毒2型繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染診斷

羅布扎西，聶民財，徐志文，周遠成

（1.西藏自治區錯那縣浪坡鄉農牧綜合服務中心，西藏 錯那 856700；2.四川農業大學動物醫學院，四川 成都 611130；3.四川農業大學動物醫學院動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130；4.四川省畜牧科學研究院畜禽生物制品四川省重點實驗室，四川 成都 610066）

豬圓環病毒是圓環病毒科圓環病毒屬的單股環狀負鏈DNA病毒，是目前已知的最小的動物DNA 病毒，主要分為三個血清型，其中2 型的致病力最強。PCV2（圓環病毒2 型）在豬群中傳染性較強，能夠通過口腔、呼吸道進行傳播，懷孕母豬感染后亦可經胎盤引起垂直傳播。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是動脈炎病毒科動脈炎病毒屬的單股正鏈RNA 病毒，PRRSV于1987年首次在美國發現。PRRSV只感染豬，各種日齡、品種的豬都可以感染此病毒，其中日齡在1月以內的仔豬和妊娠母豬最易感。病仔豬以出現呼吸道癥狀為主，感染母豬則出現繁殖障礙。

1 材料與方法

1.1 病料 病料采集于出現喘氣、發燒和腹瀉癥狀的豬，包括患豬的血液、腸系膜淋巴結、脾臟、肺臟以及小腸等。

1.2 試劑與材料 DL 2 000 Marker、dd H2O、Trizol 細胞裂解液、RT-PCR 反轉錄試劑盒、2×Taq PCR Master Mix，通用型基因組DNA提取試劑盒。

1.3 樣品處理 血液樣品分裝于無菌EP 管中，5 000 r∕min離心5 min，取上清液備用。

淋巴結、脾臟、肺臟和小腸等組織樣品剪碎、研磨后加3 mL PBS 制成組織懸液，放置于-20 ℃凍融3次，12 000 r∕min離心5 min，取上清液備用。

1.4 引物設計與合成 根據GenBank 已登錄的偽狂犬病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）、流行性腹瀉病毒（PEDV）、傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、輪狀病毒（PoRV）、細小病毒（PPV）、δ-冠狀病毒（PDCoV）、圓環病毒2 型（PCV2）、繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的基因序列，利用DNAMan 軟件分析保守序列并設計引物（表1）。

1.5 核酸提取及PCR 檢測（表2、表3）總RNA提取：使用Trizol 法提取病料的總RNA，得到總RNA 后進行反轉錄得到cDNA，使用CSFV、PEDV、TGEV、PORV、PRRSV 特異性引物分別進行RT-PCR檢測。

表2 RT-PCR/PCR反應體系

表3 RT-PCR/PCR反應程序

總DNA 提取：使用通用型DNA 提取試劑盒提取病料總DNA，使用PRV、PPV、PCV 特異性引物進行PCR檢測。

2 結果

通過對幾種病毒進行特異性PCR 檢測，CSFV、PEDV、TGEV、PPV、PRV、PORV 結果均為陰性，PCV2 PCR 結果中均為陽性（見圖1），PRRSV RT-PCR 結果中血液樣本和肺臟樣本表現為陽性（見圖2）。根據檢測，診斷本次豬病為PCV和PRRSV混合感染所致。

圖1 PCV2 PCR檢測結果

圖2 PRRSV RT-PCR檢測結果

3 小結

豬圓環病毒和繁殖與呼吸綜合征病毒均能攻擊豬只的免疫系統，使患病豬出現免疫抑制，進而繼發感染其他病毒或細菌，出現混合感染。生產中豬圓環病毒和繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染較常見。

當豬發生圓環病毒病和繁殖與呼吸綜合征時，豬因免疫抑制而繼發感染其他疾病是給豬場造成嚴重損失的主要原因。當豬出現二病感染時應當加強其他病毒性疾病和細菌性疾病的防控。

防控發病應將病死豬及污染物無害化處理；病豬和可疑病豬單獨隔離飼養，并加強其他常見病毒性疾病的免疫；加強環境消毒，每天對豬場進行兩次消毒；做好豬場人員的管理，嚴禁外來人員進入養殖區域；做好飼養管理，避免豬因應激反應而導致免疫力下降。