堅果中吡蟲啉及啶蟲脒含量測定方法探究

劉 暢，趙新宇

（1.鞍山市檢驗檢測認證中心 食藥所，遼寧鞍山 114000；2.輝山乳業（沈陽）銷售有限公司研發部，遼寧沈陽 110000）

隨著我國人們生活水平的不斷提高，人們對食品安全越來越關注，農藥殘留問題是關注的焦點之一。植物性食品農藥殘留除直接來源于農藥噴灑外，還來源于土壤和水，農藥殘留污染是阻礙我國農業可持續發展的重要原因，完善現有的農藥殘留檢測技術，建立健全農藥使用管理制度是保護人們身體健康，保護土壤和水生態環境的重要手段。

吡蟲啉屬于煙堿類超高效殺蟲劑，可廣泛應用于花生、小麥、水稻、蔬菜等作物。啶蟲脒屬于氯化煙堿類新型殺蟲劑，對有機磷、氨基甲酸酯以及擬除蟲菊酯類等農藥產生抗藥性的害蟲具有較好效果，可防治花生、煙草、棉花等作物的蚜蟲[1-2]。《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規定，植物源性食品堅果吡蟲啉最大殘留限量為0.01 mg/kg，堅果啶蟲脒最大殘留限量為0.06 mg/kg[3]。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

市售花生米、榛子；甲酸（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；乙酸銨（優級純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；甲醇（色譜純，Fisher，美國制造）；乙酸（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；乙腈（色譜純，Fisher，美國制造）； ESI-L低濃度混合調諧液（安捷倫））；QuEChERS 萃取鹽包（深圳逗點生物技術有限公司）；QuEChERS 凈化管（深圳逗點生物技術有限公司）；吡蟲啉標準物質（100 μg/mL，農業部環境保護科研監測所）；啶蟲脒標準物質（100 μg/mL，農業部環境保護科研監測所）

1260-6460液相-質譜聯用儀配SB-C18RRHD（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色譜柱（美國安捷倫科技有限公司）；T-203電子天平（賽多利斯）；101-1AB 渦旋混合儀（天津市泰斯特儀器有限公司）；R206超聲儀（上海申生科技有限公司）；NS-10氮吹儀（上海屹堯儀器科技發展有限公司）；ALLEGRA X-30離心機（BECKMAN，美國制造）。

1.2 實驗方法

1.2.1 設備參數

柱溫：35 ℃；流動相A：0.1%（V/V）甲酸甲醇（含5 mmol/L乙酸銨），

流動相B：0.1%（V/V）甲酸水（含5 mmol/L乙酸銨），梯度洗脫：0～1 min，95%B；1～6 min，60%B；6～ 34 min，0%B；34～ 38 min，0%B；38.1 min，95%B；流速 0.2 mL/min；進樣量：10 μL。

離子源：AJS；掃描方式：正離子掃描；反應監測模式：MRM；干燥氣溫度：300 ℃；干燥氣流速：11 L/min；鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣流速：11 L/min；噴霧氣壓力：25 psi；毛細管電壓：4 000 V。質譜的其他參數見表1。

表1 質譜參數

1.2.2 樣品處理

（1）市售花生米。稱取粉碎后混合均勻的10 g樣品于50 mL離心管中，加入20 mL 1%乙酸乙腈，超聲提取15 min。加QuEChERS萃取鹽包于離心管中，渦旋 1 min，以8 000 r/min離心5 min。取全部上清液入QuEChERS凈化管中，渦旋1 min，以8 000 r/min離心5 min，轉移上清液，40 ℃氮吹至近干，用初始流動相定容至1 mL，渦旋混勻，經0.22 μm微孔濾膜過濾后備用，同時做基質空白[4-6]。

（2）市售榛子。稱取去殼粉碎后混合均勻的5 g樣品于50 mL離心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液，超聲提取15 min。加QuEChERS萃取鹽包于離心管中，渦旋1 min，以8 000 r/min離心5 min，將上清液轉移至10 mL容量瓶中。向裝有試樣的離心管中，再加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液，重復上述操作，合并提取液，用乙腈定容至10 mL，混勻。移取上述提取液4.5 mL至凈化管中，渦旋混勻，以8 000 r/min離心5 min，取上清液600 μL，用初始流動相定容3 mL，渦旋混勻，經0.22 μm微孔濾膜過濾后備用，同時做基質空白。

1.2.3 標準溶液配制

分別移取100 μg/mL吡蟲啉、啶蟲脒儲備液適量體積，用空白基質稀釋成濃度為10 μg/mL的中間液，再用初始流動相稀釋成系列標準溶液，臨用現配。

1.2.4 定性測定

根據待測樣品目標物保留時間、所選離子相對豐度比（Ratio）與標準物質是否一致來判斷待測樣品中是否存在目標物。保留時間±5%；相對豐度＞50%，允許±20%偏差；相對豐度＞20%～50%，允許±25%偏差；相對豐度＞10%～20%，允許±30%偏差。

1.2.5 定量測定

以基質混合標準工作液濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制曲線，外標法定量。

2 結果與分析

采用梯度洗脫方式有效分離開吡蟲啉和啶蟲脒，見圖1；配制基質混合標準溶液使得在扣除背景后目標離子得以出現，見圖2；在55～1 000 ng/mL范圍內，吡蟲啉標準曲線為y=103.248 239x-1 277.036 977，相關系數R2=0.998 6，見圖3；在1.0～100.0 ng/mL范圍內，啶蟲脒標準曲線為y=11 218.377 831x-23 553.253 060，相關系數R2=0.997 3，見圖3。

圖1 吡蟲啉、啶蟲脒混合標準溶液MRM色譜圖

圖2 混合標準溶液某一濃度點MRM色譜圖、Ratio值、質譜圖

圖3 吡蟲啉標準工作曲線

圖4 啶蟲脒標準工作曲線

采用陰性堅果樣品，進行加標試驗，測得吡蟲啉檢出限為5.50 μg/kg、定量限為11.0 μg/kg；啶蟲脒檢出限為3.0 μg/kg，定量限為10.0 μg/kg；在5.50～55 μg/kg，吡蟲啉回收率為64%～101%，精密度為3%～14%；在10.0～60.0 μg/kg，啶蟲脒回收率為93%～113%，精密度為3%～10%，詳見表2。

表2 吡蟲啉、啶蟲脒加標回收率、相對標準偏差（n=6）

3 結論

通過本研究得出液相色譜-串聯質譜法能有效分離、定性和定量堅果中吡蟲啉和啶蟲脒，前處理采用QuEChERS方法操作簡單、去除堅果脂肪效果明顯、回收率高，解決了傳統方法多次旋轉蒸發、多次氮吹的耗時耗力且回收率低的困擾。