PCOS 患者血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達與胰島素抵抗及卵巢間質血流的關系

曹玉琳

（南陽市第一人民醫院檢驗科，河南 南陽 473002）

多囊卵巢綜合征（PCOS）能夠導致患者繼發性不孕或者月經紊亂，增加了PCOS 患者病情持續性進展的風險[1,2]。 PCOS 患者病情遷延不愈，不僅顯著影響生活質量，同時還增加了患者并發高雄激素血癥或者胰島素抵抗等的風險[3]。 在研究PCOS患者病情進展機理的過程中，越來越多的研究認為，基礎生物學分子的改變，能夠通過加劇胰島B細胞功能損傷，進而參與PCOS 的病情進展。 血管內皮細胞生長因子（VEGF）的表達上升，能夠通過加劇血管內皮細胞的損傷，影響到胰島B 細胞血流及新生血管的形成,最終導致血流灌注障礙[4]；內皮抑素（ES）是血管收縮因子，其能夠通過加劇血管痙攣，促進血管內皮細胞的損傷，最終誘導胰島B 細胞的血流動力學紊亂[5]；中長鏈編碼RNA 生長停滯特異性基因5（LncRNA GAS5）能夠穩定胰島B 細胞的代謝狀態，提高細胞損傷修復能力[6]。為了深入揭示PCOS 的發生機理，本研究選取我院收治的96 例PCOS 患者為研究對象，探討VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達情況以及其與胰島素抵抗、卵巢間質血流的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年1月至2018年7月收治的96 例PCOS 患者為PCOS 組，96 例月經周期正常的育齡期女性為對照組。 PCOS 組，年齡22～37歲，平均27.64±2.43歲，體質量指數（BMI）24.42±2.03kg/m2，腰臀比0.86±0.05。 對照組，年齡22～37歲，平均27.45±2.18歲，BMI22.28±1.79kg/m2，腰臀比0.78±0.05。 兩組研究對象的年齡差異無統計學意義（P＞0.05）；PCOS 組的BMI、腰臀比顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。 診斷和入選標準：⑴PCOS 的診斷標準參考中華醫學會制定的標準[7]；⑵PCOS 患者主要具有以下臨床表現：稀發排卵、無排卵、高雄激素血癥等；⑶PCOS 患者經超聲檢查表現為一側或雙側卵巢中直徑2～9mm的卵泡數目≥12 個或卵巢體積＞10cm3； ⑷本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關倫理及保密原則。 排除標準：⑴婦科腫瘤；⑵免疫系統疾病；⑶高催乳素血癥；⑷先天性腎上腺增生、分泌雄激素腫瘤；⑸甲狀腺功能異常。

1.2 檢測方法 常規采集患者肘靜脈血4ml，自然凝固后采集上層清亮液體，-20℃放置冰箱保存。采用上海雨婷生物科技公司生產的全自動生化檢測儀器（Biotetic-2008） 及該公司配套試劑對血清FPG、Fins 及HbA1c 進行檢測；采用ELISA 法檢測血清VEGF、ES，配套儀器A4500 酶標儀購自羅氏檢測公司。 采用RT-PCR 法對LncRNA GAS5 進行檢測，常規Trol 法提取總RNA，純度檢測OD260/OD280 在1.8～2.0，說明提取總RNA 純度合格，采用AMV 逆轉錄酶將總RNA 逆轉錄為cDNA，然后進行逆轉錄反應, 上游引物：5’-CTTCTGGGCTCAAGTGATCCT-3’,下游引物：5’-TTGTGCCATGA GACTCCATCAGA-3’,內參為GAPDH,上游引物：5’-TTGTGCCATGAGACTCCATCAG-3’;下游引物：5’-GCCCAATACGACCAAATCC-3’。 反應體系為：模板1ul,上游/下游引物各0.5ul，Buffer2μl，dN TPs1μl，Taq 酶0.5μl，cDNA1μl，SYBR -Green1μl，去離子水14ul，總體積20μl，反應條件參照如下：95℃，10min；94℃，45s；63℃，40s；72℃，45s,共45個循環。 以GAPDH 為內參，用公式2-△△Ct計算LncRNA GAS5 的相對表達量。 胰島素抵抗指數（Homeostasis model assessment resistance index，HOMA-IR）計算方式：空腹血糖水平（FPG，mmol/L）×空腹胰島素水平（FINS，mIU/L）/22.5。 胰島素敏感指數（ISI）計算公式：l/( FPG×FINS）結果的自然對數。

1.3 統計學方法 采用SPSS21.0 對本研究的所有數據進行統計學處理，采用±s 表示符合正態分布的計量資料，兩組間比較采用兩獨立樣本t 檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗； 兩計量資料相關性分析采用Pearson 線性相關分析法；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PCOS 組和對照組的血糖代謝指標比較PCOS 組FPG、HbA1c 與對照組差異無統計學意義（P＞0.05）；PCOS 組2hPG、FINS、HOMA-IR 測定值高于對照組，ISI 測定值低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；見表1。

表1 PCOS 組和對照組的血糖代謝指標比較（±s）

表1 PCOS 組和對照組的血糖代謝指標比較（±s）

組別PCOS 組對照組t 值P 值n 96 96 FPG（mmol/L） 2hPG（mmol/L） FINS（mmol/L） HbA1c（%） HOMA- IR ISI 5.17±0.54 5.03±0.56 1.763 0.080 7.79±1.04 5.48±0.66 18.375 0.000 9.22±2.09 4.83±0.95 18.736 0.000 5.57±0.87 5.34±0.76 1.951 0.053 1.36±0.29 0.94±0.14 12.779 0.000- 3.78±0.82- 3.04±0.63 7.012 0.000

2.2 PCOS 組和對照組的血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達比較PCOS 組的血清VEGF、ES 水平高于對照組，LncRNA GAS5 表達水平低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；見表2。

表2 PCOS 組和對照組的血清VEGF、ES及血清中LncRNA GAS5 表達比較（±s）

表2 PCOS 組和對照組的血清VEGF、ES及血清中LncRNA GAS5 表達比較（±s）

組別 n VEGF（ng/L） ES（μg/L）PCOS 組對照組t 值P 值96 96 977.32±179.24 628.61±144.52 14.842 0.000 255.14±41.31 178.42±36.83 13.585 0.000 LncRNA GAS5（相對表達強度）1.38±0.57 2.34±0.88 8.971 0.000

2.3 PCOS 組和對照組的卵巢間質血流RI、PI 值比較 PCOS 組的卵巢間質血流RI、PI 值低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；見表3。

表3 PCOS 組和對照組的卵巢RI、PI 值比較（±s）

表3 PCOS 組和對照組的卵巢RI、PI 值比較（±s）

組別 n PCOS 組對照組t 值P 值96 96 RI 0.62±0.25 0.90±0.33 6.627 0.000 PI 1.33±0.27 2.40±0.51 18.168 0.000

2.4 PCOS 組血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達與胰島素抵抗及卵巢間質血流RI、PI 值的相關性PCOS 患者血清VEGF、ES 與RI、PI、ISI 呈顯著負相關（P＜0.05），與HOMA-IR 呈顯著正相關（P＜0.05）；LncRNA GAS5 與ISI呈顯著正相關（P＜0.05），LncRNA GAS5 與HOMA-IR 呈顯著負相關（P＜0.05）；見表4。

表4 相關性分析結果

3 討論

肥胖或者高血脂癥誘導的脂肪細胞過度堆積，能夠顯著促進氧化應激性損傷，加劇胰島B 細胞功能障礙[8]。 PCOS 的發生不僅能夠加劇月經量或者月經周期的改變，同時還能夠影響妊娠結局，遠期心血管系統并發癥發生率也顯著上升[9]。 在研究PCOS 病情進展的分子機制過程中，可以發現血管內皮損傷或者相關調控因子的改變,能夠通過對血管新生或者趨化因子富集的影響,最終導致胰島B 細胞功能障礙。 目前多數研究以探討CRP 或者其他代謝性因子表達與PCOS 的關系為主，并認為CRP 及相關代謝因子的改變,能夠在PCOS 的病情進展過程中發揮重要的作用[10]，但缺乏對PCOS 患者VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達情況的分析研究。 本次研究的創新性在于不僅分析了VEGF、ES及LncRNA GAS5 的表達與PCOS 的病情關系，同時還探討了VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達與PCOS 患者胰島素抵抗及卵巢間質血流的關系。

VEGF 作為血管內皮細胞生長因子，主要參與腫瘤或者炎癥反應的發生過程。 近年來的研究認為，VEGF 還能夠影響上皮細胞的分化成熟過程，導致組織細胞缺血缺氧性損傷；ES 對血管平滑肌細胞的痙攣作用，能夠加劇組織器官缺血性損傷；LncRNA GAS5 是非編碼RNA 家族成員，能通過參與誘導胰島B 細胞分化成熟，提高胰島B 細胞結構蛋白的翻譯速率，最終加速胰島B 細胞的功能修復過程。 已有研究發現，PCOS 患者VEGF 的表達濃度明顯上升[11]，但對于VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達與卵巢間質血流搏動指數（PI）、阻力指數（RI）的分析不足。

本研究對于兩組研究對象血糖代謝指標進行分析發現，PCOS 患者餐后2h 血糖（2hPG）、空腹胰島素（FINS）、胰島素抵抗指數（HOMA-IR）均明顯高于對照組，而胰島素敏感指數（ISI）明顯低于對照組，提示PCOS 患者存在明顯的血糖代謝紊亂和胰島素抵抗，分析原因主要與長期的高滲高血糖能夠誘導氧化應激反應的發生，導致胰島素受體的損傷，而胰島素受體敏感性的下降能明顯促進胰島素抵抗的發生有關。 本研究重點探討了PCOS患者VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達的變化，結果顯示，PCOS 患者VEGF、ES 的表達濃度的顯著上升，而LncRNA GAS5 表達濃度顯著下降，表明VEGF、ES 及LncRNA GAS5的異常表達均與PCOS 的病情密切相關。VEGF、ES 的上升不僅能影響組織新生血管的形成，同時還能增加氧化應激性損傷的風險，進一步促進胰島B 細胞或者卵巢生發上皮細胞的功能障礙，加劇PCOS 的病情進展；LncRNA GAS5 表達下降，使其失去對卵巢生發上皮細胞成熟的誘導功能，導致PCOS 患者無成熟卵泡的形成[12-14]。 楊倩等[15]的研究也認為，PCOS 患者血清中ES 的表達水平可隨患者的病情加重而逐漸上升，PCOS 病程越長，高雄激素血癥表現越明顯，ES 表達水平上升越顯著。 PCOS 組卵巢間質血流RI、PI 值低于對照組，提示PCOS 患者存在明顯的血流動力學紊亂，這主要與多發卵泡對間質組織中血管壁的機械性壓迫作用有關。 相關性分析結果也發現，VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達與PCOS 患者的胰島素抵抗及卵巢間質血流指標相關，提示VEGF、ES 及LncRNA GAS5 可以作為臨床評估PCOS 患者整體病情的重要參考依據。

綜上所述，PCOS 患者血清VEGF、ES 水平升高，LncRNA GAS5 表達降低，且與PCOS 患者胰島素抵抗及卵巢間質血流變化密切相關。