外周血有核紅細胞項目的性能驗證及臨床意義探討

程瑜，先潔，黃佳佳，李月

1.重慶醫科大學附屬第二醫院檢驗科，重慶 400010；2.重慶醫科大學附屬第一醫院病理科，重慶 400016

有核紅細胞(nucleated red blood cell,NRBC)是一種幼稚的骨髓紅系細胞，健康成年人血液中無NRBC,但在新生兒或幼兒血液中可見[1-3]。一旦成年人外周血中出現NRBC，則多為病理狀態[4-6]，常見于血液系統疾病，如溶血性貧血、急慢性白血病等。由于外周血NRBC具有細胞核，血液分析儀可能會將其當作白細胞，而干擾白細胞計數[7-8],所以檢測NRBC以校正白細胞計數對保證血液分析結果的可靠性具有關鍵意義。大量研究報道NRBC增多與病死率升高和疾病預后不良密切相關，故檢測NRBC亦有重要的臨床作用[9-11]。

ISO15189 CNAS-CL02:2012《醫學實驗室質量和能力認可準則》要求實驗室應在設備安裝和使用前驗證其性能并符合相關檢驗的要求[12]。為了解XN-3000對外周血NRBC計數的準確性和可靠性，該研究參考WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》等[13]指南文件對XN-3000檢測的NRBC進行項目性能驗證，并進一步分析臨床患者樣本的NRBC百分率與疾病（非血液系統疾病）轉歸的相關性。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

所用標本均來自重慶醫科大學附屬第二醫院住院患者；儀器提示有核紅細胞陽性，且入組對象為非血液系統疾病患者。

1.2 儀器與耗材

日本SYSMEX全自動血細胞分析儀XN-3000及原裝配套的試劑、校準品和質控品，BASO瑞氏吉姆薩染液，Olymus光學顯微鏡。

1.3 方法

標本性能驗證方案參考相關指南文件，判斷標準由于沒有國家標準、行業標準，研究采用廠家說明書有核紅細胞計數的性能要求。

1.3.1 儀器檢測NRBC血液采集后2 h內完成測定。儀器按計劃進行校準，檢測前按要求進行每日室內質控，在控后按標準規程檢測樣本。

1.3.2 攜帶污染率 將混勻的高濃度血液樣本連續測定3次，其測定值分別為H1、H2、H3；再連續測定低濃度血液樣本3次，其測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率（CR=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%）。

1.3.3 精密度 批內精密度：取含高、中、低3個水平NRBC%的新鮮全血,按常規檢測方法連續重復檢測11次,取后10次結果計算均值（Mean）、變異系數(Coefficient of Variation,CV)和標準差(Standard Deviation,SD)；批間精密度：取含高、中、低3個水平NRBC%的新鮮全血，每天檢測1次，計算連續6 d的NRBC%數據的變異系數。

1.3.4 線性范圍 選取1份高值NRBC%的全血樣本（H），用儀器的稀釋液分別按照0%、20%、40%、60%、80%、100%的比例進行混合配置，每個稀釋度測定2次計算平均值，將實測值與理論值求偏差，計算Y=aX+b，驗證線性范圍。

1.3.5 NRBC百分率與病死率的相關性分析 選擇在該院住院期間外周血NRBC＞0的患者進行回顧性研究。收集入組患者的基本信息、預后結果，分成80例死亡組與197例好轉組，將兩組的NRBC%進行分析。

1.3.6 NRBC百分率的趨勢性分析 分析死亡組與好轉組的多次檢測結果，對死亡組與好轉組的NRBC%作趨勢性分析。

1.4 統計方法

應用SPSS 23.0統計學軟件分析數據，計量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗，協方差統計采用多次測定數據的趨勢性分析；計數資料采用頻數或率（%）表示，比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 攜帶污染率

SYSMEX XN-3000檢測高、低濃度NRBC的攜帶污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%=0.12%（廠家標準≤2.0%），故該檢測系統攜帶污染率可接收，見表1。

2.2 精密度驗證

SYSMEX XN-3000檢測NRBC批內精密度（低、中、高值）變異系數分別為6.11%、3.35%、0.88%；批間精密度（低、中、高值）變異系數分別為5.34%、3.54%、1.43%。結果均符合廠家要求（廠家標準≤25%），故該檢測系統精密度可接收，見表2、表3。

表3 XN-3000全自動血細胞分析儀NRBC批間精密度低、中、高值驗證結果

2.3 線性范圍驗證

SYSMEX XN-3000檢測NRBC的線性范圍回歸方程Y=0.997 9X+0.519 4，a值（斜率）為0.997 9，r2為0.997 6，結果均符合廠家要求（廠家標準：a值在1±0.05范圍，r≥0.975或r2≥0.95），故檢測項目線性區間可接受，見表4。

表4 XN-3000全自動血細胞分析儀線性范圍驗證結果

2.4 NRBC百分率與病死率的關系分析

將收集的80例死亡組與197例好轉組的NRBC%（若有多次檢測結果，取最后一次數據）進行t檢驗，分析兩組的差異性，兩組差異有統計學意義（t=-4.332，P＜0.05）。

2.5 NRBC百分率的趨勢性分析

將收集的進行多次檢測（2～6次不等）的17例死亡組與25例好轉組的NRBC%進行協方差分析，分析兩組趨勢性變化，兩組差異有統計學意義（F=6.326，P=0.022）。

3 討論

全自動血液分析儀計數外周血NRBC是近年發展起來的一項新技術,已開始應用于臨床,為臨床實驗室簡便、快速準確地計數NRBC提供了重要依據。目前國內外開始使用SYSMEX XN-3000血液分析儀(簡稱XN-3000)對外周血中NRBC進行計數，其原理是利用熒光染色對細胞核進行染色，流式法測定側向熒光強度(反映細胞核酸含量多少)和前向散射光強度(反映細胞體積大小)，將其與白細胞、紅細胞以及血小板區別。

該次性能驗證參照參考WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》，對SYSMEX XN-3000檢測NRBC的攜帶污染率、精密度、線性范圍等性能指標進行驗證。但因新鮮全血標本中NRBC受儲存條件、時間影響較大，所以實驗中批間精密度只計算連續6 d的NRBC%數據的變異系數。由于NRBC的性能驗證暫時沒有國家標準、行業標準，該研究采用廠家說明書的標準。該研究結果顯示,該項目的攜帶污染率為0.12%，≤2.0%的廠家標準，說明不同濃度間的交叉污染很小；批內、批間精密度的變異系數均≤25%，也達到廠家說明書的標準；回歸曲線為Y=0.997 9X+0.519 4，r2=0.997 6均在1±0.05范圍內，r≥0.975，說明線性良好，可報告范圍滿足臨床要求。說明XN-3000具有精密度高、線性范圍寬、簡單快速等優點。

臨床病例分析的結果顯示，80例死亡組的NRBC%明顯高于197例好轉組的NRBC%，該結果與相關學者研究符合[14-15]。NRBC%趨勢性分析發現，進行多次檢測的死亡組，其NRBC%呈上升趨勢，多次檢測的好轉組的NRBC%呈下升趨勢或者先升后降的趨勢。患者的NRBC%的持續升高與其預后不良有一定關系[16-19]。在整個病情進展過程中，NRBC%持續降低與病情好轉的差異有統計學意義。

該課題的啟動，也是源于重慶市物價局在2018年4月20日批準有核紅細胞計數收費標準（CAAY1000）的啟動。有核紅細胞計數的正常參考范圍為0，臨床大部分樣本的有核紅細胞計數結果均為0，故不推薦每個樣本的血常規均出具有核紅細胞計數的結果，這無疑會增加患者的經濟支出，且對大多數患者的臨床診斷治療與預后沒有輔助意義。根據第3版《全國臨床檢驗操作規程》，推薦NRBC%≥1%的結果報告給臨床。實驗室在收取該項目費用前，一定要做項目的性能驗證和每日室內質控，期待不久的將來衛健委臨檢中心組織該項目的實驗室間質量評價活動，完善正確度驗證，以確保結果的準確性。