COL4A1 在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

熊子鋆，李丹蘋(píng)，李萍,

1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，廣西南寧 530021；2.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院病理科，廣西南寧 530021

口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是口腔頜面部常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病可占口腔癌病例的90%[1-2]。 盡管近年在OSCC 的診療方面取得了一定的進(jìn)展，但是目前OSCC 的治療方式仍然是以手術(shù)為主，放療、化療為輔[3-4]。口腔鱗狀細(xì)胞癌有易轉(zhuǎn)移，易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，5 年生存率一直停滯在40%～50%左右[5]。 Ⅳ型膠原蛋白(type Ⅳcollagen protein，Col-IV)是由COL4A1-COL4A6 基因編碼的α鏈組成[α1(Ⅳ)-6(Ⅳ)]，是構(gòu)成組織基底膜（basement membranes, BMs）的主要成分。 腫瘤細(xì)胞突破基底膜向周圍及遠(yuǎn)隔器官發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，可能伴隨著Ⅳ型膠原蛋白的表達(dá)改變[6]，然而其分子機(jī)制尚不明確。 因此，該文通過(guò)收集2017 年6 月—2020 年5月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院的38 對(duì)OSCC 及癌旁樣本進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)以及聯(lián)合TCGA 及GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)中OSCC 樣本的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，研究COL4A1 基因在OSCC 中的表達(dá)情況以及及其與OSCC 發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性，為OSCC 的診斷、治療及預(yù)后的改善提供新的思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料來(lái)源

1.1.1來(lái)源于公共數(shù)據(jù)庫(kù)的OSCC 基因表達(dá)數(shù)據(jù)從腫瘤基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.cancergenome.nih.gov/)的頭頸部腫瘤數(shù)據(jù)中篩選出腫瘤類型符合口腔鱗狀細(xì)胞癌的mRNA 數(shù)據(jù)進(jìn)行下載，其中包括310例OSCC 和30例非癌對(duì)照樣本。 另外，從美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心NCBI 的GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）中檢索OSCC 相關(guān)的研究。 從檢索到的OSCC 相關(guān)研究中剔除重復(fù)和不可獲取基因表達(dá)數(shù)據(jù)的研究，并篩選出樣本來(lái)源于人類，包含OSCC 和正常對(duì)照樣本的基因芯片數(shù)據(jù)。并將GEO 數(shù)據(jù)中相同平臺(tái)的表達(dá)譜數(shù)據(jù)通過(guò)R 包去批次效應(yīng)后合并成一組數(shù)據(jù)，合并后共得到18 個(gè)基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù)組，其中包含730例OSCC 與325例正常對(duì)照樣本。

1.1.2免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)樣本選取廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院保存的38 個(gè)口腔鱗癌病例的OSCC與癌旁組織蠟塊標(biāo)本作免疫組化實(shí)驗(yàn)。 38 個(gè)病例中包括男性25例，女性13例；年齡26～79 歲，中位年齡53 歲。 按TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)，T1 期6例、T2 期18例、T3 期7例、T4例7例。 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者21例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者17例。 病理分級(jí)按照WHO 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，高分化23例，中到低分化15例。 病例納入標(biāo)準(zhǔn):①病理已確診為口腔鱗狀細(xì)胞癌并有相同組織標(biāo)本切緣經(jīng)病理確認(rèn)為陰性的癌旁組織作為對(duì)照；②臨床資料相對(duì)完整；③排除合并其他原發(fā)性惡性腫瘤的患者。

1.2 方法

1.2.1從公共數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)中提取COL4A1 基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析使用R 語(yǔ)言軟件從來(lái)源于公共數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)的OSCC 的mRNA 數(shù)據(jù)以及基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù)組中提取出COL4A1 的基因表達(dá)數(shù)據(jù)，并對(duì)未標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)據(jù)進(jìn)行l(wèi)og2 處理，用于后續(xù)進(jìn)行COL4A1 基因在OSCC 中表達(dá)情況的統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.2免疫組織化學(xué)染色采用免疫組織化學(xué)SP 法。將OSCC 和癌旁組織蠟塊切片、烤片后于二甲苯中脫蠟；在濃度梯度為100%、95%、85%、75% 的乙醇中水化后用無(wú)菌蒸餾水洗滌。 使用EDTA（PH9.0）抗原修復(fù)15 min(高壓法)，冷卻后蒸餾水清洗3 次，加入內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑反應(yīng)10 min。 PBS 清洗后用COL4A1(GeneTexGTX130215,1:100)多克隆抗體進(jìn)行一抗孵育，4℃冰箱孵育過(guò)夜。次日早上37℃恒溫箱復(fù)溫10～15 min，PBS 洗滌3 次后加入山羊抗小鼠/兔IgG 聚合物，37℃恒溫箱孵育20 min，PBS 洗滌后利用DAB 顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)顯色1～2 min，蘇木精復(fù)染，1%鹽酸酒精分化1～2 s，返藍(lán)液返藍(lán)5 s；自然晾干后10%中性樹(shù)膠封片。

1.3 觀察指標(biāo)

公共數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)用于比較分析OSCC 樣本與非癌樣本的COL4A1 基因表達(dá)水平的差異。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果用于驗(yàn)證OSCC 樣本與癌旁樣本中COL4A1的蛋白表達(dá)水平差異。對(duì)免疫組化染色結(jié)果的判斷采用半定量的免疫反應(yīng)性評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)分。由兩位專業(yè)研究人員在高倍鏡(400)下，每張切片隨機(jī)選擇4 個(gè)視野進(jìn)行觀察，并以雙盲的形式單獨(dú)打分。 評(píng)分規(guī)則:①染色強(qiáng)度:無(wú)染色計(jì)0 分；弱染色(淡黃色或黃色)計(jì)1 分；中等強(qiáng)度染色(棕色)計(jì)2 分；強(qiáng)染色(深棕色)計(jì)3 分； ②陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比:＜5%計(jì)0 分；5%～25%計(jì)1 分；25%～50%計(jì)2 分； 50%～75%計(jì)3 分；＞75%計(jì)4 分；③總得分:染色強(qiáng)度得分乘以染色比例得分為總得分。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

1.4.1基因芯片數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)算COL4A1 在OSCC 組織和非癌組織中的表達(dá)差異，并繪制ROC 曲線，計(jì)算約登指數(shù)。 基因表達(dá)結(jié)果用（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。 把約登指數(shù)作為截?cái)嘀担╟ut-off），以超過(guò)臨界值的癌樣數(shù)為真陽(yáng)性數(shù)，以超過(guò)臨界值的非癌樣數(shù)為假陽(yáng)性數(shù)。 接著使用Stata 14.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行Meta分析，繪制森林圖和總ROC（SROC）曲線。 當(dāng)SMD＞0且95%置信區(qū)間不與無(wú)效直線相交時(shí)，認(rèn)為OSCC 組織中COL4A1 的表達(dá)高于非癌組織。使用I2統(tǒng)計(jì)方法分析數(shù)據(jù)集之間的異質(zhì)性。 如果P＜0.05 或I2＞50%則被認(rèn)為數(shù)據(jù)集之間存在異質(zhì)性，將使用隨機(jī)效應(yīng)模型來(lái)合并數(shù)據(jù)，不存在異質(zhì)性則采用固定效應(yīng)模型。 均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 另外，為了驗(yàn)證Meta 分析結(jié)果的可信性，對(duì)納入研究進(jìn)行發(fā)表偏倚檢驗(yàn)和敏感性分析。

1.4.2免疫組化結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析免疫組化評(píng)分結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行，癌與癌旁樣本組的分值統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用（±s）表示，兩組的比較采用配對(duì)t 檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 并按免疫組化評(píng)分結(jié)果將OSCC 樣本進(jìn)行分組，免疫組化總得分＜6 分為低表達(dá)組，≥6 分為高表達(dá)組，采用χ2檢驗(yàn)比較不同臨床病理參數(shù)下OSCC 組織中COL4A1 高表達(dá)組與低表達(dá)組的差異，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 公共數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

通過(guò)對(duì)公共數(shù)據(jù)庫(kù)納入研究的COL4A1 在OSCC 和正常對(duì)照組織中的表達(dá)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明TCGA 以及GEO 的11 個(gè)基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)中COL4A1 在OSCC 的表達(dá)水平高于非癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。 公共數(shù)據(jù)庫(kù)納入研究及COL4A1 表達(dá)值結(jié)果見(jiàn)表1。為了得出全面的結(jié)論，對(duì)TCGA，GEO 數(shù)據(jù)進(jìn)行了Meta 分析。 因異質(zhì)性檢驗(yàn)顯示P＜0.05 且I2大于50%，采用了隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析。 森林圖結(jié)果顯示OSCC 中COL4A1 表達(dá)水平顯著高于非癌組織，是OSCC 風(fēng)險(xiǎn)因子(SMD =1.697，95% CI:0.187 ～2.206，P ＜0.001；I2=89.0% ，P ＜0.001，圖1A)。 接著對(duì)結(jié)果可信性進(jìn)行了驗(yàn)證，Begg檢驗(yàn)P=0.327，繪制漏斗圖顯示基本對(duì)稱，Egger 檢驗(yàn)P=0.059（圖1B)，結(jié)果均無(wú)明顯發(fā)表偏倚(P＞0.05)。 敏感性分析結(jié)果顯示剔除任一研究，合并效應(yīng)量均未發(fā)生明顯變化，表明Meta 分析的結(jié)果比較穩(wěn)定可信。 為了進(jìn)一步確定COL4A1 區(qū)分癌癥和非癌組織的能力，進(jìn)行了ROC 和SROC 曲線分析。 根據(jù)TCGA、GEO 數(shù)據(jù)繪制ROC 曲線，計(jì)算出約登指數(shù)定為截?cái)嘀担╟utoff），以超過(guò)臨界值的癌樣數(shù)為真陽(yáng)性數(shù)，以超過(guò)臨界值的非癌樣數(shù)為假陽(yáng)性數(shù),計(jì)算并繪制出SROC 曲線（ 圖1D）。 SROC 的AUC 為0.960 （95% CI：0.940 ～0.970）,COL4A1 的敏感性、特異性、陽(yáng) 性 似然比（PLR）、陰性似然比（NLR）、診斷比值比（DOR）分別為0.900（95%CI：0.820～0.940）、0.920（95%CI：0.840～0.960）、10.600（95%CI：5.500～20.400）、0.110（95%CI：0.060～0.210）和93.000（95%CI 38.000～230.000）。 以上結(jié)果證明，COL4A1 的表達(dá)在OSCC 中明顯升高，且有較好地區(qū)分癌與非癌組織的能力。

表1 公共數(shù)據(jù)庫(kù)納入研究及COL4A1 表達(dá)值（±s）

表1 公共數(shù)據(jù)庫(kù)納入研究及COL4A1 表達(dá)值（±s）

納入研究年份（年）平臺(tái)口腔鱗癌例數(shù) COL4A1 表達(dá)值正常對(duì)照例數(shù) COL4A1 表達(dá)值t 值 P 值GSE34105 GSE34106 GSE21866 GSE51010-GPL201 GSE30784 GSE31853-GPL570 GSE51010-GPL570 GSE74530 GSE78060 GSE9844 GSE138206 GSE23558 GSE46802-GPL6480 GSE85195 GSE3524 GSE31853-GPL96 GSE146483 GSE107591 GSE10121 GSE13601 GSE19089 GSE25099 GSE31056 GSE36090-GPL2986 GSE37991 GSE46802-GPL8490 GSE56532 GSE75538 GSE75539 TCGA 2012 2012 2014 2014 2011 2011 2014 2017 2017 2008 2019 2011 2013 2017 2005 2011 2020 2017 2008 2008 2009 2011 2011 2012 2013 2013 2014 2016 2016 GPL14951 GPL201 GPL570 GPL6480 GPL96 GPL17077 GPL6244 GPL6353 GPL8300 GPL6947 GPL5175 GPL10526 GPL2986 GPL6883 GPL8490 GPL10739 GPL18281 GPL10904 90 50 231 71 24 8 17 35 31 3 57 23 13 40 6 10 14 7 310 13.095±0.413 9.391±0.690 11.133±0.958 2.533±0.821 4.462±3.483 9.432±2.352 8.538±1.231 2.467±1.144 10.919±0.709 10.371±0.563 8.806±0.498 12.038±0.730 0.554±0.859 12.354±0.168 0.165±0.170 9.357±0.612 11.750±1.567 11.743±0.391 14.293±1.254 31 3 89 16 5 3 1 6 6 2 6 3 2 2 24 3 40 10 6 14 8 30 12.428±0.529 7.912±0.585 7.895±0.996 1.316±1.098 2.693±0.761 7.961±0.220 6.910±0.582 2.691±1.887 9.325±1.073 10.614±1.291 7.038±0.519 10.041±1.101-0.304±1.891 11.326±0.430 0.060±0.012 8.155±0.867 11.141±0.866 9.501±0.623 11.489±1.583 7.194 3.625 26.786 5.021 1.115 1.749 4.901-0.400 6.482-0.300 13.971 7.297 0.768 14.064 1.510 3.262 1.273 8.190 11.405＜0.001 0.001＜0.001＜0.001 0.275 0.122＜0.001 0.691＜0.001 0.779＜0.001＜0.001 0.517＜0.001 0.191 0.006 0.217＜0.001＜0.001

圖1 基于公共數(shù)據(jù)庫(kù)的COL4A1 表達(dá)值的Meta 分析

2.2 COL4A1 在OSCC 組織和癌旁組織中的蛋白表達(dá)情況

在該研究選取的38例OSCC 患者中，OSCC 細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)，癌旁組織主要在上皮細(xì)胞基底層有陽(yáng)性表達(dá)。 OSCC 與癌旁組織免疫組化染色結(jié)果見(jiàn)圖2。OSCC 組織平均染色計(jì)分為(5.368±2.387)分，癌旁組織為(3.342±1.632)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.978,P＜0.001)。 χ2檢驗(yàn)提示OSCC 組織中COL4A1 蛋白表達(dá)水平的高低在不同年齡、性別、分期、分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的臨床病理參數(shù)下差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

圖2 COL4A1 在OSCC 與癌旁組織免疫組化染色結(jié)果（放大倍數(shù)100x）

表2 COL4A1 蛋白低表達(dá)和COL4A1 蛋白高表達(dá)的臨床病理參數(shù)對(duì)比

3 討論

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程包括：腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位突破基底膜滲入血管腔，經(jīng)血管運(yùn)輸?shù)竭h(yuǎn)處器官形成微轉(zhuǎn)移灶，并在轉(zhuǎn)移部位繼續(xù)增殖，其中涉及了諸多復(fù)雜的分子生物學(xué)過(guò)程。 OSCC 易發(fā)生局部浸潤(rùn)性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)是影響口腔鱗癌患者預(yù)后的重要因素[7]。目前癌癥研究發(fā)現(xiàn)，癌細(xì)胞分子水平的變化會(huì)對(duì)組織水平的變化產(chǎn)生影響，并可能在驅(qū)動(dòng)癌癥的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵性的作用[8]，研究口腔鱗癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制正是改善其預(yù)后的關(guān)鍵。

Ⅳ型膠原蛋白作為細(xì)胞外基質(zhì)基底膜結(jié)構(gòu)的主要成分，是由3 條α 鏈形成的異源三聚體。 其中，由COL4A1 編碼的α1 鏈參與構(gòu)成的α1α1α2 異源三聚體是Ⅳ型膠原蛋白的主要構(gòu)成類型，普遍表達(dá)于各種成熟組織的BM 中。 基底膜與腫瘤關(guān)系密切，上皮細(xì)胞的基底膜是阻止腫瘤細(xì)胞向周圍侵襲的物理屏障，血管內(nèi)皮的基底膜阻礙了腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血管腔發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9]。 腫瘤微環(huán)境中膠原蛋白的降解重塑導(dǎo)致的基底膜改變會(huì)促進(jìn)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移，而腫瘤的發(fā)生、發(fā)展也會(huì)引起膠原蛋白以及基底膜變化[10]。 該研究中通過(guò)對(duì)來(lái)源于公共數(shù)據(jù)庫(kù)的1 040例OSCC 樣本以及355例非癌樣本的COL4A1 基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta 分析來(lái)比較OSCC 與非癌樣本中COL4A1 基因表達(dá)水平的差異,結(jié)果顯示OSCC 中COL4A1 基因的表達(dá)水平高于非癌組織（SMD＞1,P＜0.05)，驗(yàn)證了COL4A1 基因在OSCC 中表達(dá)上調(diào)。 另外，對(duì)38 對(duì)OSCC 與癌旁樣本進(jìn)行了免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)。 通過(guò)對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行半定量評(píng)分以及統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，COL4A1 在OSCC 組織中的蛋白表達(dá)(5.368±2.387)分高于癌旁組織(3.342±1.632)分(P＜0.05)，驗(yàn)證了COL4A1 基因的高表達(dá)同樣導(dǎo)致其蛋白表達(dá)水平在OSCC 中表達(dá)上調(diào)。 除該文的研究外，在另外一項(xiàng)針對(duì)OSCC 基因表達(dá)譜的研究中也發(fā)現(xiàn)了COL4A1基因在OSCC 中高表達(dá)，通過(guò)對(duì)15 對(duì)OSCC 與癌旁樣本進(jìn)行分析，結(jié)果顯示COL4A1 基因在OSCC 中的表達(dá)水平高于癌旁組織，其中OSCC 組織對(duì)比癌旁組織的COL4A1 基因表達(dá)水平的平均差異倍數(shù)為7.971倍，其研究結(jié)果與該研究結(jié)果都同樣驗(yàn)證了COL4A1基因在OSCC 中表達(dá)上調(diào)[11]。 COL4A1 在OSCC 中的表達(dá)上調(diào)可能會(huì)引起細(xì)胞外基質(zhì)以及基底膜結(jié)構(gòu)、成分的改變，從而影響OSCC 的發(fā)生、發(fā)展，提示了COL4A1 可能是其潛在的分子標(biāo)志物，可能在OSCC的診斷、治療以及預(yù)后監(jiān)測(cè)方面具有一定的臨床價(jià)值。該研究中對(duì)公共數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)源的COL4A1 基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行ROC 與SROC 曲線分析的結(jié)果提示，COL4A1 在OSCC 中的高表達(dá)使其具有較好的區(qū)分癌與非癌組織方面的能力，可能對(duì)OSCC 有一定的診斷意義。

COL4A1 在OSCC 中的表達(dá)上調(diào)對(duì)OSCC 發(fā)生、發(fā)展的作用雖然目前尚不明確，但是在其他腫瘤的研究中已發(fā)現(xiàn)COL4A1 的高表達(dá)對(duì)有腫瘤有促進(jìn)的作用[12]。例如，在肝癌的研究中發(fā)現(xiàn)，COL4A1 基因以及蛋白表達(dá)水平在肝癌組織中顯著高于非癌組織，并且肝癌組織COL4A1 表達(dá)水平的增高促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的增殖和遷移[13]。 在乳腺癌中也發(fā)現(xiàn)COL4A1 蛋白表達(dá)水平相對(duì)于非癌組織顯著增高，且乳腺癌組織的COL4A1 蛋白表達(dá)水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示了腫瘤組織中COL4A1 表達(dá)上調(diào)可能對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用[14]。 而在腫瘤細(xì)胞的分化方面，也有研究發(fā)現(xiàn)COL4A1 參與編碼的Ⅳ型膠原蛋白的表達(dá)量與OSCC 細(xì)胞的分化程度呈正相關(guān)性，分化程度越高的OSCC 細(xì)胞其Ⅳ型膠原蛋白的含量就越高[15]。 因此推測(cè)，COL4A1 在OSCC 中的表達(dá)可能與OSCC 的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及細(xì)胞分化程度等臨床參數(shù)相關(guān)。為了驗(yàn)證這一推測(cè)，將免疫組化實(shí)驗(yàn)得到的OSCC 樣本的COL4A1 蛋白表達(dá)水平與其臨床參數(shù)相結(jié)合進(jìn)行分析，結(jié)果未能發(fā)現(xiàn)COL4A1 蛋白的表達(dá)水平與OSCC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期以及分化程度之間存在關(guān)聯(lián)（P＞0.05）。 但是不排除結(jié)果受到了納入研究的病例數(shù)較少、研究病例來(lái)源較單一以及患者自身的民族、地域、生活習(xí)慣等因素的影響。未來(lái)可考慮擴(kuò)大樣本例數(shù)和病例選擇范圍做進(jìn)一步研究。

另外，在目前熱門的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制研究中，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)已被發(fā)現(xiàn)可以導(dǎo)致細(xì)胞遷移、侵襲和抗凋亡能力的增強(qiáng)，并且在EMT 過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)成分生成顯著增加以及與基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）激活有關(guān)的膠原蛋白重塑[16]。 MMP 是一個(gè)大家族，可以降解包括Ⅳ型膠原蛋白在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)的大部分成分[17]。 有研究發(fā)現(xiàn)，MMP-2 和MMP-9 表達(dá)的下調(diào)可以抑制EMT 的活化并降低了OSCC 遷移和侵襲的能力，同時(shí)它們還被認(rèn)為與腫瘤的晚期階段、轉(zhuǎn)移和低生存率密切相關(guān)[18-19]。 COL4A1 在OSCC 中的表達(dá)上調(diào)對(duì)OSCC 的作用和影響可能與EMT 以及MMP 參與的分子生物學(xué)過(guò)程有關(guān)。對(duì)與EMT、MMP 相關(guān)的分子作用機(jī)制的研究，未來(lái)可以作為進(jìn)一步探討COL4A1 的表達(dá)在OSCC 中的作用的一個(gè)方向。

綜上所述，COL4A1 的基因和蛋白表達(dá)水平在OSCC 中均表達(dá)上調(diào)，提示了其有可能是OSCC 潛在的生物分子標(biāo)志物，對(duì)OSCC 診斷、治療的提高以及預(yù)后的改善具有一定的臨床意義，值得后續(xù)進(jìn)一步研究。