高低效價偽狂犬病疫苗免疫效果的比較

方 偉 ，楊 倩 ，楊紅杰 ，任國鑫 ，李煥榮 ，張永紅 ＊，周雙海 ＊

（1.北京農學院動物科技學院，北京 102206；2.北京信得威特科技有限公司，北京 101302）

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種危害養豬業的重要疫病，PRV-gE基因缺失疫苗接種是其有效預防措施，疫苗免疫雖能阻止臨床發病，但難以完全阻止野毒感染。2010年以來，豬的偽狂犬病在國內出現了明顯反彈，部分豬場的PRV野毒感染率明顯上升，疫苗效價不足可能是其重要原因之一。現有多種豬偽狂犬病商品疫苗，不同商品疫苗標識的每頭份劑量之間存在明顯差異。鑒于疫苗免疫效果通常與其免疫劑量或效價相關，因此，比較效價差異明顯的偽狂犬病疫苗的臨床免疫效果無疑具有重要臨床價值。

1 材料與方法

1.1 疫苗

PRV-gE基因缺失弱毒活疫苗A（高效價）與B（低效價），二者每頭份的標識效價分別為不小于105.5TCID50和103.3TCID50。

1.2 疫苗臨床免疫

在一個規模化豬場選取50頭斷奶空懷母豬，隨機分成2組，每組各25頭，分別免疫疫苗A與疫苗B，4個月后進行相應疫苗的二次免疫。仔豬在出生后35、75、120 d 分別免疫其母豬所用疫苗1次。每次免疫劑量均為1頭份。2個試驗組的豬群相對隔離飼養，免疫后全程觀察豬群免疫反應與健康狀況。豬群其他疫苗免疫與飼養管理參照豬場管理規定執行。

1.3 抗體檢測與分析

經前腔靜脈或頸靜脈無菌采集試驗豬的非抗凝血液3 mL，分離收集血清。采集母豬血液的時間是斷奶空懷期（S0）、妊娠期60 d（S60）與哺乳期15 d（S130）；采集仔豬血液的時間是生后15、35、55、75、95、115、135、155 d。每頭母豬在產仔后隨機固定1頭仔豬進行全程采血。用IDEXX公司的阻斷ELISA檢測試劑盒檢測PRV-gB抗 體 與PRV-gE抗 體。用t檢驗對兩組數據進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 豬群健康狀況

母豬、仔豬與生長豬在免疫偽狂犬病疫苗后都未被觀察到明顯不良反應，兩組豬群的發病率低、死亡淘汰率也低，且其間無顯著差異。

2.2 PRV-gB抗體S/N值動態變化

從圖1可見，A組PRV-gB抗體平均S/N值一直低于B組，除在95 d生長豬無顯著差異與在75 d生長豬為顯著（P＜0.05）差異外，其余階段均為極顯著（P＜0.01）差異。A組與B組的PRV-gB抗體平均S/N值變化趨勢大體一致，在母豬階段和仔豬階段都維持相對穩定，在95 d生長豬都出現極顯著（P＜0.01）升高而形成一個明顯峰值，之后迅速極顯著（P＜0.01）下降并維持相對穩定；但兩組之間也有所區別，A組在75 d生長豬時出現一次比較明顯上升，而B組在35 d仔豬與135 d生長豬時各出現一次比較明顯上升。

圖1 PRV-gB抗體S/N值動態變化

2.3 PRV-gB與PRV-gE抗體陽性率動態變化

PRV-gB抗體陽性率在兩組之間存在一些差別（見圖2），雖然兩組之間差異不顯著。A組PRV-gB抗體陽性率僅在95 d生長豬時低至95%，其余階段均為100%。B組PRV-gB抗體陽性率在大多數階段高于95%，但在135 d生長豬時為90%，尤其是在95 d生長豬時低至80%。

兩組之間的PRV-gE抗體陽性率也存在一些差別（見圖2），雖然兩組之間差異也不顯著。兩組PRV-gE抗體陽性率分別介于5%~10%與10%~25%之間，其中A組始終低于B組，隨著仔豬日齡增長，二者相差從5個百分點逐漸加大到15個百分點。

圖2 PRV-gB抗體與PRV-gE抗體陽性率動態變化

3 討論

疫苗免疫抗體的含量與陽性率和野毒感染率是評估PRV-gE基因缺失疫苗免疫效果的3個重要參 數，PRV-gB抗 體 與PRV-gE抗體分別反映偽狂犬病的疫苗免疫抗體與野毒感染抗體。熒光定量PCR結果顯示不同偽狂犬病商品疫苗的病毒載量存在極顯著差異，而活疫苗效價與疫苗毒載量高度相關，故動態比較了高效價與低效價的偽狂犬病疫苗免疫后的3個重要評估參數，結果存在明顯差異。

兩組母豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體陽性率都是100%，說明母豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體全部合格；但是，A組的疫苗免疫抗體平均含量都一直極顯著高于B組，同時其野毒感染率一直低于B組。這些數據表明，提高母豬的偽狂犬病疫苗的效價能夠提高其免疫抗體含量，并進而能夠在一定程度上減少其野毒感染。并且，這種優勢還通過母源抗體而傳遞給了其哺乳仔豬。

在 斷 奶 仔 豬（35 d與55 d）階段，A組的偽狂犬病疫苗免疫抗體的平均含量依然極顯著高于B組仔豬且保持基本穩定，同時其陽性率仍保持100%且野毒感染率沒有增加；而B組仔豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體的平均含量在35 d時出現比較明顯減少，同時其陽性率已不足100%，且其野毒感染率在55 d時增加了。B組仔豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體在35 d出現一定下降后在55 d又出現一定回升，顯示出一定免疫效果，說明其在35 d進行偽狂犬病疫苗的首次免疫是比較合適的。A組仔豬在35 d接種偽狂犬病疫苗無明顯效果，這可能與其母源抗體水平仍然很高有關，朱玲等報道高水平的母源抗體會干擾仔豬的偽狂犬病疫苗免疫。

在整個生長階段（75~155 d），兩組偽狂犬病疫苗免疫抗體平均含量變化趨勢大體一致，但A組一直明顯高于B組；同時，A組疫苗免疫抗體陽性率一直維持在95%以上，而B組僅在80%~95%之間，且B組PRV野毒感染率高于A組的幅度從95 d起增加了。這顯示A組生長豬的偽狂犬病免疫狀況優于B組生長豬，表明高效價偽狂犬病疫苗免疫能夠明顯提高疫苗免疫抗體含量及其合格率、并能明顯減少其野毒感染。兩組生長豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體含量都在95 d出現非常明顯的下降，之后在115 d都迅速上升恢復到較高水平，這很可能與豬圓環病毒2型（PCV2）感染有關。已知PCV2具有免疫抑制特性，有資料報道PCV2感染會抑制偽狂犬病疫苗的體液免疫反應，而試驗豬場斷奶仔豬在轉群后一個月內恰好是PCV2感染的一個高發階段。

綜合分析顯示，A組 的偽狂犬病疫苗免疫抗體數據優于B組，而其野毒感染率低于B組，表明高效價偽狂犬疫苗的臨床免疫效果好于其低效價疫苗。