全自動全血成分分離機白膜法在制備濃縮血小板中的應用效果

梁若鵠 梁燕麗 鄧金蓮 張 穎 龔慧英 吳劍云

廣東省茂名市中心血站中心實驗室，廣東茂名 525000

濃縮血小板分離技術是指通過血細胞分離或離心的方法從全血中提取出血小板濃縮液的過程，提取出的濃縮血小板制品含有高濃度的血小板、白細胞和纖維蛋白[1-3]。目前最常用的濃縮血小板有富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）、富含血小板纖維蛋白（platelet rich fibrin，PRF）、高度濃縮生長因子血纖維蛋白（concentrate growth factors，CGF）等。隨著醫療技術水平不斷提高，成分輸血觀念不斷進步，臨床需要的濃縮血小板不斷增加，在單采血小板無法滿足臨床需要的情況下，為保證臨床止血制劑的及時供應，最大限度利用血液資源[4-5]，廣東省茂名市中心血站一直以來均開展手工濃縮血小板的制備工作。傳統的手工分離方法操作人員在分離操作主要依賴其自身操作經驗和操作專業能力，分離處理中操作人員只能夠通過肉眼進行觀察，沒有相關儀器能夠輔助操作，這難以保證操作分離成功率，容易導致血液產品質量出現偏差，最終影響操作結果的準確性和有效性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至12月在廣東茂名市中心血站無償獻血的健康人群收集的108 袋24 h 內制備的400 ml 全血作為研究對象，采用隨機數字表法分組的方法將研究對象分為實驗組（54 袋）和對照組（54袋）。研究對象在獻血前72 h 內未服用他汀類藥物和阿斯匹林類藥物,采血過程順暢，采血時長≤10 min，采集后在20℃～24℃的環境下保存和運輸。采血袋使用一次性無菌五聯采血袋，購自于四川南格爾生物醫學股份有限公司（生產批號：國械注準20193151548）；全自動全血成分分離機使用型號為Sepamatic-SL（Ⅲ）的高效型全自動全血成分分離機（德國LMB 公司)；型號為8KS 的大容量冷凍離心機（德國Sigma 公司）；型號為Axiolab.AI 蔡司顯微鏡（德國蔡司公司）；型號為BC-3000plus 的全自動血液細胞分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）； 型號為721305 的Nageotte計數板（德國普蘭德公司）。根據《血站技術操作規程（2019 版）》[6]的要求進行質量管理。納入標準：①廣東省茂名市自愿無償的獻血者進行體檢；②抗丙肝病毒（hepatitis C virus，HCV）、乙肝病毒e 抗原（hepatitis B virus e antigen，HBV-e）、人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）和抗梅毒抗體檢測為陰性的全血； ③所有獻血者在獻血前的體檢結果及相關血液學檢查結果，均符合《獻血者健康檢查要求（GBl8467—2011）》[7]相關規定。排除標準：不符合上述①②③標準任何一項時均要排除。本研究經茂名市中心血站醫學倫理委員會審核批準；所有體檢者及其家屬均知情同意。

1.2 方法

研究對象全血需要經過兩次離心再分組比較觀察，第1 次離心，離心力為2074×g，離心溫度為20～24℃，離心時間為19 min，加速為9，減速曲線為21；第2 次離心，離心力為284×g，離心溫度：20～24℃，離心時間為10 min，加速為9，減速曲線為21。制備方法采用白膜法，主要采用本站購置的全自動全血成分分離機使用型號為Sepamatic-SL（Ⅲ）的高效型全自動全血成分分離機（德國LMB 公司）；型號為8KS 的大容量冷凍離心機（德國Sigma 公司）。

1.2.1 對照組

對照組采用手工制備濃縮血小板，把第1 次離心后外觀正常的全血袋置于分漿夾內，將上層血漿流入轉移袋，待血漿流至距紅細胞界面約3 cm 時，用止夾夾緊該轉移管，將余下的血漿（50～60 ml）和近紅細胞界面的白膜層（40～50 ml）擠入白膜袋內，制成血小板混懸液，總容量90～110 ml； 血小板混懸液第2 次離心，利用分漿夾分離制備生成濃縮血小板；手工掃描錄入血液信息管理系統。

1.2.2 實驗組

實驗組采用分離機制備濃縮血小板，把第一次離心后外觀正常的全血袋安裝要分離機上，選擇07-2U懸紅+冰漿+白膜程序。正確掛袋后，按下開始鍵，根據顯示屏提示依次掃描母袋條碼→血漿袋條碼→紅細胞保存液袋→白膜袋和血小板保存袋→操作者編號等，程序開始自動進行分離，制備成的血小板混懸液總容量100 ml；血小板混懸液二次離心，利用分漿夾分離制備生成濃縮血小板。

1.2.3 濃縮血小板的檢測

濃縮血小板20～24℃環境保存至儲存期末（制備后5 d），采用BC-3000plus 的全自動血液細胞分析儀及大容量Nageotte 計數板對其進行質量指標監測，檢測指標包括濃縮血小板的血小板含量，紅細胞計數，儲存期末pH 值。

1.3 觀察指標及評價標準

1.3.1 觀察指標 主要觀察24 h 內制備的400 ml 全血的濃縮血小板的質量指標，包括血小板計數、酸堿度、紅細胞計數、濃縮血小板的容量、濃縮血小板合格率及細菌培養情況。

1.3.2 評價標準 根據國家全血成分質量要求（GBl8469—2012）[8]的相關規定，400 ml 全血制備的濃縮血小板的質量控制項目及其要求包括： ①容量為50～76 ml；②儲存期末pH 值為6.4～7.4； ③血小板含量≥4.0×1010個；④紅細胞混入量≤2．0×109個；⑤無細菌生長。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

實驗組的濃縮血小板計數大于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組的酸堿度比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；實驗組的紅細胞計數小于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；實驗組的濃縮血小板容量小于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組的濃縮血小板合格率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）（表1）。

表1 兩種方法制備濃縮血小板質量的比較（±s）

表1 兩種方法制備濃縮血小板質量的比較（±s）

注 “-” 表示無數據

組別 血小板計數（×1010/L） 酸堿度 紅細胞計數（×109/L） 細菌培養 容量（ml） 合格率（%）實驗組對照組t/χ2 值P 值7.62±0.91 6.41±1.78 4.448＜0.001 7.11±0.04 6.94±1.25 0.999 0.320 1.17±0.35 1.52±0.75 3.108 0.002無菌生長無菌生長--60.00±4.58 64.00±16.36 1.730 0.087 100 92.6 24.725 0.003

3 討論

濃縮血小板是將全血經離心處理后得到的血小板濃縮物，因為濃縮血小板中含有大量生長因子及蛋白質，靜脈輸入后能有效到達到損傷部位并發揮作用，控制炎癥，不但對細胞而且對組織的再生和炎癥的控制都起到促進作用，從而有利于機體修復損傷組織，目前已經在臨床中被廣泛應用[9-13]。濃縮血小板是將室溫保存的多聯袋內的全血，于采血后6 h 內在20℃～24℃的全封閉條件下將血小板分離出并懸浮在血漿內所制成的成分血。

濃縮血小板的采集、制備、儲存、運輸、輸注等各個環節對延長血小板的活性起著極其重要的作用，是保證血小板質量的關鍵。目前血站制備濃縮血小板主要通過手工分離和分離機分離制備完成。而手工分離過程步驟繁瑣，多人操作，無法實時記錄制備時間，一旦發生血液制劑質量問題，血液制備過程無法責任到人，質量管理困難，而且分離制備的產品人為差異性大，產品不標準，且人為誤差很大[14-16]。所以本研究開展分離機的研究項目，目的是解決血液成分制備過程自化管理，進而提升血液成分制備產品質量及改進血液制備的工藝，有效解放人力，提高人員利用率，這會極大促進血站的成分制備智能化建設的進度。2018—2020年本站分批引進全自動全血成分分離機（簡稱分離機）12 臺，部分操作采用分離機代替手工制備濃血小板，在保證濃縮血小板質量穩定在高水平的同時實現了濃縮血小板制備過程的可追溯性、解放人力，降低勞動成本。本研究評價全自動全血成分分離機白膜法制備濃縮血小板的效果，并與國家標準進行比較研究，為制備濃縮血小板質量控制提供參考。

Sepamatic-SL（Ⅲ）高效型全自動全血成分分離機是德國LMB 公司最新研制的全血成分分離設備，主要應用于血站血液成分制備科室。具有一定的優勢，體現在：高效率、高性能、信息化和標準化等。本研究結果顯示，實驗組的濃縮血小板計數大于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組的酸堿度比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；實驗組的紅細胞計數小于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；實驗組的濃縮血小板容量小于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組的濃縮血小板合格率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。提示全自動全血成分分離機白膜法制備濃縮血小板的效果較好，值得推廣。

另外，在全自動全血成分分離機參數設置上應當進一步研究并細化，例如流速控制2～3 g/s，二次離心程序的運行，總耗時10 min 內的控制等因素[17-18]。在將來的工作中，本項目將進一步深入研究。

綜上所述，采用全自動全血成分分離機制備濃縮血小板的效果優于人工方法，其質量優于手工分離制備的同時，可實現濃縮血小板制備過程的自動化管理。