湛江地區52771例女性宮頸HPV感染篩查情況分析

黃勝，梁華英，龐偉鴻，葉曉云，陳亞珍

(湛江中心人民醫院檢驗科，廣東 湛江 524037)

0 引言

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，文獻報道顯示，2015年宮頸癌新發病例9.89萬，死亡3.05萬[1]，嚴重危害女性的生命健康，而宮頸惡性病變的直接病因是高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染[2]，高危因素有早婚或人工流產次數、過早性生活或性伴侶數多、衛生習慣差、宮頸腫瘤家族史、精神創傷、 吸煙、性傳播疾病及免疫抑制等，HPV感染具有地域性和多樣性[3]，了解不同地區女性群體中 HPV 基因型分布情況和對宮頸惡性病變的“歸因”程度，對于宮頸癌預防具有重要意義。本文通過對湛江地區HPV基因型結果進行統計分析，了解湛江地區HPV 基因型的分布情況，為湛江地區宮頸癌的預防和篩查提供有價值的參考數據。

1 資料與方法

1.1 研究對象

對2012年1月至2020年12月間到我院就診的52771女性取宮頸分泌物進行HPV檢測，年齡19-70歲，平均(42±3.6)歲。

1.2 儀器及試劑

采用核酸分子快速雜交基因分型檢測系統，DA7600PCR擴增儀(廣州達安)，HHM-21型醫用核酸分子快速雜交儀(廣東凱普)，基因組抽提試劑盒、PCR擴增試劑盒及雜交試劑盒由廣東凱普生物科技有限公司生產。

1.3 方法

1.3.1 宮頸脫落細胞的采集

先用棉拭子將陰道及宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，再用試劑盒提供的專用宮頸刷插入子宮頸外口，順時針或逆時針轉動5圈采集宮頸脫落細胞，然后將其放入含專用細胞保存液的試管中，4℃冰箱保存。

1.3.2 DNA提取與擴增

吸取500μL細胞懸液標本，14000r/min離心1min，棄去上清液，然后按試劑盒的DNA提取步驟抽提DNA。取1μLDNA抽提液，加入HPV擴增體系，采用擴增儀擴增，95℃預變性10min，95℃變性10s，55℃退火30s，72℃延伸45s，擴增40個循環，最后72℃延伸5min，PCR擴增的產物立即雜交發型或-20℃保存備用。

1.3.3 分子雜交分型

PCR擴增產物95℃變性5min，立即放入冰盒2min，與1mL預熱至45℃的雜交緩沖液混合，在導流雜交儀上45℃孵育10min后導流雜交，加入封阻液封閉，酶標，沖洗，顯色，在30min內查看分析結果，每次實驗必須具備反應質控點，雜交顯色質控點，陽性對照點顯色，陰性對照點不顯色，表示同時在控，實驗結果有效。

1.4 統計學處理

采用SPSS 18.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2012-2020年HPV感染率結果

見表1。

表1 2012-2020年HPV感染率一覽表

2012-2016年HPV感染率年平均43.68%，2017-2020年HPV感染率年平均25.06%，兩者有顯著性差異(P＜0.05)。

2.2 14239例HPV感染亞型分布

見表2。

表2 14237例HPV感染亞型分布(單位：%)

3 討論

宮頸癌是目前世界女性第2常見的惡性疾病，僅次于乳腺癌，盡早篩查、及時發現和適當治療是防治宮頸癌、降低疾病死亡風險的重要手段。隨著HPV亞型與官頸癌發病相關性研究的深入，HPV分型檢測在官頸癌篩查中的地位愈顯重要，HPV分型檢測作為初篩方案，因其高敏感性、高陰性預測值而適于大樣本人群篩查，但特異性稍低。

HPV是一種雙鏈環狀無包膜的DNA病毒，通過黏膜或皮膚傳染，具有親嗜性。根據基因序列的不同，目前已確定的HPV亞型有200余種，超過40種HPV亞型可感染肛門、生殖道和其他部位的上皮和黏膜，而導致女性宮頸癌的關鍵因素為高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的持續感染；HPV感染分低危型和高危型感染，前者是導致尖銳濕疣或宮頸癌前病變的危險因素，后者是導致宮頸癌的直接原因，18種高危型HPV(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83)和5種低危型HPV(HPV6、11、42、43、81)。2012年美國陰道鏡和子宮頸病理協會制定宮頸癌篩查指南將高危型HPV檢測和宮頸細胞學共同納入篩查體系，2015年提出將HPV檢測作為初篩宮頸癌的策略。隨著對HPV研究的不斷深入，HPV主要致病亞型在不同宮頸病變中的作用逐漸明確。高危型HPV持續感染是官頸癌發生發展的最主要因素，其中約60%官頸癌與HPV16/18感染相關。高危型HPV感染可以產生病毒癌蛋白并通過一系列分子機制致使細胞周期失控發生永生化，導致宮頸癌的發生。HPV持續感染導致宮頸局部微環境變化，隨之而來的是免疫抑制、細胞增殖、血管形成及組織分化等，這一系列過程中任何調控因子的改變均可能會引起宮頸細胞的癌變。研究表明，預防HPV感染可以有效預防宮頸癌的發生[4-5]。

本文調查結果顯示，湛江地區2012-2020年間HPV檢測篩查陽性率30.0%，高于曹杰賢等[6]報道的云南7個地區的HPV陽性率16.07%，低于廊坊地區篩查的38.42%的HPV感染率[7]。丁雪晴等[8]報道的泰州地區陽性率為25.57%，本研究結果與之相近。田斌等[9]報道的安徽銅陵地區宮頸炎女性HPV檢出率為35.3%，這些差異存在是否與報道時間不同或者與地區差異有關，需進一步調查研究分析。不同地域HPV感染陽性率和型別存在差異[10]。安徽蚌埠地HPV陽性率為22.40%[11]。遼寧省HPV感染率為35.66%，最主要感染型別為HPV16、HPV58、HPV52、HPV33、HPV53、HPV31[12]；湖南省HPV感染率為22.60%，最常見型別為HPV16、HPV52、HPV58、HPV18、HPVCP8304[13]；深圳市HPV感染率為16.60%，最常見型別為HPV16、HPV52、HPV58、HPV31、HPV39[14]；廣州地區常見的HPV亞型依次為HPV52、HPV58、HPV16[15]。本文研究結果顯示，湛江地區最常見的亞型是HPV52、HPV16、HPV8304、HPV58、HPV53，感染率分別為4.9%、3.1%、2.2%、2.1%、1.6%。西方國家HPV16和HPV18是兩個主要的基因型，與70%的宮頸癌發生相關[16]。據報道，近幾年國內HPV總體感染率為21.69%[17]。本文實驗結果還顯示2017-2020年間的感染率明顯低于2012-2016年間的感染率，是否是隨著社會的進步，大家防治意識的加強，或者HPV疫苗使用人數的增多，感染率下降的原因，有待進一步研究。

據文獻調查數據顯示[18]，女性中約50%知道應進行宮頸癌篩查，約1/3的女性知道宮頸癌篩查的方法，并且在門診就診女性中，約1/10女性主動要求宮頸癌篩查，近一半女性做過宮頸癌篩查，但僅20.72%的女性知道應定期行宮頸癌篩查，大多女性并沒有定期宮頸癌篩查。由此可見，大多女性對定期接受官頸癌篩查缺乏主動性和積極性，由于人們對宮頸癌篩查知識認知的局限，我國宮頸癌篩查的宣教還有待進一步加強。

目前HPV檢測已作為宮頸癌篩查的常規檢測項目，目前許多國家已將HPV檢測納入女性宮頸病變篩查計劃中[19]，HPV感染在不同地區存在地域性差異，通過對本地區宮頸病變患者進行HPV分型檢測及流行病學調查，了解本地區HPV基因亞型分布特點對宮頸癌的早期防治和疫苗研發有重要意義。目前，HPV感染無特效藥，也缺乏療效顯著的療法。盡管HPV疫苗已研制成功并在國內上市，但是價格貴，且不能預防所有的HPV亞型感染。因此，HPV感染的預防工作至關重要。流行病學研究[20]證實高危型HPV感染的檢測是宮頸癌預防的關鍵。HPV疫苗是公認的預防宮頸癌的有效措施，我國先后于2016年7月、2017年5月和2018年4月批準二價疫苗、四價疫苗和九價疫苗在大陸上市，并于2019年12月批準首個國產二價HPV疫苗上市。