苗藥地瓜藤的理化鑒別及其總皂苷含量測定

徐 鋒 吳 潔 陳 滕 張 梅 黃旭龍 吳紅梅

貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025

苗藥是指在苗嶺山脈、烏蒙山脈、武陵山脈、鄂西山脈及大廟山脈的苗族聚居地種植、生長的中草藥[1]。苗藥與中藥的藥性、藥物分類等都有較大的區(qū)別，如苗藥的藥性體現(xiàn)在“五經(jīng)”“五性”“熱藥”“冷藥”上[2]，而中藥的藥性則體現(xiàn)在“四氣五味”“升降浮沉”“歸經(jīng)”“毒性”等方面。苗藥地瓜藤為桑科植物地瓜榕(FicustikouaBur.)的莖、葉，其味苦，性寒，為苗族人民常用藥材，具有清熱利濕、活血通絡(luò)、解毒消腫的功效，主治肺熱咳嗽，痢疾，水腫，黃疸，風(fēng)濕疼痛等[3]。研究[4-8]表明地瓜藤具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理活性，具有良好的開發(fā)應(yīng)用價值。而關(guān)于地瓜藤的化學(xué)研究報道相對較少，分離得到的地瓜藤成分主要為三萜皂苷類、黃酮類、甾體類、香豆素類和有機(jī)酸類等[9]。但地瓜藤的整體化學(xué)組成和皂苷含量情況尚未見報道，不利于民族藥地瓜藤的進(jìn)一步開發(fā)與應(yīng)用。鑒于此，研究鑒定了地瓜藤的化學(xué)組成，并對不同產(chǎn)地地瓜藤藥材中的總皂苷進(jìn)行了測定與評價。

1 儀器與材料

UV-6100S紫外-可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)，HH-4恒溫水浴鍋(上海力辰邦西儀器科技公司)，F(xiàn)A1004B電子天平(上海市安亭電子儀器廠)，800Y粉碎機(jī)(永康市鉑歐五金制品有限公司)，DZF-O真空干燥箱(上海賀德實驗設(shè)備有限公司)。

齊墩果酸(批號：H04J9Z62784，上海源葉生物有限公司)，地瓜藤藥材經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)生藥實驗室王祥培教授鑒定為?？浦参锏毓咸?FicustikouaBur．)的干燥莖、葉，來源見表1。其余試劑均為分析純。

表1 樣品來源信息表

2 方法與結(jié)果

2.1 地瓜藤的理化鑒別 稱取地瓜藤藥材粉末10 g，置于250 mL錐形瓶中，加水100 mL，常溫下浸漬 24 h，濾過。剩余藥渣再加水30～40 mL，在60 ℃水浴上加熱1 h，濾過，取續(xù)濾液作糖、蒽醌、香豆素及內(nèi)酯、黃酮、鞣質(zhì)、生物堿、皂苷和強(qiáng)心苷類的鑒別研究，以蒸餾水作空白對照。結(jié)果表明地瓜藤中含有糖、香豆素、黃酮、皂苷和強(qiáng)心苷類成分(表2)。

表2 化學(xué)成分定性檢識結(jié)果

2.2 地瓜藤總皂苷的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對照品0.1002 g，置容量瓶中加甲醇定容至 50 mL，即得濃度為2.004 mg/mL的齊墩果酸對照品溶液。

2.2.2 地瓜藤供試品溶液的制備 精密稱取地瓜藤粉末適量，用95%甲醇回流提取90 min，提取3次，提取完成后合并濾液，水浴揮干，然后甲醇定容至刻度，即得地瓜藤供試品溶液。

2.2.3 波長的選擇 制備好的齊墩果酸對照品溶液和地瓜藤供試品溶液，在紫外-可見分光光度計上進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)在514 nm處有最大吸收波長，故選擇514 nm為本實驗的測定波長。

2.2.4 線性關(guān)系 用0.1 mL的移液管精密移取齊墩果酸對照品溶液0.0350、0.0450、0.0550、0.0650、0.0750和0.0850 mL分別置于5 mL容量瓶中，精密加入香草醛-冰醋酸(25 mg香草醛加冰醋酸定容至5 mL，即得)0.2 mL，然后加高氯酸0.8 mL，混勻，置60℃水浴加熱15 min，立即用水冷卻5 min，加入4 mL的冰醋酸，搖勻，靜置5 min后，在514 nm處測定吸光度，以齊墩果酸的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)計算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果如圖1所示。

圖1 齊墩果酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2.5 精密度考察 精密吸取同一濃度齊墩果酸對照品溶液，連續(xù)測量6次，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。平均吸光度為0.5011，RSD值為0.11%<2.00%，表明方法的精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性考察 取同一批次的樣品6份，分別精密稱定，提取制備，然后對這6批樣品進(jìn)行平行試驗，測其吸光度。其RSD值為2.20%<3.00%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收實驗 取同一批次的地瓜藤粉末適量，加入齊墩果酸對照品溶液，然后進(jìn)行提取、制備和計算后，根據(jù)回收率= (A-C)/B×100%(A為加入對照品后測得的量，B為加入對照品的量，C為供試品中所含的量)，計算其回收率。結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率實驗的結(jié)果 (n=6)

2.2.8 樣品含量測定 分別精密稱取不同批次干燥至恒重的地瓜藤粉末適量，按確定的提取和顯色方法測量，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算，以地瓜藤干燥品計算各批次藥材中總皂苷的含量，結(jié)果見表4。不同產(chǎn)地的地瓜藤總皂苷的含量差異較大，這可能與其產(chǎn)地的氣候、土壤和光照等因素有關(guān)。

表4 不同產(chǎn)地地瓜藤皂苷含量的測定結(jié)果

3 討論

民族藥地瓜藤的理化鑒別表明地瓜藤含有糖類、香豆素類、黃酮類、皂苷類和強(qiáng)心苷類成分，但是目前的報道主要集中于三萜皂苷類、黃酮類、甾體類、香豆素類和有機(jī)酸類成分，本次的鑒別研究結(jié)果可為苗藥地瓜藤的化學(xué)研究提供一定的參考?，F(xiàn)代研究[10]發(fā)現(xiàn)中藥中總皂苷具有較好的降血脂、降血壓、抗炎和抗氧化等藥理作用，提示地瓜藤總皂苷可能為其主要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

地瓜藤總皂苷含量測定的研究中，本文分別考察了提取方式、時間、次數(shù)、溶劑和溶劑濃度等。對于提取方式的考察(超聲、回流)，發(fā)現(xiàn)回流提取效果好于超聲提??；考察提取時間發(fā)現(xiàn)，90 min 的提取效果好于60 min，能保證地瓜藤皂苷成分提取完全；對于提取次數(shù)，考察了提取1次、2次、3次和4次的效果，發(fā)現(xiàn)提取3次已經(jīng)將藥材中皂苷提取完全；對于提取溶劑和溶劑濃度，考察了乙醇和甲醇的提取效果及溶劑不同濃度(30%、50%、70%和95%)的提取效果，發(fā)現(xiàn)95%甲醇的提取效果較好。

實驗利用香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法對不同產(chǎn)地地瓜藤中總皂苷的含量進(jìn)行測定。為了能夠保證實驗的靈敏度，所用的顯色劑必須要現(xiàn)配現(xiàn)用，且必須要嚴(yán)格保證加熱的溫度與顯色時間。在測定過程中，顯色后的供試品溶液穩(wěn)定性良好，能夠滿足實驗測試需要。不同產(chǎn)地地瓜藤的提取制備以及含量測定要保持一致，防止實驗時產(chǎn)生過失誤差而導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)發(fā)生變化。依據(jù)地瓜藤中總皂苷的測定結(jié)果可知，在所測的11個不同產(chǎn)地地瓜藤的總皂苷含量相差較大，其中含量最高的是重慶市永川區(qū)陳食鎮(zhèn)雙河村為38.02 mg/g，含量最低的是重慶市永川區(qū)朱龍花村為11.27 mg/g。地瓜藤的總皂苷含量可能與其生境相關(guān)，也提示地瓜藤藥材的質(zhì)量差異較大，需要引起重視，該結(jié)果也與課題組前期研究和文獻(xiàn)報道結(jié)論相符[11-12]。

苗藥具有應(yīng)用鮮品的特色，故貴州省地方標(biāo)準(zhǔn)收載地瓜藤藥材為其新鮮或干燥地上部分[13]。鮮品和干品所含成分是否存在較大差異，尚未得到解答。此外，本研究所建立的地瓜藤總皂苷含量測定方法是否適用于地瓜藤鮮品，仍需進(jìn)一步研究。在實驗過程中發(fā)現(xiàn)地瓜藤藥材容易霉變，有報道[14]豬飼喂霉?fàn)€地瓜藤會引起中毒。因此，質(zhì)量控制是資源豐富的地瓜藤開發(fā)與應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，具有重要的現(xiàn)實意義。