阿昔洛韋平衡溶解度和表觀油水分配系數的測定*

謝娜娜，黃玉香，林水森，謝志新

(泉州醫學高等專科學校藥學院，福建 泉州 362100)

阿昔洛韋(Acyclovir，ACV)又名無環鳥苷，化學名為9-(2-羥乙氧甲基)鳥嘌呤，為開環核苷類抗病毒藥，具有廣譜低毒的特點，主要作為抗皰疹病毒的首選藥物，臨床上廣泛用于治療水痘、帶狀皰疹病毒和單純性皰疹病毒等引起的感染[1-2]。阿昔洛韋口服吸收差，生物利用度僅為10%～20%，臨床上采用高頻率給藥方案，病人順應性差[3-4]。

藥物的平衡溶解度和表觀油水分配系數是反映藥物理化性質的兩個重要參數，影響著藥物在體內的吸收、分布及轉運。目前國內外對阿昔洛韋理化性質的研究報道較少。本文對阿昔洛韋在不同介質中的平衡溶解度和表觀油水分配系數進行了測定，以期能夠了解阿昔洛韋的溶解性能及脂溶性大小，推測阿昔洛韋的生物藥劑學分類(BCS)類型，為設計生物利用度高的阿昔洛新劑型提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國安捷倫)，BSA124S電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)，UV-2600紫外可見分光光度計(日本島津)，TS-2102C恒溫震蕩搖床(上海天呈實驗儀器有限公司)，TGL-16M型臺式高速冷凍離心機(湖南湘儀實驗室儀器有限公司)，THZ-C恒溫振蕩器(太倉市實驗設備廠蘇州培英實驗設備有限公司)， KQ2200B超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

阿昔洛韋對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號140 630-201 403)，阿昔洛韋原料藥(湖北威德利化學科技有限公司，批號HBW190110)，甲醇(色譜純，國藥集團化學試劑有限公司)，其它試劑為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 HPLC測定方法的建立

2.1.1 檢測波長的選擇

取阿昔洛韋對照品適量，配成質量濃度約為10 μg·mL-1的對照品水溶液。以水為空白對照，按照紫外-可見分光光度法，于200～400 nm波長范圍內進行紫外掃描。紫外掃描結果顯示，阿昔洛韋在251 nm波長處有最大吸收，因此選擇251 nm為檢測波長[5-6]。

2.1.2 色譜條件及系統適用性

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：甲醇-水(10∶90)；檢測波長：251 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL·min-1；進樣量：10 μL。取阿昔洛韋對照品溶液進行系統適用性試驗，結果表明,阿昔洛韋的理論塔板數不低于12000，保留時間5.764 min，對稱因子1.030，主峰與雜質峰分離良好，分離度大于1.5，系統適用性良好，表明該方法可用于阿昔洛韋的測定。

2.1.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿昔洛韋對照品50.0 mg，置于50mL量瓶，加入0.4%氫氧化鈉5 mL溶解后，加純化水稀釋至刻度，搖勻，得到質量濃度為1 mg·mL-1的阿昔洛韋對照品儲備液。精密量取阿昔洛韋對照品儲備液1.0 mL，置于100 mL量瓶，加純化水稀釋至刻度，搖勻，得阿昔洛韋對照品溶液。

2.1.4 線性關系考察

精密量取一定量的阿昔洛韋對照品儲備液，置于100 mL量瓶，用純化水稀釋至刻度，搖勻，配制成1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00、80.00 μg·mL-1的系列對照品溶液。按“2.1.2”項所列色譜條件進樣10 μL，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標，阿昔洛韋質量濃度(ρ，μg·mL-1)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程A=33.025ρ-2.8224，r=0.999 9，結果表明，阿昔洛韋在1.25～80.00 μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.1.5 精密度試驗

取阿昔洛韋對照品溶液，按“2.1.2”項所列色譜條件連續進樣5次，并記錄峰面積，計算日內相對標準偏差(RSD)；每日測定1次，連續測定5 d，計算日間相對標準偏差(RSD)。結果顯示，日內RSD為0.12%(n=5)，日間RSD為0.23%(n=5)，RSD均小于2%，表明該測定方法精密度良好。

2.1.6 回收率試驗

精密量取對照品儲備液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL，分別置100 mL量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻，得低、中、高三種不同質量濃度，每個質量濃度各3份。按“2.1.2”項所列色譜條件，分別進樣10 μL，記錄峰面積，計算回收率。結果顯示低、中、高質量濃度的回收率依次為100.18%(RSD為0.22%，n=3)、99.13%(RSD為0.10%，n=3)、99.28%(RSD為0.12%，n=3)，表明該測定方法準確。

2.1.7 穩定性試驗

精密稱取阿昔洛韋原料藥15份，分別加入水、“2.2.1”項配制的溶液，配制成質量濃度為10μg·mL-1的供試品溶液，于0、4、8、12、24、48、72h按“2.1.2”項所列色譜條件，進樣10 μL測定峰面積，計算RSD。結果顯示RSD均小于2%，表明阿昔洛韋在上述溶液中72h內穩定。

2.2 阿昔洛韋平衡溶解度的測定

1)溶液配制：配制pH為1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2的鹽酸溶液，pH為3.0、4.0的檸檬酸-檸檬鈉緩沖溶液，pH為4.5、5.8、6.8、7.4、8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

2)分別取純化水及“2.2.1”項下配制的溶液各50 mL，置250 mL具塞錐形瓶中，加入過量的阿昔洛韋原料藥，于恒溫震蕩搖床中震蕩(37 ℃，100 r/min)72 h，平衡過程中始終保持有固體藥物存在[7-8]。平衡72 h后取出，以 2650 r/min 離心 10 min，取上清液，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾后，用純化水稀釋適當倍數，按“2.1.2”項所列色譜條件進樣10 μL，記錄峰面積，代入“2.1.4”項下回歸方程計算阿昔洛韋在不同介質中的平衡溶解度。平行做3組，結果見圖1。

圖1 阿昔洛韋在不同pH介質中的平衡溶解度

同時測得阿昔洛韋在水中的溶解度為(1.02±0.01)mg·mL-1，按中國藥典藥品近似溶解度表示法顯示阿昔洛韋微溶于水。

2.3 阿昔洛韋表觀油水分配系數的測定[9]

分別取純化水及“2.2.1”項下配制的溶液各50 mL，置250 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL正辛醇，于恒溫震蕩搖床中震蕩(25 ℃，100 r/min)24 h，使其互相飽和，靜置分層后，分離油水兩相，保存備用。

取適量阿昔洛韋加入被正辛醇飽和的水相中，超聲溶解，用0.45 μm微孔濾膜過濾后作為平衡前的水相。精密量取平衡前的水相溶液10.0 mL，置50 mL螺口離心管中，再分別加入被純化水/緩沖液飽和的正辛醇5.0 mL，密蓋，于恒溫振蕩器中振蕩(37 ℃，150 r/min)24 h，使達分配平衡，取出。轉移至離心機中以 2650 r/min 進行離心10 min，使兩相分層，取出。分離水相，用10%甲醇稀釋適當倍數，按“2.1.2”項所列色譜條件進樣10 μL，測得平衡后水相中阿昔洛韋的質量濃度(ρ2)，平行做3組。將平衡前的水相，用流動相稀釋適當倍數，按“2.1.2”項所列色譜條件進樣10 μL，測得平衡前水相中阿昔洛韋的質量濃度(ρ1)。按下式計算阿昔洛韋的表觀油水分配系數，結果見表1。

表1 阿昔洛韋在不同介質中的表觀油水分配系數 (n=3)

3 討論

平衡溶解度和表觀油水分配系數可以預測藥物在體內的吸收、分布及轉運[9]。測定阿昔洛韋在不同pH介質中的平衡溶解度和表觀油水分配系數，可為阿昔洛韋新劑型的開發提供參考。

阿昔洛韋在pH 1.0～8.0介質中的平衡溶解度測定結果表明,阿昔洛韋溶解性能與pH呈現相關性，在pH 1.0～2.2范圍內，阿昔洛韋的溶解度隨pH的增大而急劇下降；在pH 2.2～pH 8.0范圍內，溶解度變化趨勢不大。表明阿昔洛韋具有一定的弱堿性，這與阿昔洛韋結構中鳥嘌呤上的氨基和咪唑環有關。

生物藥劑學分類系統(BCS)對溶解性分類的界定為：藥物的最高單次劑量能完全溶解在不高于 250 mL 的pH 1.2～6.8水介質中，可判定為高溶解性[10]。阿昔洛韋在治療水痘及帶狀皰疹時單次給藥劑量為0.8 g，由此確定阿昔洛韋的最高單次劑量為 800 mg。用阿昔洛韋的最高單次劑量除以所測定的溶解度，發現在pH2.0～8.0范圍內均大于250 mL，為低溶解性藥物。油水分配系數可以用來預測藥物的親脂性及透過生物膜的能力[11]。正辛醇有許多與生物膜相似的性質[12]，在藥物設計時常選用正辛醇作為模擬生物膜的有機溶劑來測定表觀油水分配系數。阿昔洛韋表觀油水分配系數的測定結果顯示，阿昔洛韋在不同pH介質中的表觀油水分配系數(PO/W)均小于1，表明阿昔洛韋的親脂性小，提示阿昔洛韋為低滲透性藥物，穿透生物膜的速率是阿昔洛韋吸收的限速步驟。綜合阿昔洛韋的平衡溶解度和油水分配系數測定結果，可初步推定阿昔洛韋為BCS第四類，即低溶解性、低滲透性藥物。