復合益生菌對斷奶仔豬生長性能及腸道菌群的影響

柳成東 肖俊峰 肖麗萍 王麗娜 邵金龍 吳有林 丁能水,4*

（1福建傲農生物科技集團股份有限公司，福建漳州 363000；2福建傲農生物科技集團股份有限公司/福建省生豬營養與飼料重點實驗室，福建漳州 363000；3廈門市同安區農業農村局農村經濟發展中心，福建廈門 361100；4江西農業大學豬遺傳改良與養殖技術國家重點實驗室，江西南昌 330045）

目前，隨著我國禁止在飼料中使用促生長藥物添加劑的養殖現狀，開發新型飼料添加劑成為了亟待解決和研究的話題[1,2]。凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌作為我國農業農村部規范的飼用益生菌（《飼料添加劑品種目錄》，2013）往往以單一菌或組合菌的方式運用在飼料和畜禽養殖中[2]。有大量研究表明[3-7]，飼糧中添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著改善斷奶仔豬的生長性能。很少有研究表明，凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合在斷奶仔豬上的運用效果；其中，王志祥等[8]和王乙茹等[9]的研究顯示，在斷奶仔豬飼糧中同時添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌后，仔豬的生長性能表現出更好的飼喂效果。針對這一試驗結果，本研究從凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合比例方面存在的問題展開研究，以期為后期養豬生產中凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的聯合應用提供理論依據。

通過體外評估飼用益生菌的效果，可以提高益生菌在動物飼養試驗上的運用效果和研發效率[10]。同時，牛津杯法是體外評估益生菌抑菌性能常用的評估方法，根據抑菌圈的大小來判定其抑菌效果[11,12]。據此，本研究前期采用牛津杯法評估凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌不同比例之間的抑菌效果來選擇最佳的在飼糧中的添加比例，為飼用益生菌組合運用評估提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

凝結芽孢桿菌（總菌數：1×1010CFU/g）由昆明三正生物科技（集團）有限公司提供；枯草芽孢桿菌（總菌數：1×1010CFU/g）由廣東珠海建明工業有限公司提供。

產腸毒素大腸桿菌K88（Enterotoxigenic Escherichia coli K88CGMCC1.2385）購買于北納生物科技有限公司。

1.2 抑菌試驗

試驗采用牛津杯法，將凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌計數后，挑取單一菌落進行活菌培養24 h，按菌液體積1∶1、2∶1、5∶1和10∶1的比例接種到培養液中，混合培養24 h后完成對大腸桿菌K88的抑菌試驗，按照最佳的抑菌效果體積比例，來確定凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌在飼料中的添加比例和添加量，進而開展動物飼養試驗。

1.3 試驗設計

按體重一致原則將54頭25日齡健康的斷奶仔豬，分為2個處理組。每個處理組3個重復，每個重復（單欄）9頭斷奶仔豬。對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中添加凝結芽孢桿菌800 g/t＋枯草芽孢桿菌400 g/t。

1.4 試驗飼糧

試驗飼糧配方參照NRC（2012）豬營養需要量標準配制基礎飼糧，配方組成及營養水平見表1，基礎飼糧中不添加任何促生長藥物飼料添加劑及其他飼用益生菌。

表1 基礎日糧組成及營養水平

1.5 飼養管理

試驗在福建省三明市清流養寶生態農業有限公司豬場完成。試驗豬單欄飼養，產房溫度保持24～27℃。試驗全程自由采食和飲水，24 h光照。飼養試驗周期7 d。

1.6 測定指標

1.6.1 生長性能

以每欄為單位統計斷奶仔豬平均日增重、平均日采食量及料肉比和腹瀉率，腹瀉率參照浦俊寧等[10]。

腹瀉率（%）＝[試驗期間每欄腹瀉頭數÷（試驗期間每欄仔豬總數×試驗天數）]×100%

1.6.2 腸道菌群測定

屠宰后，用無菌EP管采集豬盲腸食糜，放置于液氮速凍，放-80℃冰箱保存備用，采用平板計數法測定盲腸中大腸桿菌和乳酸桿菌數量[12]。

1.7 統計分析

生長性能、腸道菌群等數據采用T-test進行數據分析，抑菌圈數據采用單因素方差分析和Duncan's多重比較。采用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析。P≤0.05表示顯著差異，0.05＜P≤0.1表示有差異的趨勢。

2 結果與分析

2.1 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌對大腸桿菌K88抑菌效果的評估

由表2可知，凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌對大腸桿菌K88的抑菌作用無明顯差異（P＞0.05）。同時，凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌不同比例抑菌作用之間有明顯差異（P＜0.05）；且當凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌2∶1的組合時，對大腸桿菌K88的抑菌效果最佳。

表2 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合對大腸桿菌K88的抑菌圈直徑 （mm）

2.2 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合對斷奶仔豬生產性能的影響

由表3可知，日糧中添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著降低仔豬的料肉比和腹瀉率（P＜0.05）；但對仔豬的末重和平均日采食量無影響（P＞0.05）；對斷奶仔豬增重有增加的趨勢（0.05＜P≤0.1）。

表3 凝結芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌組合對斷奶仔豬生長性能的影響

2.3 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合對斷奶仔豬腸道菌群的影響

由表4可知，與對照組相比，日糧中添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著降低仔豬盲腸中大腸桿菌的數量（P＜0.05）；顯著增加仔豬盲腸中乳酸桿菌的數量（P＜0.05）。

表4 凝結芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌組合對斷奶仔豬腸道菌群的影響 （log10CFU/g）

3 討論

3.1 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合抑菌性能的實驗評估

大腸桿菌K88是引起斷奶仔豬腹瀉的主要腸道致病菌，往往斷奶仔豬腹瀉情況在斷奶后7 d左右較為嚴重[13-16]，這也是試驗周期采用7 d的科學依據。試驗結果顯示，與單一的凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌對大腸桿菌K88的抑菌效果相比；不同組合比例之間對大腸桿菌K88對的抑菌效果差異顯著，這也是凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合后，在斷奶仔豬上未取得效果可能的原因[8,9]。這也提示，飼用益生菌組合運用，應慎重考慮復配菌種、菌群之間的比例。

3.2 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合對斷奶仔豬生長性能的影響

已有研究顯示[3-7]，飼糧中單一添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著改善斷奶仔豬的生長性能。本研究顯示，當凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌按2∶1的添加劑量組合時，能夠顯著改善斷奶仔豬飼料轉換率和腹瀉情況，這一結果也與體外牛津杯抑菌試驗結果一致（表2）。該結果表明，體外實驗的評估結果一定程度可以體現體內動物飼養試驗的飼喂效果。

3.3 凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合對斷奶仔豬腸道菌群的影響

腸道菌群的發育和平衡對斷奶仔豬的腸道健康有著重要的作用，腸道中的乳酸桿菌和大腸桿菌的存在形成了維持腸道健康的2個主要細菌[17-19]。本試驗結果顯示，飼糧中同時添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著降低斷奶仔豬腸道中大腸桿菌的數量，增加腸道中乳酸桿菌的數量。這也是在飼糧中添加凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌后，能夠改善斷奶仔豬生長性能的重要因素之一（表 3）。

4 結論

本研究從體外牛津杯試驗到體內動物飼養試驗，從2個方面同時驗證了凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組合在飼糧中能夠平衡腸道菌群，改善斷奶仔豬的生長性能。一方面充分說明在體外評估益生菌的抑菌效果的基礎上，進行動物飼養試驗是可以作為初步的評估依據；另一方面，這也為凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌能夠作為益生菌復配在飼料添加劑中運用提供科學依據。