豬口蹄疫O型抗體檢測試紙條對比試驗

王紅娜

（河南省寶豐縣農業農村局，河南寶豐 467400）

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染性和快速遠距離傳播的動物疫病，被世界動物衛生組織（OIE）列為必須報告的傳染病，我國將其列為一類傳染病[1,2]。該病具有傳播速度快、感染致病性強、潛伏期短等特點，對畜牧業危害極大。2020年韓國、日本相繼發生豬、牛、羊口蹄疫，經濟損失達20億美元，致使兩國畜產品無法進入國際市場。2001年英國暴發O型口蹄疫時，共撲殺動物592萬頭，造成直接經濟損失27億英鎊，間接損失達200億英鎊，相當于英國國內生產總值（GDP）的2.5%[3]。

根據我國國情，目前疫苗免疫是最主要的也是最經濟的手段[4]，每年國家投入大量的人力、財力和物力用于疫苗的采購和實施強制免疫[5]，因此疫苗的免疫效果直接影響著口蹄疫的防控結果[6,7]。目前，盡管養殖者都高度重視口蹄疫的防疫，然而許多豬場的免疫效果并不理想，免疫豬只時有發病[8,9]。因此，快速簡單地評價疫苗免疫狀況至關重要。本試驗旨在通過對比評估4種豬口蹄疫O型抗體檢測試紙條的敏感性及特異性，并對比豬口蹄疫O型VP1結構蛋白抗體ELISA診斷試劑盒的檢測結果，為基層獸醫和養殖戶開展疫苗免疫效果評估提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 豬口蹄疫O型抗體檢測試紙條

4種豬口蹄疫O型抗體檢測試紙條分別以A、B、C、D代表（見表1）。

表1 4種豬口蹄疫O型檢測試紙條及規格

1.2 血清樣品

4份已知陽性血清樣品和陰性血清樣品分別來源于口蹄疫病毒O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒及口蹄疫病毒A型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒中的陽性對照血清和陰性對照血清作為相關及非相關標準血清；20份豬場免疫血清來源于河南省平頂山市某規模化豬場，免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗28 d后采血制備血清。

1.3 抗體檢測試劑盒

豬口蹄疫O型VP1結構蛋白抗體ELISA診斷試劑盒購自鄭州某生物技術有限公司，規格為96 T×2。

1.4 敏感性試驗

將口蹄疫O型已知陽性血清樣品用0.02 mol/L pH值7.2 PBS緩沖液分別作1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024共9個稀釋度，然后按照4種試紙條的說明書進行檢測與結果判定。

1.5 特異性試驗

將4份已知陽性血清樣品和陰性血清樣品按照4種試紙條的說明書進行檢測與結果判定。

1.6 試紙條與試劑盒對比試驗

將4種試紙條對20份豬場免疫血清進行檢測與結果判定，同時用豬口蹄疫O型VP1結構蛋白抗體ELISA診斷試劑盒對20份豬場免疫血清進行檢測，并與試紙條檢測結果進行對比分析。

2 結果與分析

2.1 敏感性試驗

檢測結果顯示，A試紙條的檢測極限為1∶256稀釋的樣品，B試紙條的檢測極限為1∶128稀釋的樣品，而其他2種試紙條的檢測極限均較低，詳見表2。

表2 各試紙條敏感性試驗結果

2.2 特異性試驗

檢測結果顯示，A和D試紙條的特異性較好，而其他2種試紙條的特異性均較差，已知陰性血清樣品檢測出假陽性結果，詳見表3。

表3 各試紙條特異性試驗結果

2.3 試紙條與試劑盒對比試驗

20份豬場免疫血清檢測結果顯示，豬口蹄疫O型VP1結構蛋白抗體ELISA診斷試劑盒的檢測合格率為100%，A～D試紙條的檢測合格率分別為90%、65%、55%、40%，詳見表4。

表4 各試紙條與試劑盒對比檢測結果

3 討論

當前國內外采用口蹄疫疫苗免疫抗體檢測方法主要是液相阻斷ELISA。該方法雖然具有特異、敏感等特點，但操作復雜，費時費力，且需特定的儀器設備和專業技術人員，很難在基層普及推廣[10]。由于試紙條具有操作方便、快速檢測等優點，具有廣闊的推廣應用前景和價值。除上述口蹄疫抗體檢測試紙條外，還有針對口蹄疫合成胎疫苗的檢測試紙條，同時，隨著口蹄疫疫苗的不斷研發和創新，新的檢測口蹄疫抗體的試紙條也將應運而生[11]。梁素聯等[12]比較了口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒與其改進試劑盒的靈敏性，為豬口蹄疫抗體的精準檢測提供參考。

把試驗結果數據進行調整，經對照各種試紙條監測數據基本符合測試敏感性要求，證明基本試劑的原理是符合設計的。其中各試紙條監測數據共同顯示結果，樣本編號為14、19、8、13號的結果應判為異常，可能與試驗操作有關。其余結果分析，B試紙條監測數據最不穩定，應該屬于實際設計本身問題；D試紙條顯示數據基本符合設計規律，更接近于試驗預期，取值誤差應該在臨界值選取上偏高，表現靈敏度偏低。而A試紙條設計臨界值就較為合理，接近本試驗選取的液相阻斷ELISA臨界標準。

試驗通過對4種豬口蹄疫O型抗體檢測試紙條的敏感性、特異性方面進行評估，對比檢測結果顯示，僅有A試紙條的敏感性和特異性較好，且與試劑盒抗體檢測結果的符合率高達90%，更適合用于基層獸醫和養殖戶進行現場快速檢測評估。而其他3種試紙條的敏感性和特異性較差，與試劑盒抗體檢測結果的符合率較低（40%～65%），且存在已知陰性血清檢測出假陽性結果，這將影響臨床血清樣品的檢測評估，檢測性能還有待進一步優化提升。

但結合實際生產應用，A試紙條可以選為評定免疫效果應用；而D試紙條更適于大群生產檢測應用，以稍微偏高的抗體表現來判斷是否應補免，有利于超前保護動物抗病力。

4 結論

本研究中，4種抗體檢測試紙條的特異性較穩定，但敏感性存在差異，因此，尚有較大發展空間。但其方便、快速的優點，在實踐中依然有極大的應用價值。