食品微生物檢測技術PCR的應用分析

南京

為了實現對食品的綜合性管理和檢測，需要加強對新技術的有效應用。PCR技術在食品微生物檢測中的有效應用，不僅能夠保證檢測的準確性，還能夠避免其他因素對檢測過程的影響，從而進一步保證食品的安全性，及時解決其中的隱患問題。

一、食品微生物檢測技術的發展情況

現如今，各種先進的檢測方式已經在我國食品微生物檢測中得到了有效應用，主要是對其中的大腸菌群等進行檢測。這些因素與人們的身體健康存在直接聯系，其中的檢測指標既是反映食品生產企業整體衛生情況的關鍵方式，更是衡量食品健康安全質量的主要標準。因此，在具體的食品微生物檢測中，要加強對大腸菌群的綜合性檢測，主要是因為大腸菌群可以更加準確地反映食品的樣品情況，及時發現其中的變質現象。

目前，在對食品微生物檢測方式進行分析時，發現其主要包括血清學分型鑒定、噬菌體分型和急性病毒試驗等方式。這種方式不僅可以更加準確地反映食品樣品中的致病菌種類，還能夠優化檢測流程，進而不斷提高我國食品微生物檢測的準確性。

二、PCR技術

為了實現對食品微生物的準確檢測，相關學者加強了PCR技術的應用和分析。其屬于擴增的特定DNA片段方法，能夠利用耐熱的 DNA聚合酶自身作用，優化循環操作流程。同時，在體外，此技術還可以將DNA模板進行優化，等到其迅速擴增數百萬倍后，通過瓊脂糖凝膠電泳這種方式，對擴增DNA產物進行檢測，在此基礎上確定微生物的種類。目前，PCR技術已經在食品源疾病暴發調查等領域中得到了有效應用，更是鑒定病原菌的關鍵工具。此技術不僅能夠提高檢測的靈敏度，還能夠縮短操作的時間，及時檢測致病微生物。

一般情況下，PCR技術還包括多重PCR檢測和巢式 PCR 檢測等內容。在食品微生物檢測過程中的應用，能夠及時發現沙門氏菌等病原微生物。但是，PCR技術在應用中還存在一定的局限性，其產品非常容易出現污染問題。因此，相關學者在原有的PCR 傳統理論基礎上，開發了熒光定量PCR技術，加強了對此技術的創新，可以利用熒光信號強度等，確定食品樣品中的微生物種類和數量，從而避免其他因素對檢測結果的影響。

三、PCR技術的檢測內容

以前的食品微生物檢測技術已經不能滿足食品安全的要求了，這就需要加強對PCR技術的有效應用，實現對食品微生物的綜合性檢測。在對其工作原理進行分析時，發現主要有高溫變形和中溫延伸等內容，只有這樣才能夠對食品中的微生物核酸序列進行準確檢測。等到完成檢測工作后，食品微生物檢測技術PCR可以在單個核酸分子序列上實現復制。同時，在對PCR技術進行分析時，發現其可以結合不同的溫度，實現對微生物信息的整合，避免出現高溫變形問題。

在具體的PCR技術微生物檢測中，如果食品在94℃高溫下，就會出現變形問題，進而實現成解鏈的效果。但是，在具體的檢測中，其會受到溫度的影響，如果其降到55℃，就會對食品微生物的檢測帶來影響。在72℃的溫度下，微生物引物的引導可以在延伸條件下，對微生物進行科學復制，在此基礎上對微生物的DNA序列進行科學檢測，實現對食品微生物的綜合性檢測，從而在此基礎上獲取足量的DNA序列，保證PCR技術檢測的準確性。

四、PCR技術在食品檢測中的特點

（一）優點

以前的檢測方式一般會采用平板培養法等對食品微生物進行檢測，然后通過菌落計數，對不同菌體的濃度進行科學判斷。雖然這種方式具有操作簡單等優勢，但是整體的檢測過程所消耗的時間比較長，一般需檢測3到10天。在對PCR技術進行分析時，發現其最大的優點就是檢測速度非常快，可以對特異區的擴增進行檢測，在幾個小時內就可以成功擴增，可以檢驗和判斷出待檢測樣品的類型，具有非常好的迅捷性和靈敏性。

（二）缺點

PCR技術在食品微生物檢測中存在一定的局限性，并不能完全取代傳統的檢測方式。在對其特點進行分析時，發現其主要包括以下缺點：（1）假陽性問題。核酸在檢測中會受到污染，進而出現假陽性等問題。在具體的擴增中，發現其只有一個污染源，進而對檢測的結果造成影響。（2）假陰性問題。在對此問題進行分析時，發現主要是因為PCR技術本身存在問題，這會對待測樣品帶來影響。再加上食品成分比較復雜，多種成分會出現比較復雜的化學反應，如果不對其進行有效處理，就會出現假陰性問題。（3）定量檢測困難。在具體的食品微生物檢測中，影響PCR產率的因素非常多，并不能為定量檢測提供條件，更不能為其提供準確的數據支持，這會對PCR技術的有效應用造成影響，在一定程度上限制了PCR技術的應用范圍。

五、食品微生物檢測技術PCR的應用現狀

相關學者在對PCR進行分析時，發現其還被稱為聚合酶鏈式反應，主要是通過儀器和試劑，然后在體外模擬的天然DNA復制流程。所以，這種技術可以在比較短的時間中，獲得大量的基因片段，進而實現對食源性微生物的準確判定。

現如今，PCR技術在我國環境工程和食品工程等領域中已經得到了有效應用。尤其是PCR檢測技術在我國食品微生物檢測中的有效應用，不僅可以對靶序列進行檢測，還能夠促進模板和引物之間的結合，在短時間中獲得大量的目的 DNA片段，然后將其應用到后續的凝膠電泳與基因測序等內容中，在此基礎上確定擴增DNA的基本序列信息。

六、食品微生物檢測技術PCR應用的具體措施

（一）有害致病菌的檢測

如果在食品微生物檢測中存在有害致病菌，就會對人們的身體健康帶來比較嚴重的影響。再加上致病菌的種類比較多，如病毒和真菌等，這就需要積極借助PCR技術，實現對有害致病菌進行的綜合性檢驗，主要步驟為：（1）需要對致病菌進行樣本的提取，科學應用高速的離心法，實現對致病菌的有效分離。同時，還要加強對高溫手段的科學應用，實現對致病菌破裂的核算。（2）對致病菌的DNA序列進行綜合性分析，對比較典型的DNA片段更加準確地篩選出來，主要是以靶NDA序列作為依據，加強其和特異性引物的有效結合，當引物的DNA中存在靶DNA片段，其檢測物就屬于致病菌細胞，進而不斷提高整體檢測的準確性。

（二）大腸桿菌的檢測

研究發現，加強對大腸桿菌特異性引物的PCR擴增，能夠及時檢出飲用水中的大腸桿菌，并且在菌量比低的情況下，也可以及時檢出相關的物質。但是，在具體的研究中，發現其不能夠破壞微生物DNA，這會導致在PCR檢測中出現假陽性。然而，這幾種滅菌方式都會對破壞微生物的核酸檢測帶來影響，所以需要加強對PCR技術的有效應用，及時檢測出一次性使用衛生中的致病菌，為食物的安全性提供保障。

（三）啤酒腐敗菌檢測

眾所周知，啤酒是當前人們日常生活中比較常見的酒類，并且我國啤酒的產量也非常大。在對啤酒的制作流程進行分析時，發現其主要是通過發酵而成的，并且在啤酒發酵中，乳酸桿菌屬于其中的關鍵原料。但是，在啤酒花中受到一些其他因素的影響，存在一定量的異A酸，如果不對其進行有效檢測，就會影響啤酒生產的安全性。

部分學者在具體的研究中，發現啤酒腐敗菌和乳酸桿菌之間存在直接聯系。其中的軟桿菌可以抑制A酸的生長，在此基礎上證明horA基因對啤酒花會產生抗體。如果科學利用電泳對其中的產物進行檢測和分析，就可以得到比較準確的結果。特別是PCR技術在啤酒中的應用，可不斷提高腐敗菌檢測的準確性，并且PCR技術這種檢測方式的時間在6個小時以上，可以在縮短檢測時間的基礎上，不斷增強啤酒腐敗菌的檢測效率，保證啤酒生產的安全性。

（四）綠膿桿菌的檢測

在部分食品微生物檢測中，一般會將綠膿桿菌外毒素A（ETA）基因作為其中的模板，在此基礎上更加快速地檢測出綠膿桿菌。相關研究發現，ETA基因一般僅存在綠膿桿菌基因組中，并且有的學者已經在其他的過量表達中，及時發現了ETA綠膿桿菌菌株。同時，在此過程中還能夠克隆和測定ETA的結構基因，可以將TA基因作為綠膿桿菌中的靶基因。

檢測人員在此基礎上，要通過對ETA基因序列設計特異性引物的分析，在PCR反應基礎上，適當擴增目的基因序列，不斷擴增出目的條帶，結合其中的數據，進而及時檢測出綠膿桿菌，為日后食品微生物檢測技術的有效應用提供條件。

（五）食品乳酸菌檢測

乳酸菌屬于一種能夠產生乳酸的菌群。目前，在大部分的食物中都存在乳酸菌，主要是因為這種物質對人體的健康是非常有益的。當乳酸菌進入人體后，不僅可以促進人類的腸道消化，還可以強化人體的抵抗力。再加上，大多數的乳酸菌對我們腸道功能具有非常積極的作用，能夠在幫助人們腸道消化的同時，更好地改善胃腸的功能，在此基礎上不斷降低血清以及人體中的膽固醇，進而強化人們身體的免疫力。大部分人在日常的飲食中，都非常重視乳酸菌含量的控制。因此，在開展食品微生物檢測工作時，一定要加強對乳酸菌的測量和檢測，讓檢測的結果更加精準化。

調查發現，我國對乳酸菌的測量和研究時間是非常早的，并且大部分科研人員在具體的研究中，發現了乳酸菌DNA序列的特點性，其主要在1414-1432的位置。其中的21個堿基排列具有比較強的代表性。在雙岐菌中，具有32種乳酸，是比較有代表性的堿基排列。要想獲取此序列，一定要積極借助SDS手段，對乳酸菌進行科學的細胞分解，通過對乳酸菌核算方式的有效應用，對基因片段進行更加準確的檢測，將其及時提取出來，加強對相應引物的研究和分析。

結束語

總而言之，如果微生物一直存在于食物中，就會對人們的身體健康和生命安全帶來影響。這就需要加強對檢測技術的科學應用，不斷提高食品微生物檢測的準確性。尤其是PCR技術在檢測食品中的有效應用，可以及時發現致病菌，不斷降低食源性風險發生。同時，實現對食品中菌群的分析，不僅可以及時發現食品發酵和食品工藝改進方面的問題，還可以對食品中轉基因成分進行準確檢測，從而保障我國食品應用的安全性。