雌激素受體亞型及激活蛋白-1在子宮內膜息肉中的表達及意義

董璐 郝曉瑩 王晨

子宮內膜息肉(endometrial polyp,EP)是子宮局部內膜過度生長所致，數量可單個或多個，直徑從數毫米到數厘米，由子宮內膜腺體、間質及血管組成的宮腔、宮底部有蒂或無蒂的贅生物。子宮內膜息肉是導致異常子宮出血常見的子宮內膜病變之一，探討子宮內膜息肉發生發展的作用機制從而控制其發生并預防其復發有重要的現實意義。本文通過對子宮內膜息肉中雌激素受體α (ertrogen receptor-α，ERα)、β(ertrogen receptor-β，ERβ)及激活蛋白-1(activator protein-1，AP-1)組成成分C-jun的表達進行檢測，并與正常子宮內膜組織中的表達進行對比，分析子宮內膜息肉與ERα、ERβ及C-jun的相關性，為進一步探討該病的病因機制提供理論依據。

對象與方法

1. 研究對象：選取2018年6月—2018年11月本院收治的子宮內膜息肉患者，所有患者均經宮腔鏡檢查，按照病理標準診斷[1]為子宮內膜息肉20例作為實驗組；同期選擇因異常子宮出血行分段診刮患者，病理診斷為增殖期子宮內膜[1]20例作為對照組。入組患者其他標準：(1)無高血壓、糖尿病等內科合并癥；(2)月經周期正常，無婦科生殖器官疾病如子宮肌瘤、子宮腺肌病、子宮內膜癌、多囊卵巢綜合征等；(3)術前3個月內均無激素用藥史。實驗組年齡29～48歲，平均(40.4±5.6)歲，對照組年齡27～50歲，平均(40.4±6.3)歲，兩組年齡、孕產次比較差異無統計學意義(P>0.05)。在取標本時均告知患者，經患者同意并簽署知情同意書，該實驗獲得本院醫院倫理委員會審核。

2.方法：全部患者標本均于月經干凈5～14 d行宮腔鏡檢查獲取，檢測并比較兩組標本中ERα、ERβ及AP-1組成成分C-jun的含量。

3.標本測定：采用免疫印跡法進行標本測定，步驟如下：標本取出后，按每20 mg組織加入250 uL裂解液于勻漿器上充分裂解后取上清，進行蛋白質定量后儲存于-80 ℃冰箱備用，用BCA法進行蛋白定量，采用12%分離膠和5%濃縮膠，樣品在濃縮膠中電泳電壓80 V，待樣品進入分離膠后增加電泳電壓至120 V，當染料到達膠底部時終止電泳，90 V轉膜10 min，5%脫脂奶粉封閉液封閉，4℃過夜。加入1∶1000比例稀釋的一抗，4 ℃過夜，按照1∶10 000稀釋HRP標記的二抗，室溫孵育1h，ECL化學發光顯色儀檢測，TANON GIS軟件讀取相關條帶灰度值。實驗中所需的兔抗人多克隆抗體ERα、ERβ、C-jun，RIPA(強)組織細胞快速裂解液，PBS 磷酸鹽緩沖液，BCA 蛋白濃度測定試劑盒(增強型)均購自武漢Bioswamp生物公司，Tween-20購自Amresco生物公司，PVDF 轉移膜、化學發光試劑購millipore公司，TEMED，過硫酸銨購自Sigma公司。

4.統計學分析：采用 SPSS 20.0 統計軟件進行數據分析，組間比較采用t檢驗，相關性分析采用pearson相關，以P<0.05為差異有統計學意義。

結果

1.ERα、C-jun和ERα/ERβ 在兩組的表達:ERα、C-jun和ERα/ERβ 在子宮內膜息肉組中相對表達量(分別為0.58±0.06、0.81±0.05、1.36±0.26)高于增殖期子宮內膜組(分別為0.38±0.01、0.50±0.05、0.59±0.02)，差異均有統計學意義(P<0.05)； ERβ在子宮內膜息肉組的相對表達量(0.42±0.05)低于增殖期子宮內膜組(0.64±0.01)，差異有統計學意義(P<0.05)，見圖1和圖2。

圖1 兩組組織中ERα、ERβ、C-jun蛋白表達

圖2 A兩組ERα相對表達量比較； B兩組ERβ相對表達量比較；C兩組C-jun相對表達量比較；D兩組ERα/ERβ相對表達量比值比較

2.C-jun與ERα/ERβ相關性分析：子宮內膜息肉組C-jun與ERα/ERβ呈正相關(r=0.524，P=0.018)，增殖期子宮內膜組C-jun與ERα/ERβ相關性無統計學意義(r=0.114,P=0.633)，見圖3。

圖3 A 子宮內膜息肉組中C-jun與ERα/ERβ相對表達量相關性分析；B增殖期子宮內膜組中C-jun與ERα/ERβ相對表達量相關性分析

討論

子宮內膜息肉是婦科常見疾病之一，根據不同研究群體的研究報道子宮內膜息肉患病率為7.8%～34.9%[2]。子宮內膜息肉可以導致患者出現月經量大、經期延長、經間期出血，也有部分患者僅表現為白帶增多、不孕等癥狀[3]。隨著宮腔鏡技術的應用和水平的提高，EP的檢出率和治療率顯著提高，但其病因和發病機制尚未完全明確。目前大多數研究認為主要與局部雌激素的過度刺激有關，但雌激素水平在人體內應該是相對平衡的，因此單純的用局部雌激素的過度刺激很難解釋其發生機制，而局部雌激素受體的高表達似乎更合理[4]。雖然EP大多數被認為是良性病變，但其惡變的問題不容忽視[5]，主要與年齡、息肉的大小、抗凋亡基因B細胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphocytic leukemias Bcl-2)表達，服用他莫西芬、肥胖、激素替代治療等有關[6]。

為了更深入闡明子宮內膜息肉的發病機制，本研究通過免疫印跡法分析了子宮內膜息肉與增殖期子宮內膜中ERα、ERβ及AP-1組成成分C-jun的表達。雌激素受體α(ERα)和β(ERβ)兩種亞型介導著雌激素的生理作用。有研究顯示在細胞的生長和增殖中ERα和ERβ發揮著相反的作用，ERα作用為促進細胞的增殖和抑制其凋亡，而ERβ表現出了抑制細胞增殖并促進細胞凋亡的作用[7]。有學者研究發現，ERβ在子宮內膜息肉中含量與其雌二醇濃度和外周血中雌二醇濃度呈正相關，認為高濃度的雌二醇可能是通過ERβ途徑發揮其生理效應，從而導致EP的產生[8]。而沈恒石研究則發現ERβ的表達在子宮內膜息肉與正常子宮內膜中的差異無統計學意義，子宮內膜息肉中ERα的表達升高，可能是其產生的主要原因[9]，本研究結果顯示實驗組中ERα的表達升高，與沈恒石等的研究結果相一致。

雌激素可以通過快速激活細胞膜表面絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases MAPK)等信號通路對其他轉錄因子如AP-1進行調控和激活。AP-1是由堿性亮氨酸拉鏈形成高度的保守的同源或異源二聚體,可激活下游靶基因的轉錄，在眾多的AP-1二聚體中FOS亞型與JUN亞型形成的異源二聚體穩定性最強[10-11]，參與到細胞的增殖、炎癥、凋亡、分化、生存、遷移和轉化等過程[12]。并且在對AP-1的激活作用中，ER的亞型、配體的結構以及細胞的類型都對其產生不同的影響。目前國內外對于AP-1在EP中研究報告甚少，AP-1作為一種重要的核轉錄因子參與了細胞的增殖、惡性腫瘤的轉移、新生血管的形成等過程。在EP的發生中，新生血管的作用不可忽視，而血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前發現的重要的促血管生成因子之一，雌激素受體可以促進其表達，而AP-1也可以通過調節內皮細胞的增殖和遷移介導VEGF誘導的血管生成[13]。另有在纖維肉瘤細胞培養模型中的研究[14]也發現，當上調C-jun和JunB時，可以激活增殖蛋白，從而增加血管的生成。本研究結果顯示在EP中ERα、C-jun的表達升高，且C-jun與ERα/ERβ比值呈正相關，提示雌激素可能通過上調ERα和AP-1參與EP中細胞增殖、血管生成等過程，與Zhao[15]等人的研究結果相一致。

綜上所述，在子宮內膜息肉中ERα和ERβ表達有明顯的差異，ERα可能對其發揮著更重要的作用。同時，在EP中，C-jun的表達升高，提示AP-1的激活參與了EP的發生。但本試驗中選取的病例數量較少，有待增加臨床病例進一步驗證子宮內膜息肉的發病機制，并為治療、預防復發和控制癌變提供新的方向和依據。