魚類及暫養(yǎng)水中丁香酚等3種獸藥殘留量的檢測與分析

◎ 方榮謙，林偉琦

（廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，福建 廈門 361000）

廈門是我國著名的沿海旅游城市，海鮮等水產(chǎn)品特別有名。鮮活的水產(chǎn)品在運輸中往往需要用到麻醉劑，受運輸條件及成本影響，鮮活的水產(chǎn)品往往集中在有限的空間內(nèi)，密度大，容易缺氧；且由于過度聚集，魚類等水產(chǎn)品容易受到驚嚇，加之運輸途中顛簸的影響，常常引起魚類等水產(chǎn)品劇烈掙扎，容易造成脫鱗等體表傷害，最終導(dǎo)致魚患病而亡[1]。麻醉藥品能夠不同程度抑制魚類等水產(chǎn)品的中樞神經(jīng)，從而減緩新陳代謝，降低其應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而使其活動減緩，減少因群體躁動引起的體表損傷，減少運輸死亡率，保證水產(chǎn)品在長途運輸中的鮮活度，有效降低了運輸成本[2]。近年來，隨著餐飲業(yè)的迅速發(fā)展，麻醉藥品在魚產(chǎn)品中的應(yīng)用水平有所提升，人們對水產(chǎn)品中麻醉藥品的殘留量及安全性也越來越重視[3]。在運輸過程中，商家對麻醉劑的使用往往局限于他人的經(jīng)驗或者自己摸索，對使用劑量缺少一定的把控標(biāo)準(zhǔn)，容易造成麻醉劑的濫用。因此，對魚及暫養(yǎng)水進(jìn)行麻醉劑含量的檢測很有必要。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

6500 液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國AB SCIEX 公司）；GC 6890N-5975MSD 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫公司）；氮氣吹干儀（北京Lab Tech 公司）；高通量固相萃取裝置[睿科儀器（廈門）有限公司]；Vortex 漩渦混勻器（德國 IKA 公司）；ME204 電子天平（梅特勒托利多儀器上海有限公司）；Milli Q 超純水器（美國Millipore 公司）。

購買有證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，均可溯源；水為Minipore超純水機制備的一級水；有機溶劑甲醇、正己烷和乙腈等（色譜純），購自默克股份兩合公司；無水硫酸鈉，國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.2 樣品來源

魚與暫養(yǎng)水樣本源于市面，在對魚進(jìn)行抽樣的同時也對相應(yīng)的暫養(yǎng)水進(jìn)行抽樣。樣本涉及福建省廈門市6 個市轄區(qū)餐飲環(huán)節(jié)和流通領(lǐng)域，共抽樣100 批次，在餐飲環(huán)節(jié)抽檢42 批次，其中大型餐館4 批次，中型餐館22 批次，小型餐館16 批次；在流通環(huán)節(jié)抽檢58 批次，其中，超市44 批次，農(nóng)貿(mào)市場8 批次，批發(fā)市場2 批次，小食雜店4 批次。基本覆蓋了市民能夠購買和消費鮮活魚類的經(jīng)營場所。涉及淡水魚及其暫養(yǎng)水樣本共50 批次（各25 批次），海水魚及其暫養(yǎng)水樣本共50 批次（各25 批次），基本覆蓋了市面上常見魚的品種，使樣本具備典型性。

1.3 實驗方法

1.3.1 魚類中麻醉劑的檢測方法及判定標(biāo)準(zhǔn)

丁香酚：采用《水產(chǎn)品及水中丁香酚類化合物的測定》（BJS 201908）中檢測方法。取2 g 樣品于離心管中，加入5 g 無水硫酸鈉，適當(dāng)攪拌混勻，加入一顆陶瓷均質(zhì)子和10 mL 乙腈，渦旋混勻1 min，超聲提取15 min，離心，上清液轉(zhuǎn)至另一50 mL 離心管中；殘渣中再加入10 mL 乙腈重復(fù)提取一次，合并所有上清液；再加入5 mL 乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩1 min，離心，棄去正己烷層；乙腈層加入50 μL 的DMSO，40 ℃氮吹至近干，用1 mL 乙腈溶解殘余物，混勻，過濾膜后待測。

三卡因和苯唑卡因：稱取1 ～5 g 的樣品于50 mL聚乙烯離心管中，加入20 mL 甲醇，中速均質(zhì)2 min，超聲10 min，離心后取澄清液氮吹并用1 mL 甲醇水溶液溶解殘余物，過濾膜后待測。

1.3.2 暫養(yǎng)水中3 種麻醉劑的檢測方法

將水樣用快速濾紙過濾，準(zhǔn)確量取50 mL 的水樣，調(diào)節(jié)pH 至3 左右，過HLB 固相萃取柱（該柱先用6 mL甲醇和6 mL 水進(jìn)行預(yù)活化平衡），隨后用10 mL 水進(jìn)行淋洗，去雜，用泵抽干淋洗液，再用6 mL 甲醇進(jìn)行洗脫，控制流速在4 mL·min-1左右，洗脫液轉(zhuǎn)移到氮氣吹干儀中，于40 ℃下吹近干，用1 mL 乙腈溶解殘余物，過濾膜，待上機檢測。

1.3.3 主要儀器參數(shù)

（1）色譜條件。色譜柱選擇ShimNex UP C18高純硅膠色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）。柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；流速：0.2 ～0.3 mL·min-1。流動相：甲酸水溶液（0.1%，V/V）（A）和甲酸乙腈溶液（0.1%，V/V）（B）。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

（2）質(zhì)譜條件及參數(shù)。采用AB6500 液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，檢測模式：多反應(yīng)選擇監(jiān)測模式。離子源溫度，600 ℃；門簾氣壓（CUR），35 psi；Gas1，55 psi；Gas2，50 psi；離子噴射電壓（IS），5 500 V；碰撞氣壓：medium。3 種麻醉劑的母離子、子離子及去簇電壓（Declustering Potential，DP）、碰撞能（Collision Energy，CE）見表2。

表2 目標(biāo)麻醉劑藥物的串聯(lián)質(zhì)譜檢測參數(shù)表

1.3.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

丁香酚在國內(nèi)是一種食品添加劑，作為香精香料可在食品中使用，但不得在水產(chǎn)品中使用[4]。三卡因，又名魚安定或MS222，國內(nèi)目前尚無法律或法規(guī)對水產(chǎn)品中的麻醉劑進(jìn)行種類和劑量的規(guī)定，嚴(yán)格來說不允許在水產(chǎn)品中使用。即對丁香酚、三卡因和苯唑卡因的參考值應(yīng)均列為“不得檢出”。

2 結(jié)果與分析

100 批次樣本中，有14 批次魚樣品檢出丁香酚，1 批次暫養(yǎng)水（淡水魚暫養(yǎng)水）檢出三卡因，苯唑卡因未檢出，丁香酚和三卡因的檢出情況見表3。

表3 魚及暫養(yǎng)水樣本中麻醉劑的檢出情況表

從表3 看出，有14 批次魚樣品檢測到丁香酚，占比為28%，可見丁香酚作為麻醉劑在魚產(chǎn)品中使用相當(dāng)廣泛。在14 批次檢出丁香酚的魚樣品中，檢測出淡水魚6 批次，海水魚8 批次，說明兩種魚使用麻醉劑丁香酚的數(shù)量并無顯著差異，可以推測海水魚和淡水魚在運輸過程中均不同程度地使用丁香酚作麻醉劑。在50 批次魚樣本中檢測出14 批次丁香酚，而在相應(yīng)的50 批次暫養(yǎng)水并未檢出丁香酚。可以推斷魚體中的丁香酚極可能來源于運輸過程中的水體；暫養(yǎng)水中未檢出丁香酚，說明在超市、農(nóng)貿(mào)市場等流通領(lǐng)域和餐飲店等餐飲領(lǐng)域，由于魚即將被消費者買走或即將被宰殺做菜，因此無再添加麻醉劑的必要。

14 批次丁香酚的檢出含量在0.03 ～7.00 mg·kg-1，由于丁香酚具有抗菌、抗氧化、防腐功能，應(yīng)用廣泛[5]，不僅可作為香料成分應(yīng)用于口腔護(hù)理領(lǐng)域，還是我國規(guī)定允許使用的食用香料，可按正常生產(chǎn)需要適量使用，如丁香酚在熟肉制品中使用量為40 ～2 000 mg·kg-1，調(diào)味品中9.6 ～100.0 mg·kg-1等。本次魚體內(nèi)檢出丁香酚含量≤7.0 mg·kg-1，對人體健康影響不大。

本次專項在50 批次暫養(yǎng)水中檢測1 批次三卡因，而魚體中并未檢測出三卡因。如上所述，在暫養(yǎng)水中并無添加麻醉劑的必要，暫養(yǎng)水中的三卡因極可能是隨著魚一起殘留的運輸水體帶入；魚體中未檢出三卡因，主要原因是三卡因一般是在魚的器官中累積，殘留在魚肉中的很少，因此未檢出。

本次專項在采樣批次魚及暫養(yǎng)水中均未檢測到苯唑卡因。原因可能為使用苯唑卡因麻醉的魚容易沉底而造成缺氧死亡，所以苯唑卡因作為魚類麻醉劑應(yīng)用較少。

3 結(jié)論

此次實驗首次對魚及暫養(yǎng)水中的丁香酚、三卡因和苯唑卡因3 種麻醉劑含量進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)多批次的魚體內(nèi)檢測出含量不等的丁香酚，1 批次暫養(yǎng)水檢測三卡因。可見麻醉劑在水產(chǎn)品運輸過程中的應(yīng)用是廣泛存在的。研究發(fā)現(xiàn)，魚及暫養(yǎng)水中麻醉劑的檢出量并不高，大部分含量均低于丁香酚在食品中的使用含量，幾乎對人體的健康不會造成影響。此次抽檢的數(shù)據(jù)量較為有限，今后的抽檢中則需要制定進(jìn)一步的抽檢方案，對魚蝦、蟹、貝類等其他水產(chǎn)品進(jìn)行抽檢，獲取更多數(shù)據(jù)，更全面地了解風(fēng)險點的來源，提出麻醉劑對人體健康影響程度及消除麻醉劑對人體影響的解決辦法。