魚(yú)類及暫養(yǎng)水中丁香酚等3種獸藥殘留量的檢測(cè)與分析

◎ 方榮謙，林偉琦

（廈門(mén)市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，福建 廈門(mén) 361000）

廈門(mén)是我國(guó)著名的沿海旅游城市，海鮮等水產(chǎn)品特別有名。鮮活的水產(chǎn)品在運(yùn)輸中往往需要用到麻醉劑，受運(yùn)輸條件及成本影響，鮮活的水產(chǎn)品往往集中在有限的空間內(nèi)，密度大，容易缺氧；且由于過(guò)度聚集，魚(yú)類等水產(chǎn)品容易受到驚嚇，加之運(yùn)輸途中顛簸的影響，常常引起魚(yú)類等水產(chǎn)品劇烈掙扎，容易造成脫鱗等體表傷害，最終導(dǎo)致魚(yú)患病而亡[1]。麻醉藥品能夠不同程度抑制魚(yú)類等水產(chǎn)品的中樞神經(jīng)，從而減緩新陳代謝，降低其應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而使其活動(dòng)減緩，減少因群體躁動(dòng)引起的體表?yè)p傷，減少運(yùn)輸死亡率，保證水產(chǎn)品在長(zhǎng)途運(yùn)輸中的鮮活度，有效降低了運(yùn)輸成本[2]。近年來(lái)，隨著餐飲業(yè)的迅速發(fā)展，麻醉藥品在魚(yú)產(chǎn)品中的應(yīng)用水平有所提升，人們對(duì)水產(chǎn)品中麻醉藥品的殘留量及安全性也越來(lái)越重視[3]。在運(yùn)輸過(guò)程中，商家對(duì)麻醉劑的使用往往局限于他人的經(jīng)驗(yàn)或者自己摸索，對(duì)使用劑量缺少一定的把控標(biāo)準(zhǔn)，容易造成麻醉劑的濫用。因此，對(duì)魚(yú)及暫養(yǎng)水進(jìn)行麻醉劑含量的檢測(cè)很有必要。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

6500 液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)AB SCIEX 公司）；GC 6890N-5975MSD 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫公司）；氮?dú)獯蹈蓛x（北京Lab Tech 公司）；高通量固相萃取裝置[睿科儀器（廈門(mén)）有限公司]；Vortex 漩渦混勻器（德國(guó) IKA 公司）；ME204 電子天平（梅特勒托利多儀器上海有限公司）；Milli Q 超純水器（美國(guó)Millipore 公司）。

購(gòu)買(mǎi)有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，均可溯源；水為Minipore超純水機(jī)制備的一級(jí)水；有機(jī)溶劑甲醇、正己烷和乙腈等（色譜純），購(gòu)自默克股份兩合公司；無(wú)水硫酸鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 樣品來(lái)源

魚(yú)與暫養(yǎng)水樣本源于市面，在對(duì)魚(yú)進(jìn)行抽樣的同時(shí)也對(duì)相應(yīng)的暫養(yǎng)水進(jìn)行抽樣。樣本涉及福建省廈門(mén)市6 個(gè)市轄區(qū)餐飲環(huán)節(jié)和流通領(lǐng)域，共抽樣100 批次，在餐飲環(huán)節(jié)抽檢42 批次，其中大型餐館4 批次，中型餐館22 批次，小型餐館16 批次；在流通環(huán)節(jié)抽檢58 批次，其中，超市44 批次，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)8 批次，批發(fā)市場(chǎng)2 批次，小食雜店4 批次。基本覆蓋了市民能夠購(gòu)買(mǎi)和消費(fèi)鮮活魚(yú)類的經(jīng)營(yíng)場(chǎng)所。涉及淡水魚(yú)及其暫養(yǎng)水樣本共50 批次（各25 批次），海水魚(yú)及其暫養(yǎng)水樣本共50 批次（各25 批次），基本覆蓋了市面上常見(jiàn)魚(yú)的品種，使樣本具備典型性。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 魚(yú)類中麻醉劑的檢測(cè)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)

丁香酚：采用《水產(chǎn)品及水中丁香酚類化合物的測(cè)定》（BJS 201908）中檢測(cè)方法。取2 g 樣品于離心管中，加入5 g 無(wú)水硫酸鈉，適當(dāng)攪拌混勻，加入一顆陶瓷均質(zhì)子和10 mL 乙腈，渦旋混勻1 min，超聲提取15 min，離心，上清液轉(zhuǎn)至另一50 mL 離心管中；殘?jiān)性偌尤?0 mL 乙腈重復(fù)提取一次，合并所有上清液；再加入5 mL 乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩1 min，離心，棄去正己烷層；乙腈層加入50 μL 的DMSO，40 ℃氮吹至近干，用1 mL 乙腈溶解殘余物，混勻，過(guò)濾膜后待測(cè)。

三卡因和苯唑卡因：稱取1 ～5 g 的樣品于50 mL聚乙烯離心管中，加入20 mL 甲醇，中速均質(zhì)2 min，超聲10 min，離心后取澄清液氮吹并用1 mL 甲醇水溶液溶解殘余物，過(guò)濾膜后待測(cè)。

1.3.2 暫養(yǎng)水中3 種麻醉劑的檢測(cè)方法

將水樣用快速濾紙過(guò)濾，準(zhǔn)確量取50 mL 的水樣，調(diào)節(jié)pH 至3 左右，過(guò)HLB 固相萃取柱（該柱先用6 mL甲醇和6 mL 水進(jìn)行預(yù)活化平衡），隨后用10 mL 水進(jìn)行淋洗，去雜，用泵抽干淋洗液，再用6 mL 甲醇進(jìn)行洗脫，控制流速在4 mL·min-1左右，洗脫液轉(zhuǎn)移到氮?dú)獯蹈蓛x中，于40 ℃下吹近干，用1 mL 乙腈溶解殘余物，過(guò)濾膜，待上機(jī)檢測(cè)。

1.3.3 主要儀器參數(shù)

（1）色譜條件。色譜柱選擇ShimNex UP C18高純硅膠色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）。柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；流速：0.2 ～0.3 mL·min-1。流動(dòng)相：甲酸水溶液（0.1%，V/V）（A）和甲酸乙腈溶液（0.1%，V/V）（B）。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序表

（2）質(zhì)譜條件及參數(shù)。采用AB6500 液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，檢測(cè)模式：多反應(yīng)選擇監(jiān)測(cè)模式。離子源溫度，600 ℃；門(mén)簾氣壓（CUR），35 psi；Gas1，55 psi；Gas2，50 psi；離子噴射電壓（IS），5 500 V；碰撞氣壓：medium。3 種麻醉劑的母離子、子離子及去簇電壓（Declustering Potential，DP）、碰撞能（Collision Energy，CE）見(jiàn)表2。

表2 目標(biāo)麻醉劑藥物的串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)表

1.3.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

丁香酚在國(guó)內(nèi)是一種食品添加劑，作為香精香料可在食品中使用，但不得在水產(chǎn)品中使用[4]。三卡因，又名魚(yú)安定或MS222，國(guó)內(nèi)目前尚無(wú)法律或法規(guī)對(duì)水產(chǎn)品中的麻醉劑進(jìn)行種類和劑量的規(guī)定，嚴(yán)格來(lái)說(shuō)不允許在水產(chǎn)品中使用。即對(duì)丁香酚、三卡因和苯唑卡因的參考值應(yīng)均列為“不得檢出”。

2 結(jié)果與分析

100 批次樣本中，有14 批次魚(yú)樣品檢出丁香酚，1 批次暫養(yǎng)水（淡水魚(yú)暫養(yǎng)水）檢出三卡因，苯唑卡因未檢出，丁香酚和三卡因的檢出情況見(jiàn)表3。

表3 魚(yú)及暫養(yǎng)水樣本中麻醉劑的檢出情況表

從表3 看出，有14 批次魚(yú)樣品檢測(cè)到丁香酚，占比為28%，可見(jiàn)丁香酚作為麻醉劑在魚(yú)產(chǎn)品中使用相當(dāng)廣泛。在14 批次檢出丁香酚的魚(yú)樣品中，檢測(cè)出淡水魚(yú)6 批次，海水魚(yú)8 批次，說(shuō)明兩種魚(yú)使用麻醉劑丁香酚的數(shù)量并無(wú)顯著差異，可以推測(cè)海水魚(yú)和淡水魚(yú)在運(yùn)輸過(guò)程中均不同程度地使用丁香酚作麻醉劑。在50 批次魚(yú)樣本中檢測(cè)出14 批次丁香酚，而在相應(yīng)的50 批次暫養(yǎng)水并未檢出丁香酚。可以推斷魚(yú)體中的丁香酚極可能來(lái)源于運(yùn)輸過(guò)程中的水體；暫養(yǎng)水中未檢出丁香酚，說(shuō)明在超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等流通領(lǐng)域和餐飲店等餐飲領(lǐng)域，由于魚(yú)即將被消費(fèi)者買(mǎi)走或即將被宰殺做菜，因此無(wú)再添加麻醉劑的必要。

14 批次丁香酚的檢出含量在0.03 ～7.00 mg·kg-1，由于丁香酚具有抗菌、抗氧化、防腐功能，應(yīng)用廣泛[5]，不僅可作為香料成分應(yīng)用于口腔護(hù)理領(lǐng)域，還是我國(guó)規(guī)定允許使用的食用香料，可按正常生產(chǎn)需要適量使用，如丁香酚在熟肉制品中使用量為40 ～2 000 mg·kg-1，調(diào)味品中9.6 ～100.0 mg·kg-1等。本次魚(yú)體內(nèi)檢出丁香酚含量≤7.0 mg·kg-1，對(duì)人體健康影響不大。

本次專項(xiàng)在50 批次暫養(yǎng)水中檢測(cè)1 批次三卡因，而魚(yú)體中并未檢測(cè)出三卡因。如上所述，在暫養(yǎng)水中并無(wú)添加麻醉劑的必要，暫養(yǎng)水中的三卡因極可能是隨著魚(yú)一起殘留的運(yùn)輸水體帶入；魚(yú)體中未檢出三卡因，主要原因是三卡因一般是在魚(yú)的器官中累積，殘留在魚(yú)肉中的很少，因此未檢出。

本次專項(xiàng)在采樣批次魚(yú)及暫養(yǎng)水中均未檢測(cè)到苯唑卡因。原因可能為使用苯唑卡因麻醉的魚(yú)容易沉底而造成缺氧死亡，所以苯唑卡因作為魚(yú)類麻醉劑應(yīng)用較少。

3 結(jié)論

此次實(shí)驗(yàn)首次對(duì)魚(yú)及暫養(yǎng)水中的丁香酚、三卡因和苯唑卡因3 種麻醉劑含量進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)多批次的魚(yú)體內(nèi)檢測(cè)出含量不等的丁香酚，1 批次暫養(yǎng)水檢測(cè)三卡因。可見(jiàn)麻醉劑在水產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中的應(yīng)用是廣泛存在的。研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)及暫養(yǎng)水中麻醉劑的檢出量并不高，大部分含量均低于丁香酚在食品中的使用含量，幾乎對(duì)人體的健康不會(huì)造成影響。此次抽檢的數(shù)據(jù)量較為有限，今后的抽檢中則需要制定進(jìn)一步的抽檢方案，對(duì)魚(yú)蝦、蟹、貝類等其他水產(chǎn)品進(jìn)行抽檢，獲取更多數(shù)據(jù)，更全面地了解風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)的來(lái)源，提出麻醉劑對(duì)人體健康影響程度及消除麻醉劑對(duì)人體影響的解決辦法。