氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定新會(huì)陳皮中甲氨基苯甲酸甲酯含量

◎ 高綺倩

（廣東省江門(mén)市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東 江門(mén) 529000）

陳皮為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮。藥材分為陳皮和廣陳皮，其中廣陳皮中又以新會(huì)陳皮獨(dú)居道地藥材特色，是廣陳皮的上品[1-2]。研究表明，陳皮所含的化學(xué)成分較多，其中以黃酮類(lèi)成分為主，此外還含有檸檬苦素類(lèi)、生物堿類(lèi)及揮發(fā)油類(lèi)等。廣陳皮和新會(huì)陳皮在化學(xué)成分如黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)的種類(lèi)和含量略有差異[3]。在揮發(fā)油中，新會(huì)陳皮含有含量較高的2-甲氨基苯甲酸甲酯成分，與其他產(chǎn)地的陳皮區(qū)分顯著[4-5]。但陳皮揮發(fā)油的提取耗時(shí)較長(zhǎng)，且其中的2-甲氨基苯甲酸甲酯的含量并不能直觀體現(xiàn)新會(huì)陳皮中的含量。因此，建立直接測(cè)定新會(huì)陳皮中2-甲氨基苯甲酸甲酯含量的方法，具有較大的實(shí)際意義。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：GCMS-QP2010，島津；2-甲氨基苯甲酸甲酯：5 g，95.0%，CAS 號(hào)為85-91-6，上海安譜；無(wú)水乙醇：色譜純，德國(guó)CNW。

1.2 儀器條件

1.2.1 色譜條件

SH-I-5Sil MS 石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；升溫程序：初始柱溫130 ℃，保持4 min；以20 ℃·min-1升溫至280 ℃，保持5 min；載氣：氦氣（純度99.99%）。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式：電子轟擊電離源（EI）；電離能量0.3 kV；接口溫度：250 ℃；離子源溫度：230 ℃；選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM）；保留時(shí)間：6.33 min；定性離子（m/z）：165、105、104、132；定量離子（m/z）：165；溶劑延遲：2.5 min。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.052 6 g 2-甲氨基苯甲酸甲酯，用無(wú)水乙醇溶解并定容于50 mL 容量瓶中，配制成1 000 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4 ℃冰箱中避光保存。使用前根據(jù)需要稀釋成所需濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 試樣的制備與處理

1.4.1 試樣的制備

取約100 g樣品，經(jīng)粉碎后過(guò)二號(hào)篩（孔徑0.85 mm，24 目），混勻后裝入密封袋待用。

1.4.2 試樣的處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取1.0 g 試樣于250 mL 具塞碘量瓶中，加入100 mL 無(wú)水乙醇，渦旋混勻1 min，超聲提取30 min，上清液用慢速濾紙過(guò)濾。吸取過(guò)濾后的試液2.00 mL于10 mL 容量瓶中，加入無(wú)水乙醇至刻度，搖勻后上機(jī)測(cè)定。

1.5 樣品的測(cè)定

將試樣溶液注入氣相色譜質(zhì)譜儀，得到2-甲氨基苯甲酸甲酯的定量離子（m/z）165 的峰面積，根據(jù)濃度繪制外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)合前處理稀釋倍數(shù)，得出樣品中2-甲氨基苯甲酸甲酯的含量。離子相同保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于0.5%，定性離子各離子豐度與標(biāo)準(zhǔn)品相差不大于20%，可定性確證目標(biāo)物。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

2-甲氨基苯甲酸甲酯幾乎不溶于水和甘油，溶于大多數(shù)揮發(fā)性油、乙醇等。本研究以實(shí)驗(yàn)室常用的甲醇、乙醇和正己烷作為樣品提取溶劑，結(jié)果表明，各提取溶劑的提取效果相近，均可滿(mǎn)足分析要求。根據(jù)實(shí)際條件和操作安全，本研究選擇乙醇作為樣品提取溶劑。

2.2 色譜條件的選擇

新會(huì)陳皮的化學(xué)成分以黃酮類(lèi)為主，還含有檸檬苦素類(lèi)、生物堿類(lèi)及揮發(fā)油類(lèi)等。2-甲氨基苯甲酸甲酯的沸點(diǎn)為252.4 ℃，性質(zhì)較穩(wěn)定，可選擇較高的進(jìn)樣口溫度，采取分流進(jìn)樣。新會(huì)陳皮成分復(fù)雜，需要通過(guò)程序升溫分離目標(biāo)物與雜質(zhì)。選用SH-I-5Sil MS石英毛細(xì)管色譜柱，優(yōu)化條件后得到較理想的分離效果，如圖1 所示。

圖1 新會(huì)陳皮樣品的選擇離子質(zhì)量色譜圖

2.3 質(zhì)譜選擇離子監(jiān)測(cè)

為了減少干擾，提高方法選擇性和靈敏度，采用選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM），如圖2 所示，2-甲氨基苯甲酸甲酯的質(zhì)譜圖中，強(qiáng)度較高的峰為m/z165、105、104、132，選取高質(zhì)量端的4 個(gè)離子進(jìn)行測(cè)定：m/z165（基峰，100%），m/z105（分子離子峰，相對(duì)豐度98.16%），m/z104（相對(duì)豐度82.54%），m/z132（相對(duì)豐度52.02%）。新會(huì)陳皮樣品的選擇離子質(zhì)量色譜圖見(jiàn)圖1。目標(biāo)物峰的峰形較好，附近干擾峰少，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度高。

圖2 2-甲氨基苯甲酸甲酯標(biāo)樣的質(zhì)譜圖

2.4 檢出限和檢測(cè)范圍

取1.3 項(xiàng)下配制的2-甲氨基苯甲酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度為0.05 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1、1.50 mg·L-1和2.00 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，進(jìn)行GC-MS/SIM 分析。以基峰離子m/z165 的峰面積（Y）和標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的濃度（X）作定量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性方程為y=17 772.3x，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 4，2-甲氨基苯甲酸甲酯在0.05 ～2.00 mg·L-1線(xiàn)性關(guān)系良好。結(jié)合樣品處理的稀釋倍數(shù)，以3 倍信噪比計(jì)算得方法檢出限為0.82 mg·kg-1，以10 倍信噪比計(jì)算得定量限為270 mg·kg-1。

2.5 精密度與回收率試驗(yàn)

取一款不含2-甲氨基苯甲酸甲酯的柑橘皮樣品，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按試驗(yàn)方法進(jìn)行回收率試驗(yàn)。每個(gè)水平濃度重復(fù)測(cè)定7 次，考察方法的精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，2-甲氨基苯甲酸甲酯的平均加標(biāo)回收率為92.8%～98.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.24%～0.46%。表明本法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度。

表1 2-甲氨基苯甲酸甲酯加標(biāo)回收率與精密度試驗(yàn)結(jié)果表（n=7）

2.6 實(shí)際樣品分析

根據(jù)本法確定的試驗(yàn)條件對(duì)市售的7 個(gè)新會(huì)陳皮樣品進(jìn)行測(cè)定，2-甲氨基苯甲酸甲酯的檢測(cè)結(jié)果 分 別 為536 mg·kg-1、287 mg·kg-1、446 mg·kg-1、651 mg·kg-1、840 mg·kg-1、597 mg·kg-1和383 mg·kg-1。對(duì)市售的云南蜜桔、巴西柑的果皮曬干后進(jìn)行測(cè)定，均未檢出2-甲氨基苯甲酸甲酯。

3 結(jié)論

本研究建立了快速測(cè)定新會(huì)陳皮中2-甲氨基苯甲酸甲酯的氣相色譜-質(zhì)譜分析方法。該方法穩(wěn)定可靠，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，適用于新會(huì)陳皮中2-甲氨基苯甲酸甲酯的定性定量分析，有利于新會(huì)陳皮的質(zhì)量指標(biāo)鑒別與評(píng)價(jià)，完善相關(guān)驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。