氣相色譜法測定消栓通絡(luò)片中龍腦和異龍腦的含量及質(zhì)量評價(jià)

李存金，鄧杰華，吳喆，周云峰

1.江西省藥品檢查員中心，江西 南昌 330029；2.宜春市檢驗(yàn)檢測中心，江西 宜春 336000

消栓通絡(luò)方出自北京同仁堂傳統(tǒng)秘方［1］，其中消栓通絡(luò)片收載于現(xiàn)行《中國藥典》，由川芎、丹參、黃芪、澤瀉、三七、槐花、桂枝、郁金、木香、冰片、山楂共11 味中藥制成，有活血化瘀，溫經(jīng)通絡(luò)之功效［2］。方中冰片為合成品，其主要成分為龍腦和異龍腦，有開竅醒神作用。現(xiàn)代研究表明，冰片可促進(jìn)藥物通過血腦屏障、黏膜、胃腸道、皮膚等部位，可發(fā)揮引領(lǐng)其他藥物直達(dá)病所作用［3-5］，作為佐使藥，正如《本草衍義》所述冰片：“獨(dú)行則勢弱，佐使則有功”［6］。

現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［2］對該中成藥中冰片的質(zhì)量控制為化學(xué)鑒別。因中成藥成分復(fù)雜［7］，采用化學(xué)反應(yīng)鑒別其中某種成分往往專屬性不強(qiáng)，在監(jiān)督抽驗(yàn)和研究中亦發(fā)現(xiàn)不同廠家或批次的制劑中冰片主要成分含量存在較大差異。為了準(zhǔn)確反映樣品中冰片的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)建立了消栓通絡(luò)片中冰片（以龍腦和異龍腦的總量計(jì)算）的含量測定方法，并以此為指標(biāo)對11 家企業(yè)生產(chǎn)的26 批次樣品進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。

1 儀器與材料

7890A 氣相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；MS205DU 電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；PL-S60 超聲波清洗儀（東莞康士潔超聲波科技有限公司）。龍腦對照品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號110881-201709，含量：99.6%），異龍腦對照品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號111512-201904，含量：98.4%）；乙酸乙酯（色譜純，天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司）。

消栓通絡(luò)片共26 批次涉及11 個生產(chǎn)企業(yè)（18批次來自市場監(jiān)督抽樣，8 批次通過網(wǎng)絡(luò)平臺自購），樣品信息見表1。

表1 消栓通絡(luò)片樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-WAX（30 m×0.45 mm×0.85 μm)；火焰離子化檢測器（FID）；進(jìn)樣口溫度200 ℃；檢測器溫度300 ℃，分流比為2∶1；柱溫：140 ℃，保持20 min；進(jìn)樣量為1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取龍腦對照品19.03 mg、異龍腦對照品20.96 mg 分別置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備取樣品20 片，除去包衣，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯適量溶解，冰浴超聲處理（功率250 W，頻率40 kHZ）30 min，放至室溫，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備精密稱取不含冰片的消栓通絡(luò)片陰性樣品約0.2 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取龍腦對照品儲備液、異龍腦對照品儲備液，加入乙酸乙酯配制系列濃度的對照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜方法進(jìn)行測定。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對照品溶液濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。龍腦、異龍腦的線性范圍、回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。

表2 龍腦、異龍腦線性關(guān)系

2.3.2 專屬性實(shí)驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下制備的陰性樣品溶液、供試品溶液、對照品溶液分別照“2.1”項(xiàng)下色譜方法進(jìn)行測定，采集色譜圖，如圖1 所示，供試品溶液出現(xiàn)與龍腦、異龍腦保留時間一致的色譜峰，且陰性樣品色譜圖在相應(yīng)位置處無相應(yīng)色譜峰，說明該方法專屬性較好。

圖1 GC色譜圖：A.混合對照品；B.供試品；C.陰性樣品

2.3.3 精密度試驗(yàn)精密吸取龍腦對照品溶液、異龍腦對照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄龍腦、異龍腦的峰面積，結(jié)果顯示，龍腦、異龍腦峰面積的RSD 值分別為0.5%、0.8%，表明方法精密度好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)取消栓通絡(luò)片樣品（編號25）粉末0.2 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄龍腦、異龍腦的峰面積，并計(jì)算其含量。結(jié)果龍腦、異龍腦含量RSD（n=6）值分別為1.6%、1.5%，表明該方法重復(fù)性好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份消栓通絡(luò)片樣品供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣測定，記錄龍腦、異龍腦的峰面積，計(jì)算峰面積RSD 為1.8%、1.9%，表明樣品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)精密稱取6 份消栓通絡(luò)片樣品（編號25）各0.1 g，加入龍腦、異龍腦對照品溶液適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果龍腦的回收率范圍為96.00%～100.27%，異龍腦回收率范圍為96.32%～101.22%，RSD 值均小于2.0%，表明該方法準(zhǔn)確度高。

2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

26 批次市售消栓通絡(luò)片均檢出與龍腦對照品、異龍腦對照品保留時間一致的色譜峰，計(jì)算樣品中龍腦、異龍腦的含量，結(jié)果見表3。26 批次樣品中冰片含量（以龍腦、異龍腦的總量計(jì)）在0.42～4.49 mg/片之間，不同企業(yè)冰片含量差異較大，如K 公司的消栓通絡(luò)片中冰片含量最高為4.49 mg/片，為B 公司（0.42 mg/片）的10 倍，且同一企業(yè)不同批次樣品中冰片的量呈總體較離散狀態(tài)。

表3 消栓通絡(luò)片中冰片含量測定結(jié)果 mg/片

3 討論

《中國藥典》2020 年版一部冰片（合成龍腦）標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項(xiàng)規(guī)定“本品含龍腦（C10H18O）不得少于55.0%”。計(jì)算本研究中26 批次樣品中龍腦含量與龍腦、異龍腦總量的比值在55.9%～64.3%之間。消栓通絡(luò)片現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用冰片升華物與香草醛濃硫酸發(fā)生顯色反應(yīng)來鑒別冰片［2］，專屬性不強(qiáng)，且不能反映方中冰片的質(zhì)量、投料量、主要成分含量及制劑成型的質(zhì)量控制等。本研究采用氣相色譜法測定了消栓通絡(luò)片中龍腦和異龍腦的含量，以二者總量來計(jì)算冰片的含量，能有效控制冰片的質(zhì)量、投料量及制劑成型過程。結(jié)果不同廠家26批次制劑中冰片含量差異較大。

供試品溶液制備參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［8-9］，考察了不同超聲時間的影響，最終選擇超聲30 min 作為最佳提取條件。

消栓通絡(luò)片制法為除冰片外的其余藥味制粒、干燥后，冰片以原粉直接加入，后續(xù)混勻、包衣工藝均未涉及連續(xù)高熱，理論轉(zhuǎn)移率應(yīng)接近90%，根據(jù)處方中冰片用量5.7 mg/片，以實(shí)際樣品中龍腦、異龍腦總量計(jì)算冰片的平均轉(zhuǎn)移率僅為42.2%，分析原因可能是冰片屬揮發(fā)性藥材，原材料質(zhì)量、生產(chǎn)工藝、包衣輔料、包裝材料、貯存條件等因素都會影響其含量［9］。以平均轉(zhuǎn)移率42.2%計(jì)算，擬定本品每片含冰片（以龍腦、異龍腦總量計(jì)）不得少于2.41 mg/片。不同企業(yè)、相同企業(yè)不同批次生產(chǎn)的消栓通絡(luò)片中冰片含量差異較大，26 批次樣品中低于擬定限度（2.41 mg/片）的有10 批次，合格率為61.5%，提示部分企業(yè)冰片原料質(zhì)量、投料量可能存在問題，或制劑在生產(chǎn)、儲存過程中冰片揮發(fā)而導(dǎo)致龍腦和異龍腦含量偏低。建議法定檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中增加消栓通絡(luò)片中冰片的含量測定項(xiàng)；生產(chǎn)企業(yè)按規(guī)定優(yōu)化工藝，如將冰片進(jìn)行包合后再入藥，以及改進(jìn)包衣輔料、包裝材料等，以保證其臨床用藥的有效性。