鹽酸氮卓斯汀滴眼液對實驗動物眼部的安全性評價試驗

周艷艷，文皓頲，楊倚天，徐麗瑛，鄭國安，張俊明

1.江西省醫療器械檢測中心，江西省藥物安全評價重點實驗室，江西 南昌 330029；2.江西中醫藥大學，江西 南昌330004

過敏性結膜炎（allergic conjunctivitis，AC）是眼科臨床上較常見的疾病，可見眼部過敏產生的一些刺激性癥狀，如眼癢并伴有流淚、畏光、刺痛、分泌物等，結膜水腫同時眼瞼腫脹，血管擴張或出血可導致眼結膜發紅［1-2］。過敏性結膜炎通常分為幾類亞型［3］：季節性結膜炎（SAC）、常年性結膜炎（PAC）、春季性角結膜炎（VKC）、巨乳頭性結膜炎（GPC）和特應性角結膜炎（AKC），臨床上以季節性和常年性較為常見。季節性角結膜炎患者經常伴隨著出現相關的鼻部癥狀，誘發鼻結膜炎，特應性嚴重時，最終會導致視力下降，對患者日常生活產生不良后果?，F代醫學臨床仍主要以眼局部用藥緩解癥狀為主［4］。目前市售的鹽酸氮卓斯汀滴眼液為原研進口藥品，用于治療過敏性結膜炎，效果良好。本試驗通過在規定時間內觀察各組實驗兔經眼分別給藥鹽酸氮卓斯汀滴眼液（企業自制）、賦形劑及原研藥品對實驗兔眼的刺激反應及反應程度，比較之間的區別，客觀評價委托方生產的鹽酸氮卓斯汀滴眼液可能存在的毒性反應［5-6］。

1 實驗材料

1.1 供試藥物

供試品：鹽酸氮卓斯汀滴眼液（企業自制），規格：8 mL∶4 mg，由江西珍視明藥業有限公司提供，批號：181102；賦形劑：不含鹽酸氮卓斯汀陰性溶液，規格：8 mL/支，由江西珍視明藥業有限公司提供，批號：190501；原研藥品：鹽酸氮卓斯汀滴眼液，規格：6 mL∶3 mg（0.05%），由Tubilux Pharma S.p.A 生產，批號：7M663A；空白對照：0.9%氯化鈉注射液，規格：250 mL∶2.25 g，生產單位：江西科倫藥業，批號：D19040605-2。

1.2 實驗動物

參照《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》［6］，本次實驗采用普通級新西蘭兔，自長沙市天勤生物技術有限公司購入，生產許可證號：SCXK（湘）2014-0010。雌雄各半，12～15 w，2.0～2.6 kg。購入動物飼養于江西省藥物研究所安全評價中心，實驗動物使用許可證號：SYXK（贛）2018-0008。

1.3 實驗儀器及試劑

1.3.1 儀器LYL-Ⅱ裂隙燈（鳳凰光學儀器集團）；JS15-01 電子天平（上海浦春計量儀器有限公司）。

1.3.2 試劑熒光素鈉（批號：C10530874，上海麥克林生化科技有限公司）。

2 實驗方法［5］與結果

2.1 給藥前眼檢查

給藥前1 d 用裂隙燈顯微鏡檢查實驗兔的雙眼，有存在眼及周圍組織刺激癥狀、角膜缺陷和臉結膜、球結膜損傷的動物不能用于試驗。

2.2 分組

將符合“2.1”要求的實驗兔12 只分為3 組，賦形劑組、供試品組和原研藥品組，每組各4 只，雌雄各半，按組別左眼分別給予賦形劑（不含鹽酸氮卓斯汀陰性溶液）、鹽酸氮卓斯汀滴眼液（企業自制）和原研的鹽酸氮卓斯汀滴眼液，各組右眼均給予0.9%氯化鈉注射液作為空白對照，具體見表1。

表1 鹽酸氮卓斯汀滴眼液實驗兔眼刺激性試驗分組設計

2.3 給藥方式

用左右同體對照法，將滴眼液棄去2～3 滴，拉開實驗兔左眼下眼瞼呈杯狀，各組實驗兔分別滴入相應賦形劑溶液、鹽酸氮卓斯汀滴眼液和原研藥品各1 滴，然后輕合眼瞼約10 s，實驗兔右眼均滴入0.9%氯化鈉注射液1 滴，輕合眼瞼約10 s。2 次/d，每次給藥間隔為6 h 左右，連續給藥28 d。

2.4 觀察項目

（1）給藥期間，每日給藥前用1%熒光素鈉及裂隙燈對兔眼部進行檢查，觀察角膜、結膜、虹膜和其他損傷，并按表2 進行評分。（2）停藥后，于末次給藥后1、2、4、24、48 和72 h 用1%熒光素鈉及裂隙燈對兔眼部進行檢查，觀察角膜、結膜、虹膜和其他損傷，并按《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》［6］標準（見表2）進行評分。如存在損傷，再延長21 d 的觀察期。（3）在給藥前1 d 和停藥后的觀察期（1、2、4、24、48 和72 h）對實驗兔給藥部位進行拍照。（4）按表2 的要求，將每只動物所有的評分分值相加得總分，將總分與動物數求均值，即得最后分值。按《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》［6］中的標準（見表3）判斷其刺激程度。

表2 眼刺激反應分值標準

表3 眼刺激性評價標準

2.5 結果

2.5.1 給藥前眼檢實驗兔在給藥前雙眼裂隙燈檢測，未發現眼及眼周組織的刺激癥狀、角膜缺陷及結膜損傷等異常情況，可用于試驗，如圖1 所示。

圖1 給藥前24 h眼檢結果

2.5.2 多次給藥試驗眼檢三組實驗兔左眼分別滴入鹽酸氮卓斯汀滴眼液、賦形劑和原研藥品，局部用藥及停藥后，用藥部位結膜、虹膜及角膜均未發現異常，眼瞼無水腫，未見異常分泌物，眼刺激反應平均積分均為0。實驗兔右眼滴入空白溶液作為自身對照，局部用藥部位結膜、虹膜及角膜均未發現異常，眼瞼無水腫，未見異常分泌物，眼刺激反應平均積分均為0，結果見圖2、表4。

圖2 末次給藥后72 h眼檢結果

表4 鹽酸氮卓斯汀滴眼液實驗兔眼刺激性試驗結果評價表（n=4）

3 討論

過敏性結膜炎是一種變態反應性的眼表疾病，近年來，隨著生活環境和氣候的變化，化妝品的廣泛應用，其發病率呈逐年增長的趨勢［7］。該病首要的治療就是快速緩解患者的眼癢、眼紅等不適癥狀。氮卓斯汀滴眼液可在10～20 min 內顯著緩解過敏性結膜炎導致的眼睛瘙癢、分泌物滲出、血管舒張，并在治療7 d 后抑制炎癥細胞浸潤和黏附分子-1的表達。抗組胺藥物也是治療變態性結膜炎的常用藥物，氮卓斯汀是對組胺H1 受體具有高親和力的酞菁酮衍生物，對H2 受體也具有一定的親和力［8］，通過拮抗呼吸道H1 受體，氮卓斯汀可阻斷大鼠肥大細胞、兔和人嗜堿性細胞對組胺的釋放，對白三烯和血小板聚集因子產生拮抗活性，從而抑制肥大細胞及其他細胞介導的過敏反應。另外還可抑制體內IgE 介導的炎癥反應［9-10］。鹽酸氮卓斯汀可明顯改善結膜炎，能有效改善炎癥因子指標水平，促進淚膜恢復。

刺激性是非口服途徑給藥制劑對局部產生的毒性，為臨床前安全性評價的組成部分。眼刺激性是觀察滴眼液是否引起眼及其周圍黏膜的紅腫、充血、變性等炎癥性改變。實驗兔眼睛對于藥物刺激性較為敏感，因此，通過兔眼結膜囊內給予受試物，對于滴眼液安全性評價，其是重要內容之一［11］。本實驗參照《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》［6］和Draize 試驗［5］，以新西蘭兔為研究對象，通過比較委托方提供的受試物與受試物所使用的輔料（賦形劑）對實驗兔眼的刺激性，以判斷受試物和賦形劑是否會產生刺激性和產生刺激性的原因；對委托方生產的鹽酸氮卓斯汀滴眼液與原研藥品對實驗兔的眼刺激進行試驗和評價，比較受試物與原研藥的刺激性反應癥狀是否一致，評估受試物臨床用藥的安全性。本研究給藥方式、給藥量及頻次與臨床擬用方案一致，采用結膜囊內給藥，每天2 次，1 滴/次。受試物在臨床上為長期應用藥物，根據指導原則［6］，選擇最長的給藥時間28 d。結果表明，受試物、賦形劑及原研藥品三者的刺激記分均為0，與自身對照無明顯的區別，按刺激判斷標準受試物對實驗兔眼無刺激性，提示同條件下三者對實驗兔眼均未發現與給藥有關的刺激性反應，停藥后也均未觀察到與藥物有關的刺激性反應，委托方生產的鹽酸氮卓斯汀滴眼液與原研藥品局部用藥安全性均較好，具有廣闊的臨床使用前景。