藥膳輔助飲食對UC模型大鼠Th1/Th2免疫平衡、疾病活動的影響

薛棋豐 金玉粉 崔銀花 金京麗 許梅花

(延邊大學(xué) 1醫(yī)學(xué)院，吉林 延吉 133002；2附屬醫(yī)院；3中醫(yī)學(xué)院)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)屬于臨床常見的消化系統(tǒng)疾病之一，近年來發(fā)病率呈現(xiàn)升高趨勢，主要是結(jié)腸黏膜和黏膜下層發(fā)生的慢性非特異性炎癥反應(yīng)，患者主要表現(xiàn)出腹瀉、黏液便或者血便為主要臨床體征，目前確切的發(fā)病機(jī)制尚未明確，考慮同遺傳、感染、環(huán)境及免疫等多種因素有關(guān)，對患者生活質(zhì)量和身心健康產(chǎn)生嚴(yán)重的影響〔1〕。UC病程容易反復(fù)，遷延難愈，西醫(yī)常規(guī)治療主要采取糖皮質(zhì)激素、免疫抑制藥物及氨基水楊酸藥物開展治療，但是藥物不良反應(yīng)較大，容易出現(xiàn)耐藥，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病發(fā)生主要是脾胃功能失衡，感受濕邪造成濕熱蘊(yùn)藉腸腑，氣機(jī)運(yùn)行不通造成腸道通降不利，中醫(yī)藥膳作為中醫(yī)學(xué)重要的治療方法在UC治療中具有較好的效果，可以調(diào)養(yǎng)慢性疾病〔2〕。本研究通過建立UC大鼠模型觀察藥膳對大鼠免疫功能影響，以期為臨床提供指導(dǎo)和依據(jù)。

1 動物與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物 選取健康清潔級SD大鼠64只，喂養(yǎng)于光照12 h、自由進(jìn)食進(jìn)水、室溫23～25℃、相對濕度45%～60%。

1.2造模方法 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，造模大鼠在頸背部剃毛，禁食24 h采用2%2,4-二硝基氯苯丙酮液滴頸背，1次/d，每次5滴，連續(xù)14 d致敏，隨后采取保留灌腸方法向肛門內(nèi)6 cm灌注1%2,4-二硝基氯苯丙酮液，1次/d，連續(xù)4 d，造模后大鼠出現(xiàn)精神萎靡、稀便或膿血黑便，肛門周圍和會陰潮濕，處死大鼠取結(jié)腸標(biāo)本進(jìn)行病理檢查，確定出現(xiàn)充血、水腫和潰瘍確定造模成功。

1.3干預(yù)方法 將大鼠分為對照組、模型組、陽性組、實(shí)驗(yàn)組，模型組、陽性組和實(shí)驗(yàn)組建立UC模型，陽性組給予柳氮磺胺吡啶片300 mg/kg進(jìn)行治療，實(shí)驗(yàn)組在陽性組基礎(chǔ)上采取藥膳輔助喂養(yǎng)，在大鼠食物中摻入丁香蓼和蒲黃各3 g，每周應(yīng)用藥膳超過4次以上；模型組和對照組給予300 mg/kg蒸餾水灌胃。

1.4病理學(xué)染色 干預(yù)4 w后對各組大鼠進(jìn)行處死，在病變結(jié)腸部位黏膜組織進(jìn)行獲取，稱重后剪碎，置入2 ml離心管加入50 μl L-2-氯苯丙氨酸、0.5 ml甲醇/氯仿混合液，采取55 Hz研磨儀處理6 min，以12 000 r/min離心15 min后取出0.4 ml上清液置入2 ml樣瓶，在真空濃縮器中干燥提取物。采用病理切片和染色觀察腸點(diǎn)膜組織形態(tài)變化及損傷情況。

1.5細(xì)胞因子檢測 在處死大鼠前取血以3 500 r/min離心10 min，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定外周血中白細(xì)胞介素(IL)-2、γ-干擾素(IFN-γ)、IL-4、IL-10，按照試劑盒說明書操作，試劑由南京建成生物制品有限公司提供。

1.6疾病活動指數(shù)(DAI) DAI評分：根據(jù)大鼠的體重變化、大便性狀、便血情況進(jìn)行評價，分別根據(jù)癥狀病情程度評價為0分、1分、2分、3分、4分、5分，評分越高越嚴(yán)重，體重變化、大便性狀、便血情況評分之和/3為DAI。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1病理學(xué)結(jié)果觀察 對照組可見腸黏膜上皮完整、腺體結(jié)構(gòu)清晰、隱窩正常、無充血水腫、無炎性細(xì)胞浸潤；模型組可見結(jié)腸組織中炎癥細(xì)胞較多、水腫明顯、腺體結(jié)構(gòu)受到一定程度的破壞、黏膜下淋巴細(xì)胞增生明顯甚至形成淋巴濾泡；陽性組、實(shí)驗(yàn)組可見結(jié)腸黏膜病變程度較模型組顯著的減輕。見圖1。

圖1 結(jié)腸組織HE染色結(jié)果(×400)

2.2各組血清Th1/Th2細(xì)胞免疫因子水平比較 干預(yù)4 w后，模型組IL-2、IFN-γ顯著高于對照組(P<0.05)，IL-4、IL-10顯著低于對照組(P<0.05)；陽性組、實(shí)驗(yàn)組IL-2、IFN-γ顯著低于模型組(P<0.05)，IL-4、IL-10顯著高于模型組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組IL-2、IFN-γ顯著低于陽性組(P<0.05)，IL-4、IL-10顯著高于陽性組(P<0.05)；見表1。

2.3各組DAI指數(shù)比較 干預(yù)4 w后，模型組體重變化、大便性狀、便血情況及DAI評分與對照組比較差異顯著(P<0.05)；陽性組、實(shí)驗(yàn)組體重變化、大便性狀、便血情況及DAI評分顯著與模型組比較差異顯著(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組的體重變化、大便性狀、便血情況及DAI評分與陽性組比較差異顯著(P<0.05)；見表1。

表1 各組血清Th1/Th2細(xì)胞免疫因子水平及DAI比較

3 討 論

UC是臨床常見的自身免疫性疾病，臨床體征出現(xiàn)慢性炎癥與潰瘍，可以累及整個結(jié)腸，近年來隨著我國人群飲食結(jié)構(gòu)的變化，UC的發(fā)病率呈現(xiàn)升高的趨勢，對患者生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響〔3〕。目前UC確切發(fā)病機(jī)制尚不明確，一方面與遺傳和免疫因素有關(guān)，有學(xué)者指出在北歐猶太人群UC發(fā)病率極高，同時顯微鏡下觀察潰瘍性結(jié)腸炎患者黏膜固有層出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤，而通過應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素與免疫抑制藥物治療后病情能夠緩解，而且一部分UC患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)抗結(jié)腸上皮細(xì)胞抗體〔4〕。另一方面UC患者體內(nèi)存在嚴(yán)重的氧化應(yīng)激反應(yīng)，腸道黏膜血流量下降后出現(xiàn)再灌流導(dǎo)致氧化還原反應(yīng)不完全，腸道內(nèi)形成大量的氧自由基引發(fā)過氧化反應(yīng)，腸黏膜通透性增加，體內(nèi)吞噬細(xì)胞活動增強(qiáng)造成細(xì)胞損傷〔5〕。本研究建立了大鼠動物模型采用2,4-二硝基氯苯丙酮建立UC模型，通過模擬人體免疫致敏過程造成遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致大鼠腸黏膜發(fā)生損傷，形成了全身免疫異常與局部炎癥反應(yīng)相結(jié)合，造模的成功率較高，而且重復(fù)性好，在動物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最為廣泛〔6〕。通過造模并對大鼠結(jié)腸組織進(jìn)行觀察會見到結(jié)腸黏膜和黏膜下層發(fā)生充血，水腫，炎癥浸潤，部分黏膜發(fā)生脫落壞死并形成潰瘍〔7〕。臨床目前治療UC主要目的是提升患者生存質(zhì)量，控制發(fā)作次數(shù)，西醫(yī)常用的藥物包括水楊酸類藥物，效果可靠，但是不良反應(yīng)嚴(yán)重，而且需要長期開展維持治療；糖皮質(zhì)激素類藥物則容易發(fā)生骨質(zhì)疏松、精神興奮、消化道出血等并發(fā)癥，病情容易反復(fù)〔8,9〕。

中醫(yī)學(xué)一直是臨床重要的補(bǔ)充替代治療方法，在多種慢性疾病的治療中具有重要意義，中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為UC的發(fā)病原因主要是由于先天稟賦不足，脾胃功能較差，同時感受風(fēng)寒濕泄氣或者飲食不節(jié)等造成了濕熱客于腸道，氣機(jī)升降失衡，血液運(yùn)行瘀滯，肉腐血敗形成了內(nèi)癰，因此脾胃虛弱是發(fā)病根本，濕熱血瘀為發(fā)病之標(biāo)，病位在大腸，因此中醫(yī)提倡采取清腸化濕、健脾助運(yùn)、斂瘡生肌為主要的治療原則〔10〕。中醫(yī)藥膳治療早期秦漢時期就已存在，食療已成為中醫(yī)學(xué)中重要的分支，通過中醫(yī)理論指導(dǎo)將中藥同食物相結(jié)合發(fā)揮治病防病、養(yǎng)生保健的作用，因此在多種慢性疾病的治療與保健中具有重要意義〔11〕。本研究在大鼠UC動物模型中加入了中藥食藥的方法，通過在食物加入中藥丁香蓼與蒲黃，丁香蓼性涼味苦辛，具有清熱利水除濕、活血化瘀止瀉的作用，現(xiàn)代藥理學(xué)發(fā)現(xiàn)丁香蓼中含有訶子次酸三乙酯與沒食子酸，可以有效抑制痢疾桿菌、經(jīng)黃色葡萄球菌等，同時可以降低血管通透程度，減少局部分泌物釋放，增加腸道吸收〔12，13〕。蒲黃則味甘，性涼，可以涼血止血止痛、活血化瘀燥濕，其中含有大量的香草酸、反式對羥基肉桂酸等可以抑制多種細(xì)菌，含有的槲皮素也同樣具有抗菌效果〔14〕。通過將中藥和食物結(jié)合制作成藥膳形成清淡、易消化食物可以起到抑制炎癥反應(yīng)作用，同時還可以抑制并調(diào)節(jié)腸道菌群，有助于藥物充分的吸收和發(fā)揮，促進(jìn)了潰瘍創(chuàng)面的愈合，而且通過長期服用有助于提升機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療和預(yù)防的作用〔15〕。

本研究結(jié)果說明藥膳應(yīng)用在UC大鼠模型中可以顯著減輕UC癥狀和體征。本研究結(jié)果說明采取藥膳治療應(yīng)用在UC大鼠模型中可以調(diào)節(jié)大鼠細(xì)胞免疫因子水平，降低IL-2、IFN-γ濃度，提升IL-4、IL-10濃度。本研究DAI結(jié)果說明采取藥膳治療應(yīng)用在UC大鼠模型中減輕UC疾病活動程度。本研究優(yōu)勢在于利用動物模型證實(shí)了藥膳在輔助治療UC中的效果，充分發(fā)揮了中西醫(yī)結(jié)合治療的優(yōu)勢，為臨床開展UC治療提供了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)，但是本研究對于藥膳發(fā)揮作用的確切機(jī)制還需要深入論證。