E-Cad、G-17、HER-2與胃癌術后復發風險的相關性

茆 政，錢增堃，應 斐，王昭俐，肖 群，崔 凡

（蕪湖市第一人民醫院檢驗科，安徽 蕪湖 241000）

目前，全球胃癌的發病率和死亡率分別居所有腫瘤的第5位和第2位，在我國分別居第2位和第3位[1]。胃癌的治療主要采取手術及放療、化療的方法，但有學者發現，在早期胃癌根治術后仍有一定比例的患者會復發[2]。因此，預測胃癌患者的復發情況，及時調整治療方案，對于患者的預后具有積極的意義。有研究結果顯示，上皮型鈣黏蛋白（epithelial cadherin，E-Cad）與腫瘤的遷移、浸潤及預后有關[3]。人類表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）除與腫瘤發生、發展相關外，還是臨床治療、監測及預后評估的指標，與胃癌患者術后的生存時間顯著相關[4]。有研究結果顯示，HER-2激活可進一步促進腫瘤細胞的分裂及分化，促使腫瘤惡化[5]。胃泌素-17（gastrin-17，G-17）是近年來發現的胃癌的早期篩查指標，可用于反映胃癌細胞的增殖情況和腫瘤負荷狀態[6]。本研究擬探討E-Cad、HER-2、G-17與早期胃癌患者根治術后復發風險的相關性，為胃癌的預后判斷提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2015年1月—2016年12月蕪湖市第一人民醫院行胃癌根治術的患者100例，在術后進行為期5年的隨訪，有8例患者因聯系方式變更等原因失訪，失訪率為8%；最終入組92例患者（胃癌組），其中男55例、女37例，年齡（50.29±2.59）歲，體質量指數（body mass index，BMI）為（24.55±2.11）kg/m2。以患者復發或隨訪滿5年作為隨訪終點，隨訪時間為21～60個月，中位隨訪時間為38個月。根據有無復發將患者分為復發組（25例）和非復發組（67例）。另選取同期蕪湖市第一人民醫院胃良性病變患者92例（低級別上皮內瘤變61例，慢性萎縮性胃炎31例）作為對照組，其中男50例、女42例，年齡（50.37±2.46）歲，BMI為（24.61±3.48）kg/m2。2個組之間性別、年齡和BMI差異均無統計學意義（P>0.05）。本研究經蕪湖市第一人民醫院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準

1.2.1 納入標準 （1）符合胃癌的診斷標準[7]；（2）預計生存時間>6個月；（3）卡氏（Karnofsky，KPS）評分[6]均≥70分；（4）患者知情且同意本研究方案。

1.2.2 排除標準 （1）心、肝、腎功能嚴重不全者；（2）存在交流障礙者；（3）不配合本研究方案者。

1.3 方法

1.3.1 一般資料 收集所有對象性別、年齡、臨床分期、分化程度、復發情況等一般資料。

1.3.2 E-Cad、G-17檢測 采集所有患者術前清晨空腹靜脈血5 mL，1 800×g離心10 min，分離血清，-80 ℃保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清E-Cad、G-17水平，E-Cad試劑盒購自上海江萊實業股份有限公司，G-17試劑盒購自必歐瀚生物技術（合肥）有限公司，檢測儀器為HR801型酶標儀（深圳華科瑞科技有限公司）。嚴格按儀器和試劑盒說明書操作。

1.3.3 HER-2檢測 收集胃癌患者行胃癌根治術時切除的腫瘤組織，胃良性病變患者行胃鏡檢查時采集的組織樣本。采用免疫組化法檢測胃組織樣本中HER-2的表達量，BenchMark XT免疫組化染色試劑盒購自瑞士羅氏公司，嚴格按試劑盒說明書進行操作。采用CX43型顯微鏡（日本奧林巴斯公司）觀察5個高倍鏡視野，每個高倍鏡視野計數100個腫瘤細胞。根據細胞膜著色的腫瘤細胞比例及染色程度進行評分：無染色或≤10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜著色，評分為0；>10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜著色，評分為1+；>10%的浸潤癌細胞呈現不完整的和/或弱到中等強度的細胞膜著色，或≤10%的浸潤癌細胞呈現強的、完整的細胞膜著色，評分為2+；>10%的浸潤癌細胞呈現強的、完整的細胞膜著色，評分為3+，見圖1。將評分0、1+定義為陰性，評分2+定義為弱陽性，評分3+定義為陽性。

圖1 胃癌組織HER-2陽性（3+）（×400）

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析。呈正態分布的計量資料以±s表示，2個組之間比較采用t檢驗。計數資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估各項指標判斷胃癌復發的效能。采用Cox回歸分析評估影響胃癌復發的因素。采用Kaplan-Meier生存曲線評估胃癌患者的5年復發率。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組與對照組血清E-Cad、G-17水平及腫瘤組織HER-2陽性率比較

胃癌組血清G-17水平和腫瘤組織HER-2陽性率均顯著高于對照組（P=0.000），血清E-Cad水平顯著低于對照組（P=0.000）。見表1。

表1 胃癌組與對照組血清E-Cad、G-17水平及腫瘤組織HER-2陽性率比較

2.2 不同臨床病理參數胃癌患者血清E-Cad、G-17水平及腫瘤組織HER-2陽性率比較

血清E-Cad、G-17水平及腫瘤組織HER-2陽性率與胃癌的TNM分期、分化情況及是否復發有關（P＜0.05），與性別無關（P>0.05）。見表2。

表2 不同臨床病理參數胃癌患者血清E-Cad、G-17水平及腫瘤組織HER-2陽性率比較

2.3 E-Cad、HER-2、G-17判斷胃癌復發的效能

ROC曲線分析結果顯示，E-Cad、G-17、HER-2單項檢測及3項指標聯合檢測判斷胃癌復發的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為0.775、0.822、0.603、0.950。見表3、圖2。

表3 E-Cad、HER-2、G-17判斷胃癌復發的ROC曲線參數

圖2 E-Cad、HER-2、G-17判斷胃癌復發的ROC曲線

2.4 胃癌患者的5年復發率分析

血清E-Cad、G-17分別以≥15.32 ng/mL、≥22.71 pg/mL為高表達，以＜15.32 ng/mL、＜22.71 pg/mL為低表達；HER-2以弱陽性（2+）和陽性（3+）為高表達，以陰性為低表達。Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示，胃癌復發患者E-Cad低表達組復發率高于高表達組（P＜0.05），而G-17低表達組、HER-2低表達組復發率低于G-17高表達組、HER-2高表達組（P＜0.05）。見圖3。

圖3 胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲線

2.5 影響胃癌復發的單因素分析

將與患者預后可能相關的臨床病理因素（年齡、性別、腫瘤大小、分化情況、TNM分期、E-Cad、G-17、HER-2）進行單因素分析。結果顯示，年齡、TNM分期、E-Cad、G-17、HER-2與胃癌根治術后患者預后相關。見表4。

表4 影響胃癌復發因素的單因素分析

2.6 影響胃癌復發的多因素分析

將單因素分析有統計學意義的項目納入多因素Cox回歸分析，結果顯示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、E-Cad水平降低、G-17水平升高、HER-2陽性（2+～3+）均是胃癌復發的危險因素（HR值分別為0.292、0.745、1.997、2.895，95%CI分別為0.139～0.714、0.664～0.985、0.658～4.328、0.548～7.758）。見表5。

表5 影響胃癌復發因素的多因素分析

3 討論

目前，針對胃癌的治療主要遵循早發現、早診斷、早治療的原則，但仍有一部分行胃癌根治術的患者會發生復發。因此，通過分析胃癌患者相關指標的檢測結果，尋找復發的危險因素，進而對患者的術后治療方案進行有針對性的調整，這對胃癌患者的預后具有積極的意義[8]。

本研究結果顯示，胃癌患者血清E-Cad水平顯著低于胃良性病變患者（P=0.000），復發患者血清E-Cad水平低于未復發患者（P＜0.05）。有研究結果顯示，胃癌患者E-Cad水平的降低會進一步促進胃癌細胞的遷移及向周邊正常組織侵襲。胃癌主要起源于胃部上皮細胞[9]，E-Cad又被稱為上皮細胞黏附因子，是維持細胞完整結構的極性鈣依賴性跨膜糖蛋白，在腫瘤發展的早期及遷移過程中有重要作用。有研究發現，胃癌根治術后，因腫瘤以及部分有分泌功能的胃黏膜被切除，正常情況下E-Cad會呈顯著上升趨勢，但當發生復發或轉移后，E-Cad水平會顯著下降[10]。張毅等[11]的研究結果顯示，E-Cad與胃癌的進展顯著相關。本研究結果顯示，E-Cad低表達組5年復發率高于E-Cad高表達組（P＜0.05），且E-Cad表達降低是胃癌復發的危險因素（HR=0.835，95%CI為0.767～0.909），與文獻報道[12]一致。以往有關E-Cad的研究結論均是基于腫瘤組織得出的，本研究對胃癌患者血清E-Cad水平進行了分析，得出的結論與基于腫瘤組織的研究結論[13]基本一致。

G-17是一種多肽激素，調控了胃酸分泌量的90%。當胃部突變表現為多灶性萎縮，G-17水平明顯下調，G-17在一定程度上反映了胃癌患者的腫瘤負荷狀態[14]。本研究結果顯示，胃癌患者血清G-17水平顯著高于胃良性病變患者（P=0.000）；復發患者血清G-17水平高于未復發患者（P=0.000）。有研究顯示，胃癌患者G17水平顯著升高，可促進癌細胞的生長和增殖[15]。本研究結果顯示，G-17高表達組5年復發率高于G-17低表達組（P＜0.05），G-17表達升高是胃癌復發的危險因素（HR=1.568，95%CI為1.292～1.904）。董曲文等[16]的研究結果顯示，隨著胃癌的進展，患者G-17水平顯著升高，與本研究結果一致。

HER-2是一種胞內膜蛋白，具有酪胺酸激活酶活性。在正常情況下，HER-2為非激活狀態，而HER-2與特異性配體結合后，可促進腫瘤細胞的有絲分裂及分化，導致腫瘤患者病情惡化[17]。有研究結果顯示，胃癌細胞的HER-2陽性表達率為7%～34%[18]。本研究中，胃癌患者腫瘤組織HER-2陽性表達率為29.35%，顯著高于胃良性病變患者（5.43%）（P=0.000）。陳玲等[12]的研究結果顯示，胃癌患者的腫瘤組織HER-2表達升高與胃癌根治術后復發顯著相關。本研究結果顯示，HER-2高表達組5年復發率高于HER-2低表達組（P＜0.05），HER-2表達升高是胃癌復發的危險因素（HR=3.981，95%CI為1.504～10.538）。雖然HER-2的陽性表達率與胃癌患者術后生存時間顯著相關，但單獨采用HER-2評估腫瘤進展有一定的局限性，有研究發現，在不同的研究中，HER-2高表達者的胃癌發病率不同[19]。

本研究ROC曲線分析結果顯示，E-Cad、G-17、HER-2單項檢測與聯合檢測判斷胃癌復發的AUC分別為0.775、0.822、0.603、0.950，提示3項指標對于胃癌復發的判斷均有一定的價值，聯合檢測的診斷效能更高。

綜上所述，E-Cad、G-17、HER-2在胃癌術后復發的預測中具有重要價值。