支氣管哮喘患兒血清IgE、FeNO水平與ORMDL3基因單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性

王旭榮 張北寧 劉娜娜

(1.西安市第一醫(yī)院兒科，陜西 西安 710001；2.榆林市中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，陜西 榆林 719000)

支氣管哮喘是兒童常見呼吸系統(tǒng)疾病之一，患兒主要以慢性炎性反應(yīng)以及氣道高反應(yīng)性為特征[1]。研究[2]顯示，未予以特異性干預(yù)手段的支氣管哮喘患兒，病情容易進(jìn)展為肺心病，對(duì)其生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。血清類黏蛋白1樣蛋白3(ORMDL3)基因是目前為止發(fā)現(xiàn)的與哮喘有關(guān)的易感基因，國內(nèi)相關(guān)性報(bào)道較少[2]。本文主要探討支氣管哮喘患兒血清免疫球蛋白(IgE)、呼出氣一氧化氮(FeNO)水平與ORMDL3基因單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2017年3月至2018年2月我院收治的支氣管哮喘患兒185例作為研究對(duì)象，患兒隨訪時(shí)間均在1年以上，患兒臨床治療以及臨床資料的使用均取得監(jiān)護(hù)人的同意，并簽署知情同意書。根據(jù)患兒有無高危因素(是否合并過敏性疾病或父母哮喘病史等)將其分為非特應(yīng)性哮喘組(n=59)和特應(yīng)性哮喘組(n=126)。特應(yīng)性哮喘組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患兒年齡3～12歲；(2)根據(jù)《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[3]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，喘息次數(shù)>2次/6個(gè)月或3次/年；(3)患兒存在過敏性鼻炎、變應(yīng)性皮炎等過敏性疾病，父母有一方存在哮喘史；(4)患兒監(jiān)護(hù)人均知情同意。非特應(yīng)性哮喘組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患兒年齡3～12歲；(2)根據(jù)《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，喘息次數(shù)>2次/6個(gè)月或3次/年；(3)患兒無過敏性鼻炎、變應(yīng)性皮炎等過敏性疾病，父母未存在哮喘史；(4)患兒監(jiān)護(hù)人均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并先天性支氣管或肺部發(fā)育異常、氣管內(nèi)阻塞、支氣管擴(kuò)張、肺結(jié)核或先天性心臟病等；(2)近期合并其他病原體而引發(fā)的呼吸道感染患兒。

1.2方法 抽取患兒清晨空腹靜脈血，將其置于含有肝素抗凝劑的離心管中，搖勻、離心后分離血清，置于-20℃冰箱內(nèi)保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患兒血清IgE水平，檢測(cè)試劑盒購于福建邁新公司，檢測(cè)嚴(yán)格參照試劑盒使用說明書。采用Niox Mino eNO分析儀檢測(cè)患兒FeNO水平，取坐位，對(duì)身高<130 cm或年齡<10歲的兒童，6 s為參考呼出時(shí)間，呼出中期的2～3 s為測(cè)試平臺(tái)，每例患兒測(cè)試1次。采用無菌采血管抽取患兒外周靜脈血，將其置于EDTA-K2抗凝試管中充分搖勻，然后置于-80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩２捎锰旄萍?北京)有限公司生產(chǎn)的TGuide S32自動(dòng)核酸提取儀按照說明書進(jìn)行全血基因DNA提取。引物設(shè)計(jì)參照美國國立生物技術(shù)信號(hào)中心(NCBI)官方網(wǎng)站的GenBank中序列(rs7216389)，使用生物軟件Premier5.0設(shè)計(jì)，由上海生工生物技術(shù)有限公司合成印務(wù)，上游引物：GGTGGCAACTGACTCAGAAC，下游引物：CAACCTGGCCAACATGGTGA。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：1.0 μL Forward primer(5 μm)，1.0 μL Reverse primer(5 μm)，2.0 μL DNA模板，12.5 μL dNTP Mixture，8.5 μL ddH2O。擴(kuò)增條件：94℃ 5 min，94℃ 30 sec，1個(gè)循環(huán)；55℃ 30 sec，72℃ 30 sec，72℃ 5 min，4℃ 恒溫，5個(gè)循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1血清IgE、FeNO水平 特應(yīng)性哮喘組患兒血清IgE、FeNO水平分別為(27.81±3.34)×10-9、(217.48±56.39)IU/mL，顯著高于非特應(yīng)性哮喘組的(10.25±2.12)×10-9、(125.73±37.53)IU/mL，兩組比較差異顯著(t=37.014、11.366，P均<0.05)。

2.2ORMDL3基因rs7216389位點(diǎn)基因多態(tài)性分布 兩組基因型及等位基因頻率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.977、7.913，P<0.05)。見表1。

表1 兩組患兒ORMDL3基因rs7216389位點(diǎn)基因多態(tài)性分布

2.3不同ORMDL3基因型患兒血清IgE、FeNO水平比較 兩組不同ORMDL3基因型患兒血清IgE、FeNO水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組不同ORMDL3基因型患兒血清IgE、FeNO水平比較

3 討 論

哮喘作為一種多基因遺傳性疾病，其遺傳率可達(dá)到36～79%。在ORMDL3基因與兒童哮喘的相關(guān)研究已有報(bào)道，研究認(rèn)為，ORMDL3 rs7216389位點(diǎn)多態(tài)性與兒童罹患哮喘的風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[4-5]。本研究結(jié)果顯示，非特應(yīng)性哮喘組TT、TC、CC三種基因頻率分別為76.27%、15.25%、8.47%，MP非哮喘組TT、TC、CC三種基因頻率分別為50.79%、38.89%、10.32%，A、G等位基因頻率分別為83.90%、16.10%，特應(yīng)性哮喘組T、C等位基因頻率分別為70.24%、29.76%。兩組基因型及等位基因頻率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與學(xué)者報(bào)道結(jié)果相似[6]，提示TT基因型以及T等位基因表達(dá)使患兒進(jìn)展成為哮喘具有著更高的風(fēng)險(xiǎn)，而CC基因型可能是相關(guān)保護(hù)因素。

IgE是哮喘特應(yīng)性體質(zhì)的標(biāo)志，屬于一種免疫球蛋白，可誘發(fā)I型變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致患兒出現(xiàn)可逆的氣管阻塞，從而誘導(dǎo)哮喘發(fā)作[7]。研究[8]結(jié)果顯示，支氣管哮喘患兒可導(dǎo)致IgE水平的升高，而IgE既可以作為感染源，同時(shí)也是特異的過敏原。支氣管哮喘患兒具有更高水平的促炎細(xì)胞因子，導(dǎo)致機(jī)體總IgE水平的升高。本研究結(jié)果顯示，特應(yīng)性哮喘組患兒血清IgE、FeNO水平顯著高于非特應(yīng)性哮喘組(P<0.05)，提示特應(yīng)性哮喘患兒血清IgE、FeNO水平明顯高于非特應(yīng)性哮喘患兒。此外非特應(yīng)性哮喘組和特應(yīng)性哮喘組患兒不同ORMDL3基因型患兒血清IgE、FeNO水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明不同基因型對(duì)患兒血清ET-1、IgE水平無明顯影響，但是考慮到本研究納入樣本量較小，缺乏大樣本研究分析，提示進(jìn)一步研究還需要擴(kuò)大樣本量，以獲得更為準(zhǔn)確的研究結(jié)果。