青海省海北藏族地區牛病毒性腹瀉的調查

馬曉茜

摘要：為了解我國青海省海北藏族地區牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的感染情況，對該地區的海晏縣、祁連縣、剛察縣、門源回族自治縣腹規模化牛場進行樣品采集，分別采取104、89、113、142份牛血清樣品，然后利用牛病毒性腹瀉病毒血清學進行抗體檢測，同時利用RT-PCR法對牛病毒性腹瀉病毒進行病原學檢測。結果顯示，海北藏族地區海晏縣、祁連縣、剛察縣、門源回族自治縣牛病毒性腹瀉病毒抗體總陽性率為44.64%;RT-PCR檢測病毒性腹瀉病毒病原結果陽性率分別為6.73%、6.74%、8.85%、4.23%;說明青海省海北藏族地區牛病毒性腹瀉病毒的整體免疫水平不高，且該病的病原陽性率偏高，需要加強對該病的一個免疫預防。

關鍵詞：牛病毒性腹瀉病毒;血清學;病原學;調查

牛病毒性腹瀉病毒屬于黃病毒科瘟病毒屬，在分類上與邊界病毒、豬瘟病毒同為一屬，在抗原性上面具有有交叉性反應[1-2]。該病是在美國東部地區首次發現并分離的，我國是在上個世紀80年代首次在引進的國外牛的流產胎兒中分離[3]。臨床上該病毒會感染牛、豬、羊等多種家畜，但是主要以感染牛為主。牛感染該病之后會出現腹瀉、發熱、白細胞減少、流產等癥狀，同時對犢牛還會造成先天的持續性感染，給養牛業造成巨大損失。為了了解青海省海北藏族地區牛病毒性腹瀉病毒的感染情況，筆者對該地區的海晏縣、祁連縣、剛察縣、門源回族自治縣牛病毒性腹瀉病毒進行血清學和病原學調查，為該病的防治提供科學依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品

在青海省海北藏族地區海晏縣、祁連縣、剛察縣、門源回族自治縣的規模化牛場分別采取104、89、113、142份病牛血清樣品，共計448份。每份樣品的血樣采集3-5mL，置于加有肝素或EDTA抗凝劑的采血管中，2～8°C冷藏保存至實驗室。

1.1.2主要試劑

RNA提取試劑盒購于北京天根生物科技有限公司，購自北京康為世紀生物科技有限公司;BVDV陽性血清、陰性血清購于華威特生物制藥有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1抗體效價測定

用DMEM細胞培養液（含3.5%馬血清）對待檢樣品和BVDV陽性、陰性對照血清在96孔U型板內進行2倍稀釋，按1∶2、1∶4和1∶8比例進行稀釋，每個稀釋度接種2孔，每孔0.1mL。用DMEM細胞培養液（含3.5%馬血清）將牛病毒性腹瀉病毒中和抗原稀釋為200 TCID50/0.1mL。將稀釋好的中和抗原液按每孔0.1mL的量加到含有血清的96孔板中，置37°C的二氧化碳培養箱中和1h。最后取培養16～24h、長成良好的MDBK96孔培養板細胞去中和1h的病毒，每孔0.1mL，置于37°C的二氧化碳培養箱培養4d，然后計算細胞板中的血清中和抗體效價，同時記錄陽性個數然后計算陽性率。

1.2.2病原學檢測

取陰陽對照和待檢樣品根據RNA提取試劑盒說明書進行提取，然后通過反轉錄方法獲得cDNA，在PCR擴增儀上進行擴增。擴增產物用1%瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀系統下觀察并記錄BVDV抗原陽性份數，然后計算陽性率。

2結論

2.1血清抗體檢測結果

由表1可以看出4個縣的牛群牛病毒性腹瀉病毒血清中和試陽性率分別為43.27%、35.96%、51.33%、45.75%，陽性血清總的為200份，總陽性率44.75%。抗體陽性率直接反映樣品病牛過往感染牛病毒性腹瀉，同時也反映母源抗體獲得情況和疫苗免疫情況，本調查結果說明44.64%的牛只已獲得牛病毒性腹瀉免疫力。

2.2抗原檢測結果

從表2 可以看出4個縣的牛群樣品牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測的陽性率分別為6.73%、6.74%、8.85%、4.23%。抗原檢測結果陽性說明病牛感染了牛病毒性腹瀉病毒，或者為牛病毒性腹瀉病毒持續性感染牛。

3討論

牛病毒性腹瀉病毒自從1980年傳入我國，就是我國各地區多個省份普遍存在[7];有學者對內蒙古自治區集約化養牛場病毒性腹瀉感染情況進行調查，發現巴彥淖爾、烏蘭浩特、呼和浩特地區的牛場病毒性腹瀉病毒平均陽性率分別為48.70%、77.80%、33.33%，總血清陽性率為58.35%[8]。王建領等[9]在2012年對牛病毒性腹瀉在我國的流行范圍進行調查，發現該病在我國各地已經廣泛流行。本次對青海省海北藏族地區牛病毒性腹瀉病毒的血清抗體和病原進行檢查，發現4個縣的448份牛血清樣品的整體抗體水平在35.96%- 51.33%，總的陽性血清為200份，說明這4個縣的牛病毒性腹瀉的整體免疫水平參差不齊，且抗體水平不高，說明該地區的羊牛場應該加強對牛病毒性腹瀉的整體免疫水平，而且病原學的檢測結果牛病毒性腹瀉的陽性率在4-23%-8.85%，充分證明了北藏族地區牛病毒性腹瀉病毒的感染率偏高，也證明了對該病毒的抵抗能力偏弱，需要對牛群合理安排牛病毒性腹瀉病毒的疫苗免疫。

參考文獻：

[1]Tomoko Y， Takashi K， Hiroshi A， et al. Genomic analyses of bovine viral diarrhea viruses isolated from cattle imported into Japan between 1991 and 2005[J]. Vet Microbiol， 2008， 127（3-4）： 386-391.

[2]張淑琴，郭利，冷雪，等.牛病毒性腹瀉病毒 BVDV-JL 株的分離與鑒定[J]. 中國預防獸醫學報，2011，33（3）：181-184.

[3]蘭宇，孟相秋，趙建增，等.牛病毒性腹瀉的免疫預防[J]. 中國動物保健 ，2016，2（18）：29-31.