青海省海北藏族地區引起牛腹瀉的大腸桿菌分離以及藥敏試驗

馬曉茜

摘要：本文選用青海省海北藏族地區某奶牛養殖基地的腹瀉病死牛為研究對象，取其心臟、肝臟、脾臟、肺臟其進行大腸桿菌分離鑒定并進行藥敏試驗。結果顯示，分離的菌株經過各個培養基的菌落形態、革蘭氏染色顯微鏡鏡檢、生化試驗結果可以確定為大腸桿菌;分離的大腸桿菌對阿米卡星、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素藥物敏感;對氨芐青霉素、阿莫西林、卡那霉素、阿奇霉素、氟苯尼考藥物中度敏感;對恩諾沙星、四環素、鏈霉素藥物產生耐藥。

關鍵詞：海省海北藏族地區;牛;大腸桿菌;分離鑒定;藥敏試驗

牛大腸桿菌病是一種急性的傳染病，是由大腸桿菌引起的，臨床上多表現為腹瀉和敗血癥，在犢牛中的發病率最高，高達60%，死亡率達30%[1]。近幾年隨著肉牛和奶牛集約化養殖規模的迅猛發展，牛腹瀉的發生率正在逐年攀升，發病原因也是越變越復雜[2]。青海省的草場面積占地3858萬多公頃，是全省的土地面積約53%，所以該地區屬于天然草場，草質優良，適合畜牧業的發展[3];海北藏族地區牛業養殖占了青海省60%以上[4];所以本研究選用青海省海北藏族地區患有腹瀉的奶牛，對其進行大腸桿菌進行分離，然后并進行藥敏試驗，以期為青海省海北藏族地區牛業養殖過程引起牛腹瀉的大腸桿菌提供治療方案。

1材料與方法

1.1病料

選用青海省海北藏族地區某奶牛養殖基地的腹瀉病死牛，進行解剖，取其心臟、肝臟、脾臟、肺臟，用無菌自封袋保存，冷藏低溫條件下帶回實驗室。

1.2試驗需要的材料

試驗需要的材料大腸桿菌培養基購于上海生工生物工程有限公司;微量生化鑒定管購于杭州天和微生物試劑有限公司，主要有糖類發酵試驗管、吲哚試驗管、甲基化試驗管、V-P試驗管、硫化氫試驗管、檸檬酸鹽利用試驗管、尿素酶試驗管;藥敏片購于杭州馳成醫藥科技有限公司，主要有氨芐青霉素、恩諾沙星、阿米卡星、阿莫西林、左氧氟沙星、四環素、頭孢曲松鈉、卡那霉素、鏈霉素、阿奇霉素、慶大霉素、氟苯尼考。除需要以上材料外，還需要培養箱和顯微鏡。

1.3試驗方法

1.3.1培養基配置

培養基的配置均按照說明書要求進行。

1.3.2細菌分離鑒定

解剖取回來的病料，取其干凈面利用消毒好的劃線接種棒蘸取上面的血水，劃線接種于配置好的營養瓊脂培養基上面，然后置于37℃恒溫培養箱進行培養，24h后取上面的單個菌落劃線接種于各種培養基中37℃培養24h，同時置于液體培養基中進行純化培養;分離到的純菌株接種微量生化鑒定管中進行生化試驗，利用革蘭氏染色液進行革蘭氏染色。

1.3.3藥敏試驗

取純化好的細菌菌液均勻涂布于營養瓊脂平板上，然后在一個培養基上面貼上藥敏片，一塊平板貼6片藥敏片，然后置于37℃的恒溫培養箱進行恒溫培養24h，然后用游標卡尺對抑菌圈大小進行測量。結果判定根據美國臨床實驗室標準化委員會推薦的判定標準執行。

2結果

2.1大腸桿菌分離鑒定結果

2.1.1菌落形態

在營養瓊脂培養基上的菌落形態表面為光滑的灰白色;麥康凱培養基上面的菌落為深紅色，表面光滑、扁平、整齊、光滑;SS瓊脂培養基上的菌落為紅色;伊紅美藍瓊脂培養基上菌落帶有紫黑色金屬光澤、圓形、邊緣整齊、表面光滑。

2.1.2革蘭染色結果

通過顯微鏡鏡檢可以可看到紅色短小、兩端圓滑的彎曲桿菌。

2.1.3生化鑒定結果

結果參見表1。

2.2藥敏試驗結果

通過表2可以看出，分離的大腸桿菌對阿米卡星、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素藥物敏感;對氨芐青霉素、阿莫西林、卡那霉素、阿奇霉素、氟苯尼考藥物中度敏感;對恩諾沙星、四環素、鏈霉素藥物產生耐藥。

3.討論

通過本試驗對治病菌進行分離鑒定，引起青海省海北藏族地區某奶牛養殖基地的腹瀉牛死亡確定為大腸桿菌所致。本試選取了12種臨床上用于治療牛腹瀉的藥物，發現分離的大腸桿菌對阿米卡星、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素藥物敏感，庫拉西·阿爾斯坦別克[5]對院阿勒泰地區某牛場2-6周齡腹瀉犢牛進行大腸桿菌分離并進行藥敏試驗，藥敏試驗結果對左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素高度敏，抑菌圈均在30mm以上，本研究分離的大腸桿菌對這三種藥的敏感度和該研究的有差別，造成這個差別的原因可能地區不同和分離的菌株菌對這幾種藥物的敏感度不同有關，而且大腸桿菌血清型眾多，而且不同血清型之間耐藥性也不同[6]。最近因為抗生素的濫用嚴重，導致耐藥性的產生，所以在預防該病上難度加難，所以對于基層牛場做好抗生素的使用篩選非常有必要[7]，這就要求對菌株進行藥敏試驗，然后合理用藥。

參考文獻：

[1]尚婷婷，袁張耀相袁林青袁等援犢牛大腸桿菌病病原的分離鑒定[J].援動物醫學進展，2012，33，6：143-146.

[2]程慧芳，寇亞楠，陳雅君，等.牛源大腸桿菌0157院H7的分離鑒定及其生物學特性研究[J].中國人獸共患病學報，2014，30，10：1002-1008.

[3]郝彥龍，剡根強，王靜梅，等.新疆北疆地區致犢牛腹瀉大腸桿菌的分離鑒定及部分生物學特性[J].中國獸醫學報，2012，32（6）：848-851.

[4]丁生喜，張宏巖，劉曉平.青海省藏族地區畜牧業產業化發展[J].統計觀察，2005，1：74-74.

[5]庫拉西·阿爾斯坦別克.致犢牛腹瀉大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗[J].試驗研究，2018，33（5）：16-17.

[6]羅甜甜，王仲兵，雷宇平，等.山西省北部地區舍飼犢牛大腸桿茵病主要病原的分離和耐藥性調查研究[J].中國動物檢疫，2012，29（3）：42-44.

[7]別克木汗.木合木，庫蘭。巴合達吾列提，劉建明，等.規模化牛場犢牛腹瀉的防治措施[J].新疆畜牧業，2018，33（6）：45.