提取工藝對中藥復(fù)合提取物中黃酮含量的影響

屈夢瑤 李 靜 周慧娟 趙 權(quán)

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院，吉林 吉林 132101）

菊花是菊科菊花屬，為菊科植物菊的干燥頭狀花序，菊花味甘、苦，性微寒，具有清肝明目、清熱解毒、散風(fēng)降血壓等功效。可防治感冒、冠心病、便秘、腸炎、高血壓、冠心病、細菌性痢疾、失眠等多種疾病[1]。具有很高的藥用價值，可廣泛用于保健茶中。菊花的化學(xué)成分有黃酮類[2-4]、綠原酸、多糖類、揮發(fā)油、氨基酸和微量元素等[5-7]。

木犀草素是金銀花中黃酮類化合物的主要成分，是金銀花中較強的藥理活性成分，具有清熱解毒、抗炎抑菌的作用[8]。對金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、霍亂弧菌等多種致病菌均有抑制作用[9-11]。木犀草素也有清宣舒散的作用。常用于外感風(fēng)熱、溫病、瘡腫等熱毒的治療。綜上所述，研究金銀花中總黃酮的提取工藝具有重要意義。

連翹具有多種化學(xué)成分，其中苯乙醇苷和木質(zhì)素是連翹的主要化學(xué)成分。現(xiàn)代藥理研究表明，連翹主要具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、保肝、抗腫瘤等活性[12]。從連翹花、葉、果中分離得到的黃酮類化合物主要有蘆丁、黃芩苷、木犀草素、虎皮素、木犀草素等[13]。研究表明，連翹葉和花中黃酮類化合物含量豐富[14]。

丁香為藥食兩用植物材料,黃酮是其重要生物活性成分之一,在食品、調(diào)味品、醫(yī)藥、衛(wèi)生等領(lǐng)域具有廣泛的開發(fā)應(yīng)用價值。丁香味辛、性溫，具有溫中降逆、補腎助陽的作用。它還是一味很好的溫胃藥，對寒邪引起的胃痛、嘔吐、呃逆、腹痛、腹瀉及女性寒痛痛經(jīng)有較好的療效。還能緩解腹部脹氣，增強消化能力，減少惡心嘔吐，尤其是孕婦的有害癥狀[15]。丁香中含有丁香油，能抑制病原菌、葡萄球菌、痢疾和大腸桿菌。也可外用。對體癬、足癬均有較好的療效[16]。

黃酮中含有的抗氧劑非常的多，它能清楚的了解人體中的氧自由基，還能夠抑制油脂過多的溢出，這種功能相當于維生素E 的十倍以上。還能夠防止人們衰老，對于癌細胞的發(fā)生也有很好的阻止作用。還可以改善血液的循環(huán)功能，能夠降低人的膽固醇，降低了人們心腦血管疾病的發(fā)生[17-18]。試驗證明黃酮中的成分能夠快速的降低血糖，而且還有穩(wěn)定膠原蛋白的作用，所以它對糖尿病有很好的作用。還可以加強傷口的愈合能力，有較強的抗組織胺的功能，對于一些敏感癥狀有很好的療效[19]。

1 實驗材料

實驗材料和儀器：

使用四種中藥混合進行提取，分別是丁香、連翹、菊花、金銀花。恒溫水浴鍋、粉碎機、721 型紫外可見分光光度計、電子天平（梅特勒）、托盤天平、量筒、燒杯、移液槍、容量瓶、錐形瓶、玻璃棒、漏斗、濾紙、鑷子等。

2 試驗方法

原料干燥→粉碎→稱重→水浴→提取物→定容。

2.1 黃酮的提取

參照崔援軍、蔡中琴等[20]法并加以改進。用70℃水浴加熱提取1h，料液比1:10，提取2 次，定容后，備用。

黃酮標準曲線的繪制及線性關(guān)系的考察：

參照崔援軍、蔡中琴等[20]方法制備標準曲線。如圖1 所示。

圖1 黃酮標準曲線

由標準曲線數(shù)據(jù)計算得到的單變量線性回歸方程為：y=2.0502x+0.1225，相關(guān)系數(shù)R2=0.8309，結(jié)果表明，該標準品中黃酮類化合物含量在1000～2000μg/ml 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 精密度試驗

對同一份樣液平行取7 份，按上述標準曲線測定法測其吸光值A(chǔ)，相對偏差（RSD）為1.62%，見表1。

表1 精密度實驗結(jié)果（n=7）

2.2.2 重復(fù)性試驗

平行稱取同一樣品6 份，按工藝方法制備樣品，按樣品測定法測定吸光度，相對標準偏差(RSD)為1.44%，見表2。

表2 重復(fù)性實驗結(jié)果（n=6）

2.2.3 穩(wěn)定性試驗

取同一個樣品液6 份，在室溫下放置0h、2h、4h、6h、8h后，記錄吸光度值。相對偏差（RSD）為2.50%，見表3。

表3 穩(wěn)定性實驗結(jié)果（n=6）

3 結(jié)論與分析

3.1 單因素的影響

3.1.1 提取溫度的選擇

稱取1g（精確至0.0001）中藥復(fù)合粉碎物，按1∶12 的料液比，在溫度分別為50、60、70、80℃的水浴中用水浸提40min，浸提兩次，定容至50ml。結(jié)果見圖2。

圖2 不同提取溫度對黃酮提取效果的影響

由圖可見，溫度對中藥復(fù)合粉碎物的提取率有較大影響。在70℃之前隨著溫度的增加，提取率無明顯變化，在50-80℃時提取率隨溫度升高而不斷增大，為避免溫度過高有效成分氧化分解而損失，降低生產(chǎn)成本，提取溫度可以確定為70℃。

3.1.2 提取時間的選擇

稱取1g（精確至0.0001）中藥復(fù)合粉碎物，按1∶12 的料液比，在溫度為70℃的水浴中用水浸提20、40、60、80min，浸提兩次，定容至50ml。結(jié)果見圖3。

圖3 不同提取時間對黃酮提取效果的影響

由圖可知，在20-80min 的提取時間中，中藥復(fù)合粉體的提取率隨提取時間的增加而增加，但當時間到40min 后，提取時間對提取率的影響變得很小，進一步增加提取時間無明顯效果，且增加提取時間可能導(dǎo)致活性成分氧化，從而降低活性成分的含量。因此，可以確定提取時間為40min。

3.1.3 提取次數(shù)的選擇

稱取1g（精確至0.0001）中藥復(fù)合粉碎物，按1∶12 的料液比，在溫度為70℃的水浴中用水浸提40min，分別浸提1、2、3、4 次，定容至50ml。結(jié)果見圖4。

圖4 不同提取次數(shù)對黃酮類化合物提取效果的影響

從圖中可以看出，隨著提取次數(shù)的增加，中藥復(fù)合粉碎物的提取率不斷升高，因此將提取次數(shù)定為4 次。

3.1.4 料液比的選擇

稱取1.0g（精確至0.0001）中藥復(fù)合粉碎物，分別按1：8、1：12、1：16、1：20 的料液比，在溫度為70℃的水浴中用水浸提40min，浸提2 次，定容至50ml。結(jié)果見圖5。

圖5 不同料液比對黃酮提取效果的影響

3.2 最佳提取工藝的確定

通過單因素的試驗，可以看出菊花、金銀花、丁香、連翹混合物黃酮提取的主要因素及水平如表4。

表4 菊花、金銀花、丁香、連翹混合物黃酮提取因素及水平

3.2.1 正交試驗確定最佳提取工藝參數(shù)

根據(jù)單因素試驗結(jié)果設(shè)計，采用L9(34) 正交試驗，通過計算黃酮含量，試驗結(jié)果見表5。

表5 正交試驗結(jié)果

對菊花、金銀花、丁香、連翹混合物黃酮含量做方差分析，得表6。

表6 菊花、金銀花、丁香、連翹混合物黃酮含量單因素方差分析

分析表明，因素C 對試驗結(jié)果有顯著影響，而A,B,D 的影響不顯著。

3.2.2 結(jié)論

通過正交試驗和方差分析，結(jié)果表明：菊花、金銀花、丁香、連翹混合藥材中黃酮類化合物提取的主、次順序為：C＞A＞D＞B，表明提取次數(shù)對菊花、金銀花、丁香和連翹混合物中黃酮類化合物的提取效果影響最大，其次是提取溫度和料液比，提取時間的影響較小，最佳組合為A3B1C3D2。綜合考慮，從菊花、金銀花、丁香和連翹的混合物中提取黃酮類化合物的最佳條件為：提取溫度為70℃，料液比為1：16，萃取時間為40min，提取次數(shù)為4 次，提取量為10.85mg·g-1。

4 結(jié)論

本文以菊花、金銀花、丁香、連翹混合物為試驗樣品原料，進行黃酮提取，確定菊花、金銀花、丁香、連翹的混合物中對黃酮的提取的最佳提取工藝。試驗結(jié)果表明：提取的次數(shù)對菊花、金銀花、丁香、連翹的混合物中黃酮的提取效果影響最大，其次是提取的溫度、料液比，而提取的時間對黃酮的影響較小，所以最佳的提取工藝為：提取溫度為70℃，料液比為1:16 提取40min，提取4 次，提取量為10.85mg·g-1。

據(jù)調(diào)查，中藥中黃酮類化合物的含量測定方法有紫外分光光度法、可見分光光譜法和高效液相色譜法。在黃酮類化合物的提取工藝方面，國內(nèi)學(xué)者目前主要采用溶劑提取法、超聲波提取法和復(fù)合酶法。本實驗采用水浸提法提取菊花、金銀花、丁香、連翹混合藥材中的黃酮類成分，含量測定采用紫外分光光度法，以水為溶劑，考察提取時間的影響，從菊花、金銀花、丁香、連翹中提取黃酮類化合物時，料液比、提取溫度和提取次數(shù)對總黃酮得率的影響，優(yōu)化了提取工藝條件，為大規(guī)模生產(chǎn)提供依據(jù)和參考。