非小細胞肺癌患者腫瘤組織中EGFR和KRAS基因突變及臨床意義

李寅

摘? 要：目的? 探討非小細胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者腫瘤組織中表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）和鼠類肉瘤病毒致癌基因（KRAS）基因突變及臨床意義。方法? 收集2019年1月～2021年8月南陽醫專第一附屬醫院病理科因活檢穿刺、手術切除和會診的NSCLC標本128份。用熒光PCR檢測腫瘤組織中EGFR、KRAS基因突變情況，并分析EGFR、KRAS現狀以及與臨床病理特征的關系。結果? 128例NSCLC患者中檢出KRAS基因突變3例（占2.34%），其中G12A突變、外顯子3Q61H和2 G12C突變各1例;檢出EGFR基因突變43例（占33.59%），其中外顯子19突變占比最高（13例，占30.23%），其次為外顯子18突變（12例，占27.91%）和外顯子 20突變（7例，占16.28%）。不同臨床病理特征患者NKRAS基因突變發生率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。EGFR基因突變中，腺癌基因突變率較非腺癌高，女性基因突變率較男性高，差異有統計學意義（P<0.05）;其余病理特征與EGFR基因突變無關，差異無統計學意義（P>0.05）。結論? NSCLC患者腫瘤組織中KRAS基因突變率較低，EGFR基因突變率較高且與患者病理類型、性別無關。

關鍵詞：非小細胞肺癌;鼠Kirsten肉瘤病毒致癌基因;表皮生長因子受體;基因突變

中圖分類號：R36? ? 文獻標識碼：A? ? 文章編號：1009-8011（2022）-3-0121-03

非小細胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌常見類型之一，早期缺乏特異性癥狀，約60%患者確診時病情已進展為晚期，盡管放、化療等綜合治療手段明顯改進，但5年生存率仍不足20%[1-2]。近年來，分子靶向藥逐漸應用于臨床，患者生存時間可獲得一定的延長。表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）上外顯子18、19位點突變會對其三磷酸結構造成不良影響，致使EGFR受體結合能力進一步提高，提高免疫靶向治療效果，而20位點的突變可造成ATP結合酶活性改變，影響癌細胞攝取分子靶向藥物的能力，相應提高癌細胞抵抗EGFR絡氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）的能力[3]。鼠類肉瘤病毒致癌基因（KRAS）突變可對下游GTP酶結合能力造成一定影響，干擾腫瘤信號通路激活，上皮細胞增殖能力明顯提高，影響免疫靶向療效[4]。本研究分析NSCLC患者腫瘤組織中KRAS、EGFR基因突變及臨床意義，為臨床靶向治療提供參考。報告如下。

1? 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年1月～2021年8月南陽醫專第一附屬醫院病理科因活檢穿刺、手術切除和會診的NSCLC標本128份。其中，男性78例，女性50例;年齡28～79歲，平均年齡（58.65±2.14）歲;非腺癌31例，腺癌97例;有吸煙史67例，無吸煙史61例。

1.2 方法

上皮細胞以組織研磨法獲取，加入的細胞裂解液TRIZOL（生產企業：上海聯邁生物工程有限公司，批號：20181221），用LD5-2A型臺式低速離心機（生產企業：北京醫用離心機廠）以10 000 r/min轉速離心5 min獲取上清液。在1 mL TRIZOL試劑裂解樣品內加入0.2 mL三氯甲烷，用無酶的RNA沖洗液在4 ℃環境下洗滌，以10 000 r/min轉速離心5 min，獲取RNA。將逆轉錄酶加入后，孵育60 min，溫度為37 ℃，生成cDNA。上述操作完成后，實施PCR產物擴增，設置反應：2 min 93 ℃、1 min 93 ℃、2 min 55 ℃，RT-PCR循環共40個。在相應的位點用mtltipical檢測試劑盒實施單堿基的序列檢測，購買于南京博奧生物檢測公司。用 ABI1310實施PCR跑膠電泳，用GENEMAPPER軟件實施對比分析，兩者均購自美國Life Technologies公司。

1.3 觀察指標

①統計NSCLC患者腫瘤組織中KRAS、EGFR基因突變現狀。②分析NSCLC患者的EGFR、KRAS基因突變與其大體類型、性別、腫瘤直徑、分化程度、病理類型、淋巴結轉移、TNM分期、吸煙史及年齡等臨床病理特征間的關系。

1.4? 統計學分析

采用SPSS 21.0統計學軟件分析數據，計量資料用（x±s）表示，用t檢驗;計數資料以[n（%）]表示，用χ2檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2? 結果

2.1? EGFR、KRAS基因突變情況

128例NSCLC患者中檢出3例（占2.34%）KRAS基因突變，其中G12A突變、外顯子3Q61H和2G12C突變各1例;檢出EGFR基因突變43例（占33.59%），其中外顯子19突變占比最高（13例，占30.23%），其次為外顯子18突變（12例，占27.91%）和外顯子 20突變（7例，占16.28%）。見表1。

2.2? NSCLC患者各臨床病理特征與EGFR、KRAS基因突變關系分析

不同臨床病理特征患者NKRAS基因突變發生率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。EGFR基因突變中，腺癌基因突變率較非腺癌高，女性基因突變率較男性高，差異有統計學意義（P<0.05）;其余病理特征與EGFR基因突變無關，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

3? 討論

NSCLC發病率會受到多種病理因素影響，促使肺泡上皮細胞異常分裂而明顯升高，此類患者預后較差，5年生存率低[5]。目前，靶向性藥物逐漸被應用于NSCLC的治療中，其與靶向性受體相結合而拮抗腫瘤細胞的擴增或增殖，使癌細胞DNA復制速度下降，提高整體治療效果[6]。但EGFR-TKIs治療后仍有部分患者會出現耐藥的情況，而EGFR外顯子基因突變直接影響其免疫靶向治療效果[7]。

EGFR屬于跨膜蛋白，當其結合配體后會引起重要的構象變化，受體內的二聚環結構顯露，引起自身磷酸化而對下游信號轉導，影響癌細胞增殖、轉移等病理過程[8]。EGFR突變點多位于細胞內核轉錄區域的外顯子上，多位于18～24外顯子間，故EGFR的激活與耐藥突變也集中于該區域內。本研究檢出43例EGFR基因突變，其中外顯子19突變占比最高，其次為外顯子18、20突變，提示對于此類患者使用免疫靶向治療敏感性較高;EGFR基因突變中，腺癌基因突變率較非腺癌高，女性基因突變率較男性高，提示女性、腺癌會影響EGFR基因，可能與女性體內性激素、腺體內細胞EGFR基因保守程度低有關，具體機制不十分清楚，仍需深入研究。

KRAS基因突變以位移突變和點突變有關，相應突變位點改變會干擾GTP酶的結合，激活癌細胞內信號通路，降低靶向性藥物治療抵抗性[9]。本研究中，128例NSCLC患者中檢出KRAS基因突變3例，其中G12A突變、外顯子3Q61H和2G12C突變各1例，提示上述突變點可能會影響NSCLC病情。KRAS基因突變會影響腫瘤細胞核轉錄基因活性，致使其自我擴增干細胞特性改變，改變患者臨床結局。G12A或G12C改變可激活腫瘤細胞內GTP依賴性蛋白激酶，進一步提升三磷酸腺苷激活程度，增加癌細胞增殖與擴散風險，影響患者臨床結局。本研究結果顯示，KRAS基因突變與NSCLC患者各臨床病理特征無關，提示KRAS基因突變與患者臨床特征并無關系。

綜上所述，NSCLC患者腫瘤組織中KRAS基因突變率較低，EGFR基因突變率較高，且與患者病理類型、性別無關。

參考文獻

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