四平地區鵝致病性大腸桿菌實驗室耐藥性分析

吳丹丹

吉林省梨樹縣獸醫服務中心，吉林梨樹 136500

近年來，由于肉鵝、蛋鵝市場行情較好，養殖前期投入不高，門檻較低，農民養殖的積極性較高，四平地區商品鵝養殖量大幅增加。隨著養殖密度和養殖量的增加，傳染病的發生成為制約養鵝發展的一個主要因素。本地農民養鵝的一個主要特點就是養殖圈舍簡陋，養殖環境較差，養殖密度較大，導致傳染病不斷發生，增加養殖成本和養殖風險。大腸桿菌病是近幾年在本地區流行較嚴重的傳染病，各種日齡的鵝都有發生，20日齡以內發病較嚴重，死亡較大，成年鵝也有發生，一般為零星死亡或和其它傳染病繼發。臨床中，同一抗菌藥物對不同種類的病原菌敏感性不同，同一種病原菌的不同菌株對藥物的敏感性各不相同，藥敏試驗是在實驗室中篩選對致病菌敏感的抗菌藥物的一種體外抑菌實驗，臨床中可以指導實踐用藥。筆者通過對四平地區鵝致病性大腸桿菌實驗室耐藥性分析，總結出其耐藥規律和用藥防治措施，指導實踐。

1 樣品采集

臨床剖檢過程中，無菌采集病死鵝肝臟、心臟，置于自封采樣袋中，按采集先后順序標號，備注采樣時間和地點，當天不能送檢的要至于-15 ℃冰箱冷凍保存，采樣要求嚴格按照無菌操作進行。筆者在臨床中采集樣品65份，各地區比例見表1。

表1 各縣區采樣數量表

2 實驗材料

普通營養瓊脂培養基、麥康凱培養基、酒精燈、接種環、打孔器、廣口瓶、定性濾紙。

3 實驗步驟

3.1 藥敏片的制備

用打孔器將定性濾紙打成直徑為6 mm左右的圓形紙片，將打好的藥敏片進行篩選，保留完整的，棄掉殘次品，將挑選好的藥敏片裝入廣口瓶，用牛皮紙封口扎緊，放入烘干箱中烘干消毒。

3.2 藥物溶液配制

選擇正規廠家有批準文號的獸藥產品，安普霉素、金霉素、阿莫西林、新霉素、粘桿菌素、氨芐西林、氟苯尼考、恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶鈉、鹽酸多西環素、林可大觀霉素，上述藥物按照治療濃度配置藥物溶液。配好后裝入事先準備好刷洗干凈的青霉素小藥瓶中備用，瓶身貼好防水標簽，標明藥物名稱、含量、配置時間。

3.3 培養基的制備

在化學試劑商店購買成品普通瓊脂培養基和麥康凱培養基原料，按照說明操作，在培養皿中制成培養基。

3.4 細菌培養

在無菌操作臺中，取小塊病料，用手術剪剪開組織切面，用鑷子夾住病料，均勻涂于麥康凱培養基表面，注意不要戳破培養基表面。放入37 ℃溫箱，培養24 h，取出后可見培養基上長出粉紅色圓形不規則菌落。在無菌操作臺中，用酒精燈火焰消毒接種環，然后在麥康凱培養基上挑取適量菌落，以劃線方式將細菌涂布到普通瓊脂培養基上，直至細菌均勻密布于平皿。

3.5 放入藥敏片

將烘干好的濾紙片浸入藥物溶液中，完全浸透后用鑷子輕輕貼于培養基表面，藥敏片按梅花形擺放，外圍6個，中間1個，每個藥敏片的間距要相等，在培養皿外做好標記，記錄好每個藥敏片所代表的藥物。上述步驟操作好后至于37 ℃溫箱培養24 h。

3.6 結果判定

24 h后取出觀察結果，按照抑菌環大小判斷藥物敏感性，具體可以用尺子測量抑菌環大小，具體情況見表2。

表2 藥敏試驗結果 單位：mm

4 結果分析

對上面的實驗結果進行分析，得出安普霉素、粘桿菌素、氟苯尼考、磺胺間甲氧嘧啶鈉、林可大觀霉素幾種藥物對近段時間四平地區鵝大腸桿菌敏感，臨床治療效果較好，建議臨床中使用上述幾種高敏藥物。

5 討論

藥敏試驗是獸醫臨床中應用較為廣泛的一種實驗室輔助手段，可以為臨床獸醫提供較為準確的用藥指導。但是由于操作手法和實驗中的一些不確定因素，導致藥敏試驗也存在一定誤差和弊端。一是實驗過程是在動物體外的一種抑菌實驗，所以受藥物的吸收途徑、藥物在體內的利用率等因素影響，實驗結果存在一定的誤差；二是實驗中藥物溶液的配置時間也可影響實驗結果；三是藥敏試驗需要一定的時間才能完成，所以在臨床中不能完全依靠實驗結果指導用藥，要根據動物的發病情況，考慮邊治療邊等結果的方式進行，防止病情發展造成嚴重的經濟損失。

目前市場上在售的抗生素類藥物種類較多，如果沒有藥敏試驗，可能會憑獸醫或養殖戶的經驗進行投藥治療，治療效果不能很好保障。藥敏試驗的應用和普及，為臨床治療提供了用藥選擇，減少了治療藥物投入，為養殖提高利潤，增加了農民收入，是一項實用技術。規模化養殖集團可以自建獸醫室開展藥敏試驗，散養戶可以委托鄉鎮獸醫站或縣級疫控中心等單位開展藥敏試驗，指導臨床用藥。臨床中還出現過藥敏試驗結果沒有高敏藥物的現象，一般可以選擇兩種或兩種以上中敏藥物聯合用藥，聯合用藥一定要遵循聯合用藥規則，否則可能引起用藥效果減弱或藥物出現拮抗現象，臨床中一定要避免此類現象的出現。聯合用藥可以起到一加一大于二的效果，兩種藥物相互增效，使藥物殺菌效果達到最大。