紅芪多糖、紅芪黃酮和紅芪皂苷抗博來霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化的作用

王 藝， 張 毅， 李 娟， 李雪燕， 劉永琦,2， 蘇 韞， 藺興遙,2*， 李金田，2*

(1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2.敦煌醫(yī)學(xué)與轉(zhuǎn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000)

間質(zhì)性肺疾病是一組主要累及肺間質(zhì)、肺泡和細(xì)支氣管的肺部彌漫性疾病，其中特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化疾病是較常見的類型[1]。該病發(fā)病機(jī)制仍未明確[2]，臨床多表現(xiàn)為通氣功能障礙及進(jìn)行性的呼吸困難[3]，伴有刺激性干咳，雙肺聞及Velcro啰音[4-5]，常伴有杵狀指(趾)，胸部X線示雙肺彌漫性網(wǎng)狀陰影，肺功能為限制性通氣功能障礙[6]。病情一般進(jìn)行性發(fā)展，最終因呼吸衰竭而死亡[7]。近年來，該病的發(fā)病率逐年上升[8]，預(yù)后差，病死率高[9]。研究結(jié)果顯示，肺間質(zhì)纖維化患者年生存率低于50%，十年生存率低于30%[10]。目前，臨床上無特效療法,以糖皮質(zhì)激素、細(xì)胞毒類藥物、非特異性抗炎藥為主，僅在疾病早期或纖維化活動(dòng)期可收到一定療效，其不良反應(yīng)明顯，臨床有效率低[11]。中醫(yī)學(xué)多將其歸為肺脹、肺萎、肺痹等范疇。中醫(yī)藥治療以其不良反應(yīng)小、無耐藥性和藥品依賴性等優(yōu)點(diǎn)，在治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化上具有獨(dú)特優(yōu)勢[11-14]。本實(shí)驗(yàn)以博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化模型，以醋酸潑尼松片為陽性對(duì)照藥，通過對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠的一般狀態(tài)及肺系數(shù)，體質(zhì)量，脾胸指數(shù)，肺組織中HA、LN、HYP水平，T細(xì)胞亞群，大鼠形態(tài)，HE染色及Masson觀察等指標(biāo)，探討紅芪有效部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化的防治作用及其機(jī)制，篩選紅芪最佳有效部位，為臨床防治特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材 中藥紅芪購于定西市隴西藥材市場，經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院楊錫倉主任藥師、甘肅省藥品檢驗(yàn)所朱俊儒主任藥師鑒定為豆科植物多序巖黃芪HedysarumpolybotrysHand. - Mazz. D的干燥根。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)Wistar大鼠144只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(甘)2004-0006-0001588，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(甘)2004-0006-0000284。SPF級(jí)常規(guī)飼養(yǎng)，充足飼料喂養(yǎng)，飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供，自由飲水經(jīng)MF-RO-10型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水處理器，由甘肅中醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，預(yù)備飼養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 試劑與藥物 黃芪甲苷對(duì)照品(成都普思生物科技股份有限公司，批號(hào)PS010428)；蘆丁對(duì)照品(批號(hào)100080-201610)、葡萄糖對(duì)照品(批號(hào)110833-201205)均購自中國食品藥品檢定研究院；醋酸潑尼松片(5 mg/片，浙江仙琚制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H33021207)。注射用鹽酸博來霉素(海正輝瑞制藥有限公司，批號(hào)110424)；戊巴比妥鈉(北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)101021)；羧甲基纖維素鈉(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20101209)；明質(zhì)酸(HA)免疫放射免疫分析藥盒(批號(hào)111220)、層黏連蛋白(LN)放射免疫分析藥盒(批號(hào)111220)均購自北京北方生物技術(shù)研究所；羥脯氨酸(HYP)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20111210)；CD3-FITC試劑盒、CD4-PE試劑盒、CD8-PE均購自杭州聯(lián)科生物技術(shù)有限公司。95%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚均為分析純。

2 方法

2.1 紅芪各有效部位的提取分離

2.1.1 紅芪總黃酮 取紅芪藥材，潤濕后切制成厚度為2～3 mm的飲片，晾干，稱取6.5 kg，加入70%乙醇，回流提取3次，每次1 h，第1次加8倍量的乙醇，后2次加6倍量乙醇，合并3次提取液，濾過(藥渣用于提取分離總多糖)，濾液靜置24 h，濾去沉淀，濾液減壓回收乙醇至無醇味，放冷，用蒸餾水稀釋至1∶2。然后上聚酰胺柱，上柱液質(zhì)量濃度為1 g/mL；上柱速度為2 BV/h。然后水洗，再用70%乙醇洗，洗脫液回收乙醇后，用等體積水飽和的乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯，殘留物減壓干燥，得紅芪總黃酮。

2.1.2 紅芪總皂苷 將“2.1.1”項(xiàng)下上完聚酰胺柱的流出液繼續(xù)上D-101大孔樹脂，上柱液質(zhì)量濃度為1 g/mL，上柱速度為2 BV/h，然后水洗，再用70%乙醇洗，洗脫液回收乙醇后，用等體積水飽和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇，殘留物減壓干燥，得紅芪總皂苷。

2.1.3 紅芪總多糖 將“2.1.1”項(xiàng)下乙醇提取后的紅芪藥渣揮干乙醇后加水煎煮3次，每次1 h，第1次加8倍量的水，后2次加6倍量水，合并3次水煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15(20 ℃)的浸膏，離心分離，棄去沉淀，上清液攪拌下緩緩加入95%乙醇，使溶液的含醇量達(dá)到70%，充分?jǐn)噭颍荛]，靜置24 h，濾過，沉淀用適量70%乙醇洗滌沉淀2次后，用蒸餾水溶解，離心分離(2 500 r/min，15 min)，棄去沉淀，上清液攪拌下緩緩加入95%乙醇，使溶液的含醇量達(dá)到70%，充分?jǐn)噭颍荛]，靜置24 h，濾過離心，沉淀用70%乙醇洗滌沉淀2次后，50 ℃以下減壓干燥。干燥物用水溶解，將氯仿-正丁醇(5∶1)按0.2倍體積加入干燥物的水溶液中，萃取(1倍體積，5次)除去多糖中的蛋白，將脫蛋白后的多糖水溶液加入活性炭加熱回流0.5 h(加入3%活性炭)，趁熱過濾，濾液蒸干，殘?jiān)鼫p壓干燥，得紅芪總多糖。

2.2 紅芪有效部位的含量測定 分別選取葡萄糖、蘆丁、黃芪甲苷作為對(duì)照品，利用紫外分光光度計(jì)測定紅芪中總黃酮、總皂苷和總多糖含量。分別繪制葡萄糖、蘆丁、黃芪甲苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線；通過精密度試驗(yàn)得紅芪總多糖RSD為2.92%，紅芪總黃酮RSD為2.52%，紅芪總皂苷RSD為3.08%；穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明1 h內(nèi)紅芪中總黃酮、總皂苷和總多糖顯色均穩(wěn)定，可進(jìn)行含量測定；回收率測定得葡萄糖平均回收率為98.3%，RSD為2.19%(n=5)，蘆丁平均回收率為95.8%，RSD為2.96%(n=5)，黃芪甲苷平均回收率為92.5%，RSD為3.21%(n=5)；樣品含量測定得提取部位中總多糖、總黃酮、總皂苷的含量分別為0.718、0.526、0.517 g/g，總多糖、總黃酮、總皂苷的得率分別為71.8%、52.6%、51.7%。

2.3 紅芪有效部位抗肺間質(zhì)纖維化作用的篩選實(shí)驗(yàn)

2.3.1 動(dòng)物分組 將144只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型對(duì)照組，陽性藥對(duì)照組(強(qiáng)的松組)，紅芪多糖、黃酮、皂苷高、中、低劑量組，共12組，每組12只。統(tǒng)一造模后，按性別分籠飼養(yǎng)，3%苦味酸溶液標(biāo)記編號(hào)。

2.3.2 動(dòng)物模型制備 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，待夾尾無疼痛反應(yīng)后，將大鼠仰臥位固定于鼠板上，固定四肢及頭部，使頭部略向后仰。助手橡皮筋勒在大鼠上齒和下齒拉開大鼠口腔，術(shù)者左手持小動(dòng)物專用喉鏡，伸入大鼠口腔內(nèi)，輕輕頂起舌根，暴露聲門，趁大鼠吸氣瞬間，右手將自制的氣管套管(一次性使用靜脈留置針22 G×25 mm/Y-G，剪去針頭部分，余下塑料膠管的長度以6～7 cm為宜，用細(xì)鐵絲把尾端做成圓環(huán)狀插入膠管內(nèi)作為針芯，長度與塑料膠管相等，不可超出膠管，以免刺傷大鼠喉部)順勢插入大鼠氣管內(nèi)。預(yù)先在套管內(nèi)注入2～3節(jié)小水柱，若套管內(nèi)水柱隨大鼠呼吸頻率有節(jié)奏的上下運(yùn)動(dòng)，說明插入氣管。迅速拔出針芯，將事先抽好博來霉素(5 mg/kg)的l mL注射器連接在氣管套管上，一次性推入氣管。注入藥物后立即拔出套管，將大鼠直立旋轉(zhuǎn)約1 min，使藥物在肺內(nèi)均勻分布。假手術(shù)組大鼠氣管內(nèi)推注等體積的生理鹽水。待大鼠清醒后，常規(guī)SPF環(huán)境飼養(yǎng)。

2.3.3 給藥方法及劑量 從造模第2天起，進(jìn)行干預(yù)治療，紅芪多糖、黃酮、皂苷各劑量組灌胃相應(yīng)藥物，灌胃藥液以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制，每天給藥1次，連續(xù)28 d，灌胃容量為1 mL/100 g體質(zhì)量；強(qiáng)的松組給予醋酸潑尼松片，給藥劑量為4 mg/kg，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制，灌胃容量為1 mL/100 g體質(zhì)量；假手術(shù)組、模型組分別灌胃等容量的0.5%羧甲基纖維素鈉溶液。

根據(jù)理論及文獻(xiàn)并結(jié)合各組間的可比性原則確定，按照大鼠與人的體表面積折算法，大鼠每天給藥劑量為人臨床等效劑量。根據(jù)6.5 kg紅芪生藥中提取出紅芪多糖、紅芪皂苷、紅芪黃酮的不同含量，本實(shí)驗(yàn)紅芪多糖、皂苷實(shí)際給藥低、中、高劑量分別為15、30、60 mg/kg；紅芪黃酮實(shí)際給藥低、中、高劑量分別為7.5、15、30 mg/kg。

2.3.4 標(biāo)本采集與檢測 所有動(dòng)物均于實(shí)驗(yàn)第28天處死采集標(biāo)本。末次給藥后，各組大鼠禁食不禁水24 h，觀察動(dòng)物一般狀況。對(duì)其進(jìn)行股動(dòng)脈采血，檢測大鼠T細(xì)胞亞群。處死開胸，剝離胸腺及脾進(jìn)行稱定質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)。完整分離出雙肺，仔細(xì)去除周圍結(jié)締組織，經(jīng)生理鹽水洗滌后用濾紙吸干，電子天平稱定肺濕重，計(jì)算肺臟系數(shù)，肺系數(shù)=(肺濕重/體質(zhì)量)×100%。剪取左肺下葉組織約0.8～1 g，以1∶9的比例加生理鹽水進(jìn)行勻漿，勻漿液在4 ℃冷凍離心機(jī)中離心(3 000 r/min，10 min)，棄沉渣取上清，于-20 ℃保存?zhèn)溆茫捎梅派涿庖叻治龇ǎ凑赵噭┖姓f明書進(jìn)行操作，檢測HA、LN水平；通過雙光束紫外/可見分光光度法按照試劑盒說明書步驟檢測肺臟組織HYP水平，由于HYP在氧化劑的作用下所產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物與二甲氨基苯甲醛作用呈現(xiàn)紫紅色，根據(jù)其顏色的深淺可推算出其水平。摘取右肺下葉，用4%多聚甲醛溶液固定1周，常規(guī)石蠟包埋制片，進(jìn)行HE及Masson染色，以觀察肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變。

2.3.5 肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察 肉眼整體觀察肺組織外觀形態(tài)、大小、質(zhì)地、顏色、是否有壞死等，HE染色及Masson染色觀察肺組織形態(tài)變化。

3 結(jié)果

3.1 紅芪不同部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠一般狀況及肺系數(shù)的影響 假手術(shù)組大鼠實(shí)驗(yàn)過程中無死亡，進(jìn)食及精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，皮毛光澤發(fā)亮，體質(zhì)量逐漸增加，呼吸平穩(wěn)；模型組大鼠精神狀態(tài)差，食量及活動(dòng)減少，皮毛稀疏，顏色變黃，失去光澤，多見倒豎現(xiàn)象，拱背蜷縮、反應(yīng)遲鈍、呼吸急促、身體消瘦等；其余各組動(dòng)物在給藥后的情況介于假手術(shù)組和模型組之間。在動(dòng)物氣管插管和麻醉過程中，因操作不當(dāng)，個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)了死亡，故導(dǎo)致樣本量減少。

如表1所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠肺系數(shù)升高(P<0.01)；與模型組比較，紅芪多糖、紅芪皂苷各劑量及紅芪黃酮低、中劑量組大鼠肺系數(shù)均降低(P<0.05，P<0.01)。

表1 各組大鼠肺系數(shù)

3.2 紅芪不同部位對(duì)大鼠第0、7、14、28天體質(zhì)量的影響 造模前各組大鼠體質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)，造模后模型組大鼠體質(zhì)量在第7、14、28天呈下降趨勢，與假手術(shù)組比較均無明顯變化(P>0.05)；與模型組比較，紅芪多糖高劑量組大鼠體質(zhì)量在第7、14天增加(P<0.01)，紅芪多糖低、中劑量組大鼠體質(zhì)量在第14天增加(P<0.05)，其余各組均無明顯變化(P>0.05)，見表2。

表2 各組大鼠第0、7、14、28天體質(zhì)量的影響

3.3 紅芪不同部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠脾、胸腺指數(shù)的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脾、胸腺指數(shù)均有降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；與模型組比較，各給藥組大鼠脾、胸腺指數(shù)均有所變化，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表3。

表3 對(duì)肺間質(zhì)纖維化模型大鼠脾、胸腺指數(shù)比較

3.4 紅芪不同部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠肺組織中HA、LN水平的影響 如表4所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠肺組織中HA、LN水平升高(P<0.05)；與模型組比較，紅芪多糖高劑量、紅芪黃酮各劑量和紅芪皂苷高劑量組大鼠肺組織中HA水平均降低(P<0.05，P<0.01)，紅芪多糖高劑量組、紅芪黃酮和紅芪皂苷低、中劑量組鼠肺組織中LN水平均降低(P<0.05，P<0.01)。

表4 對(duì)肺間質(zhì)纖維化模型大鼠肺組織中HA、LN水平的影響

3.5 紅芪不同部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠肺組織中HYP水平的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠肺組織中HYP水平升高(P<0.01)；與模型組比較，紅芪多糖高劑量組和紅芪黃酮各劑量組大鼠肺組織中HYP水平均降低(P<0.05，P<0.01)，見表5。

表5 各組鼠肺組織中HYP水平

3.6 紅芪不同部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠T細(xì)胞亞群的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠CD3+CD4+CD8-細(xì)胞占比、CD4+/CD8+比值降低(P<0.05)，CD3+CD4-CD8+細(xì)胞占比升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；與模型組比較，紅芪黃酮低劑量組大鼠CD3+CD4+CD8-細(xì)胞占比增加(P<0.01)，紅芪黃酮各劑量組大鼠CD4+/CD8+比值升高(P<0.05)，各治療組大鼠CD3+CD4-CD8+細(xì)胞占比均無明顯變化(P>0.05)，見表6。

3.7 紅芪不同部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

3.7.1 大體形態(tài)觀察 假手術(shù)組大鼠雙肺呈淡粉色，表面光滑，質(zhì)地均勻，彈性好；模型組大鼠肺組織顏色暗紅，表面粗糙不平，有的可見小片狀、凹凸不平的蒼白灶，體積略縮小，質(zhì)地變硬，彈性減弱；其余各組大鼠肺組織顏色深淺不一，多數(shù)略暗，表面稍粗糙，觸之彈性尚好，體積或有縮小或有變大。

3.7.2 HE染色觀察 假手術(shù)組大鼠肺組織支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)均正常，支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，支氣管腔內(nèi)偶有少量分泌物，沒有水腫和增生現(xiàn)象，肺泡間隔無增厚，無明顯膠原沉積，肺泡腔可見少量炎細(xì)胞浸潤，肺泡壁薄，肺泡腔完整無擴(kuò)大，肺泡腔內(nèi)沒有滲出，無肺萎縮及血管壁增厚；模型組大鼠肺組織中肺泡破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，多數(shù)肺泡閉鎖、裂隙、萎陷，部分融合成大泡狀，肺泡腔及間質(zhì)內(nèi)有中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的滲出，膠原纖維大量增殖，肺間隔明顯增寬增厚，間質(zhì)內(nèi)可見大片狀或灶狀彌漫性膠原組織沉積，病變范圍大于全肺的50%，符合肺纖維化動(dòng)物模型的要求；強(qiáng)的松組大鼠肺組織中肺間隔稍增寬，有成纖維細(xì)胞增生，膠原纖維較少，肺泡炎及肺纖維化程度均較模型組減輕，炎性細(xì)胞浸潤較模型組減少，病變范圍占全肺的21%～50%；各治療組大鼠肺組織中肺泡炎及肺纖維化程度與模型組比較均明顯減輕，肺泡腔未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤，肺間隔略增寬，間質(zhì)內(nèi)可見不同程度小灶狀膠原組織沉積，部分肺泡融合，結(jié)構(gòu)紊亂，病變范圍占全肺的21%～50%。其中紅芪黃酮低劑量組大鼠肺組織肺泡炎癥相對(duì)較輕，見圖1。

表6 各組大鼠血液中T細(xì)胞亞群的變化

圖1 各組大鼠肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察(HE，×40)

3.7.3 Masson染色觀察 肺組織切片經(jīng)Masson染色后顯示，膠原纖維呈現(xiàn)亮綠色，肌肉、胞漿呈現(xiàn)紅色，胞核呈現(xiàn)藍(lán)黑色。假手術(shù)組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡隔不增厚，沒有纖維化表現(xiàn)，肺泡壁薄，大小正常，肺泡腔內(nèi)有少量炎性細(xì)胞滲出，支氣管形態(tài)正常，上皮結(jié)構(gòu)完整，沒有水腫和增生現(xiàn)象；模型組大鼠肺泡萎陷明顯，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡壁破壞，肺泡腔及間質(zhì)內(nèi)有炎癥細(xì)胞的滲出，可見有紅細(xì)胞，氣道周圍有膠原纖維環(huán)繞，纖維素相互交織成網(wǎng)狀，肺泡隔明顯增厚，肺間質(zhì)可見大量的膠原纖維增生、沉積，出現(xiàn)條索狀、片狀、灶狀的纖維化區(qū)域；強(qiáng)的松組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)較清晰，肺泡隔增厚，肺泡腔及間質(zhì)內(nèi)可見膠原纖維增生及炎性細(xì)胞浸潤；各治療組大鼠肺纖維化程度與模型組比較均有明顯減輕，肺間隔略增寬，間質(zhì)內(nèi)可見小灶狀膠原纖維沉積，病變范圍較小，其中紅芪黃酮中劑量組大鼠肺組織膠原纖維沉積較模型組明顯減少，見圖2。

圖2 各組大鼠肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察(Masson，×40)

4 討論

本研究選取多指標(biāo)考察紅芪活性部位對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠的影響，并篩選出最佳活性部位。研究發(fā)現(xiàn)紅芪活性部位對(duì)模型組大鼠的精神狀態(tài)、食量、活動(dòng)量、皮毛光澤等均具有一定程度的改善；與模型組比較，紅芪黃酮低、中劑量組和紅芪皂苷低劑量組大鼠肺系數(shù)均降低(P<0.01)。觀察大鼠第0、7、14、28天體質(zhì)量的變化，發(fā)現(xiàn)紅芪多糖高劑量組大鼠體質(zhì)量在第7、14天升高(P<0.01)。觀察大鼠脾、胸腺指數(shù)的影響發(fā)現(xiàn)各給藥組大鼠脾、胸腺指數(shù)或有降低或有增高，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用放射免疫分析法觀察大鼠肺組織HA、LN水平發(fā)現(xiàn)，紅芪黃酮低劑量組可同時(shí)降低肺組織中HA、LN水平(P<0.01)。通過雙光束紫外/可見分光光度法檢測肺臟組織HYP水平，發(fā)現(xiàn)紅芪黃酮個(gè)劑量可降低HYP水平(P<0.01)。觀察大鼠T細(xì)胞亞群的影響發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，紅芪黃酮低劑量組大鼠CD3+CD4+CD8-細(xì)胞占比增加(P<0.01)，紅芪黃酮各劑量組大鼠CD4+/CD8+比值升高(P<0.05)。HE染色觀察發(fā)現(xiàn)各給藥組中肺泡炎及肺纖維化程度與模型組比較均有明顯減輕，其中紅芪黃酮低劑量組效果最好。Masson染色觀察發(fā)現(xiàn)各給藥組肺纖維化程度與模型組比較均有明顯減輕，肺間隔略增寬，間質(zhì)內(nèi)可見小灶狀膠原纖維沉積，病變范圍較小。

綜上所述，紅芪提取物對(duì)肺間質(zhì)肺纖維化大鼠各項(xiàng)指標(biāo)具有一定的改善作用，其中紅芪黃酮的藥效作用均優(yōu)于紅芪多糖和紅芪皂苷。近年來中醫(yī)學(xué)對(duì)于肺間質(zhì)纖維化的病因病機(jī)、治法治則、臨床治療等研究較多，在辨證論治中顯示出一定優(yōu)勢[15]。不管是單味藥還是多味復(fù)方藥，實(shí)際發(fā)揮藥效作用的本質(zhì)是其中的化學(xué)成份。但是，中藥一般是動(dòng)植物的組成部分熬制成液體，其含有的有效部位有數(shù)十種甚至數(shù)百種之多，而且這些有效部位之間有著復(fù)雜且廣泛的相互作用。因此，對(duì)于紅芪多糖、紅芪皂苷和紅芪黃酮三者之間的協(xié)同作用或紅芪黃酮干預(yù)肺間質(zhì)纖維化大鼠的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步深入探究。