血清人類可溶性程序性死亡配體-1、血管內皮細胞生長因子對食管鱗癌的預后評估價值

朱曼，郭曉鋒，魏昕，周福有

［安陽市腫瘤醫院（河南科技大學第四附屬醫院）1.檢驗科；2.胸外科，河南 安陽455000］

食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一，河南省安陽地區是食管鱗癌的高發區［1］，食管鱗癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）嚴重威脅著當地人民的生命健康。近年來，食管鱗癌的診療手段不斷革新，胃鏡和病理檢查能為腫瘤的診斷提供強有力的依據，但是仍有相當一部分患者抵觸胃鏡檢查，延誤病情，就診時已錯過最佳診療時機。血液腫瘤標志物作為一種補充手段，創傷小，更容易被患者接受，可以為臨床醫生診斷腫瘤和治療療效、預后判斷提供依據。因此，發現新的腫瘤標志物和挖掘其新用途勢在必行。本文將現階段研究熱點人類可溶性程序性死亡配體-1（soluble programmed death ligand-1，sPD-L1）和血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）相結合，探究其對ESCC 預后的評估價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016 年11 月至2017 年2 月安陽市腫瘤醫院經術后病理確診為ESCC 的患者105 例，其中男71 例，女34 例；年齡60～70，平均（64.50±5.57）歲。另選健康體檢者35 例作為對照，其中男31 例，女4 例；年齡60～70，平均（65.77±5.58）歲。ESCC 組患者TNM 分期參照UICC/AJCC 2017 年第八版食管癌TNM 分期標準［2］，其中Ⅰ+Ⅱ期49 例，Ⅲ+Ⅳ期56 例；有家族史者49例，無家族史者56 例；有淋巴結轉移者53 例，無淋巴結轉移者52 例；腫瘤直徑＜3.5 cm 者42例，腫瘤直徑≥3.5 cm 者63 例。所有研究對象均排除內分泌、免疫及代謝疾病。

對所有患者采用電話和門診的方式隨訪，所有患者術后1 個月、3 個月、半年各隨訪一次，之后半年隨訪一次，隨訪截止日期2020 年4 月，生存時間按“個月”計算。

本實驗經安陽市腫瘤醫院倫理學委員會批準，所有研究對象知曉實驗內容，并簽署受試者知情同意書。

1.2 方法

采集受試者治療前空腹靜脈血3 mL，室溫靜置30 min，離心分離血清后檢測。sPD-L1 和VEGF 均采用酶標測定儀（LabSystems Multiskan MS-352，芬蘭雷勃公司）檢測。sPD-L1 試劑由上海喬羽生物科技有限公司提供，VEGF 試劑由北京健平金星生物科技有限公司提供。所有操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件進行數據分析及圖表制作。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩兩比較采用t檢驗；計數資料以百分率（%）表示，比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析三指標對ESCC 患者長期死亡率的預測價值。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ESCC 組、正常對照兩組血清sPD-L1、VEGF 水平比較

ESCC 組血清sPD-L1、VEGF 的水平與正常對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 ESCC 組、正常對照兩組血清sPD-L1、VEGF 水平比較（±s，pg/mL）

表1 ESCC 組、正常對照兩組血清sPD-L1、VEGF 水平比較（±s，pg/mL）

2.2 患者臨床病理學特征與血清sPD-L1、VEGF水平的關系

按性別、年齡、TNM 分期及腫瘤直徑分組，患者血清sPD-L1、VEGF 水平的比較差異無統計學意義（P＞0.05）。有家族史的患者的血清VEGF的水平高于沒有家族史的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。有淋巴結轉移與無淋巴結轉移的患者血清sPD-L1、VEGF 的水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 血清sPD-L1、VEGF 水平與患者生存時間的關系

生存時間＜3 年的患者有46 例，生存時間＞3 年的患者有59 例，三年生存率為56.19%。生存時間＜3 年的患者的血清sPD-L1、VEGF 水平高于生存時間＞3 年的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 血清sPD-L1、VEGF 預測ESCC 患者3 年內死亡的ROC 曲線

ROC 曲線結果顯示，血清sPD-L1、VEGF 預測ESCC 患者3 年內死亡的AUC 分別為0.820、0.733，兩者聯合預測3 年內死亡的曲線下面積（AUC）為0.842。其敏感性為84.7%，特異性為78.3%。見圖1。

表2 患者臨床病理學特征與血清sPD-L1、VEGF 水平的關系（±s，pg/mL）

表2 患者臨床病理學特征與血清sPD-L1、VEGF 水平的關系（±s，pg/mL）

表3 血清sPD-L1、VEGF 水平與患者生存時間的關系（±s，pg/mL）

表3 血清sPD-L1、VEGF 水平與患者生存時間的關系（±s，pg/mL）

圖1 血清sPD-L1、VEGF 預測ESCC 患者3 年內死亡的ROC 曲線

3 討論

食管鱗癌是一種預后較差的惡性腫瘤，其5 年相對生存率為20.9%，1 年、3 年和5 年觀察生存率分別為54.0%、25.5%和18.4%［3］。近些年由于生活水平的提高，食管鱗癌的發病率有下降趨勢［4］，但依然是威脅人類健康的惡性因素。目前治療食管鱗癌的方式以手術為主［5］，放化療輔助。現階段的研究仍未找到食管鱗癌的敏感靶點，免疫治療舉步維艱。

PD-1/PD-L1 通路是現階段的研究熱點，腫瘤細胞表面高表達PD-L1 與T 細胞表面表達的PD-1相結合，阻礙T 細胞的分化，使T 細胞停留在G0期，失去了殺傷腫瘤細胞的功效，從而導致腫瘤的免疫逃逸。PD-L1 在體內免疫系統中不光以細胞膜型（mPD-L1）的形式存在，還有可溶性（sPD-L1）的形式存在［6］。CHEN 等［7］研究發現，血清sPD-L1的水平與組織中mPD-L1 的表達強度正相關。施敏驊等［8］發現mPD-L1 和sPD-L1 有相似的生物學功能，并且都能與T 細胞表面PD-1 受體結合，負向調控免疫系統。sPD-L1 相較于mPD-L1 取材方便，更容易在臨床作為一項腫瘤標志物開展。現階段研究報道，sPD-L1 與多種腫瘤的發生發展、治療療效和預后相關［9-13］。

在實體腫瘤的生長和轉移過程中，VEGF 發揮重要作用。VEGF 是垂體濾泡細胞分泌的糖蛋白［14］，能夠促進內皮細胞增殖和新血管形成，同時還可以改變細胞外基質［15］，進一步促進腫瘤細胞的轉移。近年來，血清VEGF 的檢測在臨床上廣泛開展，其在腫瘤的療效判斷和預后方面具有舉足輕重的作用。

本研究結果顯示，ESCC 組血清sPD-L1、VEGF 的水平明顯高于正常對照組，這和食管鱗癌的發生、發展相關，在腫瘤病灶的長期慢性刺激下，腫瘤細胞或宿主對腫瘤的刺激可合成和分泌特異性蛋白或相關的因子，這些蛋白或因子的水平檢測在腫瘤的診斷、治療和預后判斷上提供輔助信息。有家族史的患者血清VEGF 的水平高于無家族史的患者（P＜0.05），說明VEGF 可能在ESCC 的基因學研究上有一定的價值。有淋巴結轉移與無淋巴結轉移的患者血清sPD-L1、VEGF 的水平比較差異有統計學意義（P＜0.05），說明兩個指標參與了腫瘤的進展過程，是ESCC 潛在的治療相關的生物標志物。生存時間＜3 年的患者為46例，生存時間＞3 年的患者為59 例，三年生存率為56.19%，和其他學者的研究報道［16-17］基本相符。生存時間＜3 年的患者的血清sPD-L1、VEGF 水平高于生存時間＞3 年的患者（P＜0.05）。ROC 曲線結果顯示，血清sPD-L1、VEGF 聯合預測3 年內死亡可能性的價值優于單一預測，表示這兩項指標可以為臨床醫生判斷預后提供參考依據。

綜上所述，血清sPD-L1、VEGF 可以作為食管鱗癌預后判斷的參考依據。但本研究仍舊存在不足之處，主要有以下三點：①本研究是單中心研究，其研究結果需要多中心驗證；②樣本量較少，需要進一步擴大樣本量來證實實驗結果；③現階段這兩項指標的檢測方法為酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法，該方法的干擾因素較多，可能會使實驗結果產生誤差，隨著研究深入和技術革新，發現更精確的檢測方法可以進一步驗證本研究的結果。