肺炎支原體抗體聯合降鈣素原對小兒支原體肺炎感染的診斷價值

許 鋮，路 燕，徐 明，朱美君，趙曉冬，楊小紅

(江蘇省南通市第一人民醫院兒科，江蘇 南通 226001)

肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae，MP)是兒童呼吸道感染的常見病原菌，也是引起肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)的主要病原菌[1]。發熱和咳嗽是其臨床主要表現，難以根據癥狀與其他疾病區分，而MPP若治療不及時可進一步累及皮膚、耳部等肺外病變，并且有些MP會發生耐藥突變，加大治療難度。因此MP的早期診斷和治療對患兒而言具有重要意義。目前，MP診斷主要通過血清學MP-IgM抗體檢測，但其有一定不足之處，往往需感染1周后才能較為準確地檢測，早期檢測漏診率較高。近年來研究發現，降鈣素原(procalcitonin，PCT)在機體發生MP感染時會出現改變，對MP感染的診斷有一定的應用價值[2]。但目前關于PCT診斷MP的報道較少，而MP抗體聯合PCT診斷MP尚未在國內發現相關報道。因此，筆者通過檢測分析MP抗體聯合PCT在小兒MP的診斷價值和肺炎支原體耐藥突變位點，旨在為臨床MP早期診斷和治療提供新的依據。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年2月至2019年12月江蘇省南通市第一人民醫院兒科住院的肺炎支原體肺炎患兒120例作為觀察組，男58例，女62例，年齡1歲5個月～9歲，平均年齡(5.36±1.92)歲。納入標準：①均符合《諸福棠實用兒科學》中對支原體肺炎的診斷標準；②發病3d內入院治療。排除標準：①先天性免疫缺陷或自身免疫性疾病者；②嚴重結核病者；③結締組織疾病者。另選取同期在本院進行體檢的120例健康兒童作為對照組，男56例，女64例，年齡1歲6個月～9歲，平均年齡(5.46±1.86)歲。兩組研究對象性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，家屬對研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1儀器和試劑

Modular Analytics E170型自動電化學發光免疫分析儀購自瑞士羅氏公司，PCT試劑盒購自北京萊博奧科技有限公司，其他試劑均購自生工生物工程(上海)股份有限公司。MP抗體診斷試劑盒購自日本富士瑞必歐株式會社。

1.2.2標本采集及PCT檢測

入院當天或次日清晨抽取空腹靜脈血2mL，置于EDTA-K 2抗凝管，離心機加速離心后，分離血清，置于-80℃冷凍保存，用于PCT檢測，操作嚴格按照試劑盒說明書進行；入院當天或次日清晨、病程第1周、第2周，抽取患兒空腹靜脈血3mL，置于普通生化管中，用于肺炎支原體抗體檢測。

1.2.3 MP抗體被動凝集法檢測

取MP抗體試劑盒，采用被動凝集法檢測血清MP抗體(IgG、IgM、IgA)，嚴格按照說明書進行操作，最后在平板觀測器上讀取凝集圖像。

1.2.4 MP耐藥基因檢測

入院后24h內采用無菌咽拭子采集咽后壁樣本，利用PCR結合Taq-man熒光探針技術進行核酸檢測，檢測結果MP抗體陽性者，采用PCR結合Taq-man熒光探針技術對耐藥突變位點進行檢測，設計23SrRNA基因突變位點引物探針，檢測23SrRNA基因2063、2064位點突變情況(A2063G、A2064G突變是MP耐大環內酯類藥物的主要機制)。

1.3陽性判斷標準

MP抗體判斷以MP-Ab滴度≥1∶160為陽性，PCT判斷以PCT≥0.05ng/mL為陽性，聯合診斷陽性以1個或1個以上的指標陽性為標準。觀察組MP抗體、PCT判斷陽性時為真陽性(TP)，判斷陰性時為假陰性(FN)，對照組MP抗體、PCT判斷陽性時為假陽性(FP)，判斷陰性時為真陰性(TN)。

1.4統計學方法

2結果

2.1觀察組和對照組MP抗原檢查結果比較

觀察組患兒中MP抗體檢查陽性者(MP-Ab滴度≥160)94例(78.33%)，對照組陽性者8例(6.67%)；觀察組患兒中MP抗體檢查顯示陰性者(MP-Ab滴度≤80)26例(21.67%)，對照組陰性者112例(93.33%)，比較發現觀察組陽性率高于對照組，差異有統計學意義(χ2=126.104，P<0.05)，見表1。

表1 觀察組和對照組MP抗原檢查比較[n(%)]Table 1 Comparison of detection results of MP antigen of the children between the observation group and the control group[n(%)]

2.2 PCT檢測結果分析

觀察組PCT水平高于對照組，差異有統計學意義(t=31.882，P<0.05)；觀察組患兒中PCT檢查陽性者89例(74.17%)，對照組陽性者22例(18.33%)；觀察組患兒中PCT檢查陰性者31例(25.83%)，對照組陰性者98例(81.67%)，比較發現觀察組陽性率高于對照組，差異有統計學意義(χ2=75.240，P<0.05)，見表2。

表2 觀察組和對照組PCT水平及檢測結果比較Table 2 Comparison of PCT levels and positive and negative detection rates of the children between the observation group and the control

2.3 MP抗體聯合PCT檢測在小兒支原體肺炎感染中的診斷價值

MP抗體聯合PCT檢測小兒支原體肺炎感染靈敏度為92.50%、準確度為94.58%，顯著高于MP抗體、PCT單一檢測(χ2值分別為9.667、10.401、14.520、28.107，P<0.05)；聯合檢測的特異度為96.67%、陽性預測值為96.52%，顯著高于PCT單一檢測(χ2值分別為13.976、14.815，P<0.05)；聯合檢測的陰性預測值為92.80%，顯著高于MP抗原單一檢測(χ2=7.704，P<0.05)，見表3。

表3 MP抗體聯合PCT檢測在小兒支原體肺炎感染中的診斷價值[%(n/N)]Table 3 Diagnostic value of combined detection of MP antibody with PCT for MPP in children[%(n/N)]

2.4 MP對大環內酯類藥物耐藥檢測

120例患兒經引物探針檢測23SrRNA基因2063、2064位點突變情況，顯示56例(46.67%)存在耐藥基因。

3討論

3.1 MP抗體檢測小兒支原體肺炎感染的診斷價值

MP屬于病毒與細菌之間的一種病原體，能在體外生存和進行DNA復制，對環境要求較低，有氧、無氧均能生長。MP與人體某些組織的抗原相同，產生的抗體會對人體自身免疫造成損害，而且MP可引起葡萄糖發酵，生成乳酸和過氧化物酶，造成組織器官損傷，進一步發展可引起呼吸窘迫或多臟器受累等情況，嚴重影響患兒身體健康[3]。因此為減輕MP對患兒的傷害，避免診斷不及時對治療的延誤，MP感染需盡早確診。目前，臨床最常用的診斷方法有核酸檢測、MP培養及血清學抗體檢測等，其中核酸檢測敏感性較高，時間較快，但易受空氣污染，對檢測實驗室的要求較高；而MP培養是以往確定MP感染的“金標準”，但檢驗周期較長，檢驗條件嚴苛。MP抗體檢測是通過免疫學方法檢測機體中的IgM、IgG等抗體，實用性更好，但仍有一定限制性，常需在感染MP后7～10d才能檢測出。本研究中MP抗體檢查結果顯示，觀察組陽性(MP-Ab滴度≥160)率顯著高于對照組，對MP感染診斷的靈敏度為78.33%、特異度為93.33%、陽性預測值為92.16%、陰性預測值為81.16%、準確度為85.83%，提示MP抗體檢測的靈敏度較差，因此，小兒MP感染的診斷仍需進一步完善。在MP抗體檢測時臨床采集血液標本需把握好最佳時間段，小兒MPP急性期或起病時間較短均無法檢測出抗體陽性，且發病后10～20d內，抗體水平可達到頂峰，抗體種類為IgM早期抗體，后期30d之后再度升高抗體一般為IgG抗體，因此在初期檢查為陰性后仍需進行復查[4]。

3.2 MP抗體聯合PCT檢測小兒支原體肺炎感染的診斷價值

PCT屬于非甾體類抗炎物質，正常情況下血清中PCT含量極低或不存在，但當機體受到病原菌感染時，可在短時間內大量生成，因此，PCT檢測近年來成為一種新興實驗室檢測指標。以往認為PCT可用于鑒別診斷細菌性和非細菌性肺炎，但無法鑒別病毒和肺炎支原體感染。但近年來報道顯示，PCT檢測對支原體肺炎和細菌性肺炎的早期鑒別診斷有益[5]。本研究中PCT檢查結果顯示，觀察組陽性率顯著高于對照組，對MP感染診斷的靈敏度為74.17%、特異度為81.67%、陽性預測值為80.18%、陰性預測值為75.97%、準確度為77.92%，提示PCT雖然對MP感染診斷有一定價值，但價值有限。有學者在關于細菌性肺炎、支原體肺炎和病毒性肺炎患兒研究中表示，PCT在支原體肺炎和病毒性肺炎中差異無統計學意義，但PCT聯合白細胞、C反應蛋白可提高支原體肺炎的診斷率[6]，故推斷PCT與其他診斷方式聯合有提高診斷率的作用。本研究中MP抗體聯合PCT檢測小兒支原體肺炎感染靈敏度為92.50%、準確度為94.58%，顯著高于MP抗體、PCT單一檢測；聯合檢測的特異度為96.67%、陽性預測值為96.52%，顯著高于PCT單一檢測；聯合檢測的陰性預測值為92.80%，顯著高于MP抗原單一檢測。提示MP抗體聯合PCT檢測效能優于單一檢測，同時也能更好的指導臨床正確用藥。

3.3 MP對大環內酯類藥物耐藥性

MPP是由MP感染引起的一種難治性疾病，常規的青霉素等抗菌藥物對其治療效果非常有限。大環內酯類藥物是治療MP的最有效藥物，但有些MP的23SrRNA基因A2063G、A2064G會發生突變，使MP產生耐藥性，治療效果減弱，患兒病程延長，住院時間增加，并發癥發生率升高，不利于MPP的治療[7]。因此為減輕MP耐藥性對治療的影響，可通過明確大環內酯類藥物在MP作用靶點的基因突變，予以針對性治療。本研究中對120例患兒23SrRNA基因2063、2064位點突變情況進行檢測，顯示56例(46.67%)存在耐藥基因，與以往學者研究結果一致[8]。一般認為耐藥性的產生與抗生素作用靶點突變、酶性失活等有關，而服用大環內酯類藥物可能會誘導藥物作用靶點突變，產生耐藥性。

綜上所述，MP抗體、PCT對MPP的診斷具有參考意義，且MP抗體聯合PCT檢測能提高小兒MPP感染的診斷率，臨床應用價值較高。