益生菌對結直腸癌患者放化療期腸道菌群及腸屏障功能的影響

羅曉斌，黃定鵬

（1.廣州市黃埔區云埔社區醫院門診部，廣東廣州 510760；2.中國人民解放軍南部戰區總醫院消化科，廣東廣州 510030）

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2020年12月中國人民解放軍南部戰區總醫院收治的100例結直腸癌患者納入研究，按隨機數字表法將患者分為觀察組和對照組，各50例。觀察組患者中男性30例，女性20例；年齡46~77歲，平均年齡（67.16±8.11）歲；Dukes腫瘤分期：B期32例，C期18例。對照組患者中男性29例，女性21例；年齡47~78歲，平均年齡（67.23±8.04）歲；Dukes腫瘤分期：B期34例，C期16例。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經中國人民解放軍南部戰區總醫院醫學倫理委員會審批通過，所有患者及家屬均對研究知情并簽署知情同意書。納入標準：①符合《中國結直腸癌診療規范（2017年版）》[4]中結直腸癌的診斷標準，且經過病理學診斷證實；②治療前1個月內未使用微生態活菌制劑。排除標準：①存在胃腸道手術史；②合并胃腸道炎癥或腸梗阻；③對益生菌過敏；④同時患有其他癌癥。

1.2 治療方法 兩組患者均行氟尿嘧啶注射液（華仁藥業股份有限公司，國藥準字H20030565，規格：100 mL：氟尿嘧啶0.25 g與氯化鈉0.9 g）+奧沙利鉑甘露醇注射液（辰欣藥業股份有限公司，國藥準字H20052531，規格：100 mL:奧沙利鉑50 mg與甘露醇5.1 g）化療方案治療，氟尿嘧啶注射液靜脈滴注350 mg/m2，連續靜脈滴注5 d，奧沙利鉑甘露醇注射液靜脈滴注130 mg/m2，靜脈滴注1 d，同時行常規盆腔放射治療，照射劑量50 Gy，5次/周，2 Gy/次，放療開始第1、5周均予以同步化療。兩組患者在放化療治療后5 d左右給予營養支持，以短肽型腸內營養劑（Milupa GmbH，國藥準字H20100287，規格：125 g/袋）為主要腸胃營養能源，前3 d按照125 g/d，以120 mL/h速度滴注，后2 d按照250 g/d，以120 mL/h速度滴注。放化療當天對照組患者口服：奧美拉唑腸溶膠囊（海南普利制藥股份有限公司，國藥準字H20113282，規格：20 mg/粒），40 mg/d；頭孢呋辛酯片（蘇州中化藥品工業有限公司，國藥準字H19990342，規格：0.25 g/片）4.5 g/d，進行治療。觀察組患者在對照組基礎上加用雙歧桿菌四聯活菌（杭州遠大生物制藥有限公司，國藥準字S20060010，規格：0.5 g/片），1.5 g/次，3次/d，連續服用7 d。

1.3 觀察指標 ①療效評價：按照WHO實體瘤療效評測標準[5]，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）、疾病進展（PD），疾病控制率=（CR+PR+SD）/總例數×100%。②腸道菌群檢測：放化療結束后第7天取患者5 g新鮮糞便，取0.5 g糞便加入5 mL生理鹽水稀釋10倍，連續稀釋法稀釋，并將其滴注于不同培養基上，選擇雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌進行培養與計數。③腸道屏障功能檢測：放化療前及放化療結束后第7天抽取患者5 mL靜脈血，3 000 r/min轉速離心處理10 min，通過酶聯免疫吸附法利用二胺氧化酶/乳酸/細菌內毒素聯檢試劑盒（北京中生金域診斷技術股份有限公司）測定D-乳酸（D-LAC）、二胺氧化酶（DAO）；尿乳果糖/甘露醇比值（L/M）測定：放化療前1晚禁食，放化療開始前清晨使患者排空膀胱并口服含乳果糖5 g、甘露醇2.5 g的測試液25 mL，2 h后正常飲食，服用6 h后收集尿液，取20 mL尿液并加入0.2 mg硫柳汞，-20 ℃冷藏，3 000 r/min轉速離心處理10 min，利用高效液相色譜儀[沃特世科技（上海）有限公司，型號：E2695]測定L/M，放化療結束后第6天晚上禁食，放化療結束后第7天早晨服用測試液并收集尿液，3 000 r/min離心處理后測定L/M。

1.4 統計學分析 采用SPSS 22.0統計學軟件處理數據，計量資料以（）表示，組間對比采用獨立樣本t檢驗，組內對比采取配對樣本t檢驗；計數資料以[例(%)]表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床療效比較 兩組患者疾病控制率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者臨床療效比較 [例(%)]

2.2 兩組患者治療后腸道菌群比較 觀察組患者治療后腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌數顯著高于對照組，大腸桿菌、糞腸球菌數顯著低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者治療后腸道菌群比較 [log(CFU/g)， ]

表2 兩組患者治療后腸道菌群比較 [log(CFU/g)， ]

組別 例數 雙歧桿菌 乳酸桿菌 大腸桿菌 糞腸球菌觀察組 50 9.55±0.69 9.49±0.67 7.92±0.59 8.61±0.61對照組 50 7.85±0.62 8.47±0.66 8.93±0.61 9.07±0.63 t值 12.959 7.669 8.415 3.709 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 兩組患者治療后腸道屏障功能比較 兩組患者治療前D-LAC、DAO、L/M比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組治療后D-LAC、DAO、L/M水平較治療前顯著降低，且觀察組顯著低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患者治療后腸道屏障功能比較（ ）

表3 兩組患者治療后腸道屏障功能比較（ ）

注：與同組治療前比較，*P＜0.05。D-LAC：D-乳酸；DAO：二胺氧化酶；L/M：乳果糖/甘露醇比值。

組別 例數D-LAC（ng/mL） DAO（ng/mL） L/M治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后觀察組 50 12.37±1.88 9.76±1.52* 109.37±17.88 88.92±13.18* 2.14±0.27 1.17±0.18*對照組 50 12.41±1.89 10.83±1.53* 110.48±17.76 98.77±14.36* 2.15±0.36 1.33±0.27*t值 0.007 3.808 0.311 3.573 0.157 3.487 P值 0.994 0.001 0.756 0.000 0.876 0.001

3 討論

正常生理環境下的腸道菌群有著黏膜免疫功能，腸道菌群中的厭氧菌占比較多，且可以與腸道黏膜受體結合，形成生物屏障，減少病菌對機體的侵襲[6]。相當一部分結直腸癌患者在治療前就已存在腸道菌群失衡與腸屏障功能減弱情況[7]，另外，結直腸癌患者在進行放化療時所使用的藥物除了具有殺死腫瘤細胞的功效外，藥物本身的毒性也會對患者體內正常細胞造成不良影響[8]，如破壞患者腸道細胞，致腸道菌群紊亂，侵襲諸如粒細胞等免疫細胞[9]，降低患者免疫力[10]，使革蘭陽性球菌、陰性桿菌等病原菌增殖，腸道菌群易位。同時，出于抗感染考慮，部分結直腸癌患者會服用慶大霉素等腸道抗菌藥物，對腸道厭氧菌的生長產生抑制，損害腸功能，厭氧菌的大量減少與需氧菌的大幅增多也使腸道菌群平衡受到打擊。另外，因放化療而產生的應激狀態也可引起腸道缺氧，引起內臟血管痙攣，炎性介質增多，對腸黏膜造成損傷。

本次研究顯示，兩組患者的疾病控制率比較差異無統計學意義，提示放化療期間加用雙歧桿菌四聯活菌并不會影響結直腸癌的治療效果。觀察組患者治療后腸道內雙歧桿菌、乳酸桿菌數顯著高于對照組，大腸桿菌、糞腸球菌數顯著低于對照組，這主要是雙歧桿菌四聯活菌中含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌，可有效與腸道上皮細胞結合，使腸道內雙歧桿菌、乳酸桿菌數量增多。同時，雙歧桿菌產生的脂肪酸也對大腸桿菌與糞腸球菌與大腸桿菌的過度繁殖加以抑制，使腸道感染得以緩解。史新龍等[11]選取60例直腸癌患者，對其行益生菌酪酸梭菌膠囊干預，比較治療前后的腸道菌群變化，發現干預后患者腸道菌群構成得到明顯改善，且腸黏膜細胞間緊密性得以加強，腸道黏膜通透性降低，腸道免疫功能增強，與本次研究結果一致。

由于炎性介質的釋放與內臟血管的痙攣，導致結直腸癌患者的腸黏膜缺血和再灌注損傷，進而使腸道通透性增強，腸屏障功能降低。相關研究表明，益生菌可通過免疫屏障對腫瘤進行抑制，加速腫瘤組織的凋亡[12]。D-LAC、DAO、L/M均為評價腸屏障功能的重要指標，DAO是一種活性細胞內酶，D-LAC則是菌群代謝產物，DAO與D-LAC水平越高，腸黏膜損傷度越高，L/M比值越高，患者腸道通透性越高，腸黏膜連接部位遭到破壞越多。本次研究中觀察組患者治療后D-LAC、DAO、L/M顯著低于對照組，主要是由于益生菌的代謝產物可以形成機體抗原，機體抗原在進入體內淋巴細胞后，促進機體產生免疫應答，增強機體免疫功能，減少體內炎性介質的釋放，增強抗炎細胞因子表達，從而達到減少患者腸黏膜損傷，提升腸屏障功能的目的。

綜上所述，益生菌可對結直腸癌患者腸道菌群的紊亂起到糾正作用，對腸屏障功能起到修復作用，有一定推廣價值。