內皮蛋白C受體在重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的表達及意義

張佳 劉芳 鄭丹

[摘要] 目的 探討內皮蛋白C受體（ERCR）在重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的表達及意義。 方法 選取2017年5月至2020年6月南昌市第一醫院接收的70例重度子癇前期孕婦（研究組）和70名健康孕婦（健康組）作為本研究對象，兩組進行胎盤組織和血漿ERCR檢測，比較兩組的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量和胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率;同時根據重度子癇前期的類型，比較早發型和晚發型孕婦的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量和胎盤組織結合型ERCR陽性表達率。 結果 經檢測，研究組的血漿游離ERCR水平明顯高于健康組，其胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量明顯低于健康組（P<0.001）;同時，研究組的胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率（58.57%）明顯低于健康組（97.14%）（P<0.001）。在重度子癇前期類型方面，早發型孕婦的血漿游離ERCR水平明顯高于晚發型孕婦，其胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量明顯低于晚發型孕婦（P<0.001）;且早發型孕婦胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率（32.44%）也低于晚發型孕婦（87.87%）（P<0.001）。 結論 早發型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達明顯升高，而晚發型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR無明顯變化，ERCR可作為早發型重度子癇前期的預測指標。

[關鍵詞] 重度子癇前期;孕婦;胎盤組織;血漿;內皮蛋白C受體

[中圖分類號] R714.245? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）02-0009-04

Expression and significance of endothelial protein C receptor in placental tissue and plasma of pregnant women with severe preeclampsia

ZHANG Jia? ?LIU Fang? ?ZHENG Dan

Department of Gynecology and Obstetrics， Nanchang First Hospital， Nanchang? ?330000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of endothelial protein C receptor （ERCR） in placental tissue and plasma of pregnant women with severe preeclampsia. Methods A total of 70 pregnant women with severe preeclampsia （study group） and 70 healthy pregnant women （healthy group） who were admitted to Nanchang First Hospital from May 2017 to June 2020 were selected as the research objects， and the placental tissue and plasma ERCRs were detected in the two groups. The plasma free ERCR levels， relative expression levels of binding ERCR mRNA and positive expression rates of binding ERCR protein in the placental tissue were compared between the two groups. Meanwhile， according to the type of severe preeclampsia， the levels of plasma free ERCR， the relative expression levels of placental tissue binding ERCR mRNA and the positive expression rates of placental tissue binding ERCR were compared between the early onset and late onset pregnant women. Results The level of free ERCR in plasma in the study group was significantly higher than that in the healthy group， and the relative expression of placental tissue binding ERCR mRNA in the study group was significantly lower than that in the healthy group （P<0.001）. Meanwhile， the positive expression rate of placental tissue binding ERCR protein in the study group was 58.57%，which was significantly lower than that of 97.14% in the healthy group （P<0.001）. For the type of severe preeclampsia， the plasma free ERCR level of early onset women was significantly higher than that of late onset women， and the relative expression level of placental tissue binding ERCR mRNA of early onset women was significantly lower than that of late onset women （P<0.001）. The positive expression rate of placental tissue binding ERCR protein in early onset pregnant women was 32.44%， which was also lower than that of 87.87% in late onset pregnant women （P<0.001）. Conclusion The expression of ERCR in the placental tissue and plasma of pregnant women with early onset severe preeclampsia significantly increase， while the expression of ERCR in the placental tissue and plasma of pregnant women with late onset severe preeclampsia does not significantly change. ERCR can be used as a predictor of early onset severe preeclampsia.

[Key words] Severe preeclampsia; Pregnant women; Placental tissue; Plasma; Endothelial protein C receptor

重度子癇前期屬于妊娠期高血壓最為嚴重的一個階段，極易引起胎盤早剝、胎兒宮內窘迫、產后出血等，對孕婦及胎兒的生命安全構成極大威脅[1-2]。重度子癇前期根據發病孕齡可分為早發型和晚發型，孕齡<34周發病為早發型，孕齡≥34周為晚發型[3]。有學者認為，血管內皮細胞損傷與妊娠期高血壓的發生、發展密切相關，內皮蛋白C受體（endothelial protein C receptor，ERCR）作為蛋白C系統的重要成員之一，其在細胞凋亡、炎癥反應中起到重要作用，與多種疾病的發生、發展有著一定的聯系[4-5]。而重度子癇前期的發生預示著孕婦血管內皮細胞損傷，這一損傷會嚴重影響ERCR功能，但對于ERCR與該疾病的發生、發展關系尚未明確定論。基于此，本研究選取2017年5月至2020年6月南昌市第一醫院接收的70例重度子癇前期孕婦和70名健康孕婦作為研究對象，旨在探討重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達及其意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2017年5月至2020年6月南昌市第一醫院接收的70例重度子癇前期孕婦（研究組）和70名健康孕婦（健康組）作為本研究對象。健康組年齡22～36歲，平均（29.68±4.28）歲;孕次1～3次，平均（2.01±0.23）次;孕齡32～36周，平均（33.15±0.52）周。研究組年齡23～36歲，平均（26.75±4.32）歲;孕次1～3次，平均（2.03±0.25）次;孕齡32～36周，平均（33.18±0.53）周;早發型37例[年齡23～34歲，平均（26.53±4.21）歲;孕次1～3次，平均（2.01±0.33）次;孕齡32～35周，平均（33.05±0.48）周]，晚發型33例[年齡25～36歲，平均（26.57±4.27）歲;孕次1～3次，平均（2.03±0.34）次;孕齡33～36周，平均（33.07±0.49）周]。兩組的年齡、孕次和孕齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性;同時，早發型和晚發型孕婦的一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。納入標準：①研究組孕婦均符合《婦產科學》[6]中有關重度子癇前期診斷標準;②均為單胎妊娠者;③具備正常理解溝通交流能力者;④孕婦及其家屬對本研究均知情，且已簽署知情同意書。排除標準[7]：①合并心肝腎功能不全者;②胎兒存在先天性疾病或胎膜早破者;③孕婦和胎兒存在感染者;④存在精神疾病既往史者。本研究已獲得醫院醫學倫理委員會審查批準。

1.2 方法

予以兩組胎盤組織和血漿ERCR檢測，具體方法如下：①采集孕婦晨起空腹靜脈血4 ml，將血液標本靜置30 min，由專業檢驗人員進行離心處理，離心半徑10 cm，速率3000 r/min，離心15 min分離血漿，采用美國Beckman Coulter公司生產的全自動生化分析儀（型號為AU5800），通過酶聯免疫吸附法測定孕婦的血漿游離ERCR水平。②待孕婦分娩后，收集胎盤中央部位，去除并底蛻膜層，注意避開鈣化壞死部位，于叢密絨毛膜層采集2份胎盤組織，標本大小為1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm。使用DEPC溶液徹底沖洗胎盤組織標本，置于液氮、-80℃環境下保存。取1份胎盤組織剪碎并充分研磨，將其加到組織裂解液中充分裂解。隨后由專業檢驗人員進行離心處理，半徑為15 cm，速率為3000 r/min，時間10 min，將上清液分離，并進行PCR擴增，計算胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量。③將剩余的1份胎盤組織置于10%的中性甲醛中固定24 h，行石蠟包埋，連續4 μm厚切片，滴入50 μl兔抗人ERCR多克隆抗體，進行常溫孵育，24 h后加入0.1 ml生物素山羊抗大鼠工作液，置于37℃中孵育，時間為30 min。行二氨基聯苯胺顯色，襯染、脫水透明均使用蘇木精，行中性樹膠封片。在400倍鏡下觀察孕婦胎盤組織結合型ERCR陽性表達率。判斷標準[8]：以評分方式表示陽性細胞百分比和染色強度，陽性細胞百分比<5%、無著色分別為0分;陽性細胞百分比為5%～20%、淡黃色分別為1分;陽性細胞百分比>20%～50%、黃色分別為2分;陽性細胞百分比>50%、棕黃色分別為3分。陽性細胞百分比值+染色強度值，0～1分即陰性，2分即弱陽性，3～4分即中度陽性，5～6分即強陽性。

1.3觀察指標

比較兩組的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量和胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率。同時，根據重度子癇前期的類型，比較早發型和晚發型孕婦的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量和胎盤組織結合型ERCR陽性表達率。

1.4統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。P<0.001為差異有極其顯著的統計學意義。

2結果

2.1 兩組的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量比較

經檢測，研究組的血漿游離ERCR水平明顯高于健康組，其胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量低于健康組（P<0.001）。見表1。

2.2 兩組的胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率比較

研究組的胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率明顯低于健康組孕婦（P<0.001）。見表2。

2.3 早發型和晚發型孕婦的血漿游離ERCR水平、胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量比較

早發型孕婦的血漿游離ERCR水平明顯高于晚發型孕婦，其胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量明顯低于晚發型孕婦（P<0.001）。見表3。

2.4 早發型和晚發型孕婦的胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率比較

與晚發型孕婦相比，早發型孕婦的胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率更低（P<0.001）。見表4。

3 討論

妊娠期高血壓是妊娠期間特有的疾病，根據病情的嚴重程度可分為子癇前期、先兆子癇和子癇期[9-11]。據流行病學調查顯示[12]，我國9.4%～10.4%的妊娠婦女合并有高血壓，該孕期并發癥是導致孕婦和圍產兒不良預后的主要因素之一。子癇前期主要發于妊娠20周以后，且胎盤功能趨于成熟，分娩后能在一定程度上緩解孕婦病情，由此得知，胎盤組織與子癇前期的發生、發展存在一定關系[13-15]。重度子癇前期作為妊娠期高血壓最為嚴重的階段，如何及時發現、干預是現階段臨床婦產科所關注的重點。

本研究結果顯示，經檢測，研究組的血漿游離ERCR水平明顯高于健康組，其胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量明顯低于健康組（P<0.001）;同時，研究組的胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率明顯低于健康組（P<0.001），提示與健康孕婦相比，重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達情況出現顯著變化。究其原因為滋養細胞凋亡、胎盤著床淺、炎癥反應、血管內皮細胞損傷等是引起重度子癇前期的關鍵因素[16-17]。蛋白C系統作為重要抗凝系統，其能有效抑制細胞凋亡、內皮炎癥反應，對內皮細胞起到重要的保護作用。ERCR作為蛋白C系統的重要成員，其主要表達于胎盤、血管內皮細胞表面、肝臟等。而ERCR能激活蛋白C，使其發揮生物學作用，且ERCR具有游離ERCR和結合型ERCR兩種類型，前者可抑制蛋白C活化、抗凝活性產生，后者能調節蛋白復合物[18]。重度子癇前期的發生則會影響ERCR功能，使其在孕婦胎盤組織和血漿中的表達發生變化。

本研究結果顯示，早發型孕婦的血漿游離ERCR水平明顯高于晚發型孕婦，其胎盤組織結合型ERCR mRNA相對表達量明顯低于晚發型孕婦（P<0.001）;且早發型孕婦胎盤組織結合型ERCR蛋白陽性表達率也低于晚發型孕婦（P<0.001），提示ERCR在早發型和晚發型中的表達存在較大差異性。結合型ERCR可與活化蛋白C進行結合，能有效抑制中性粒細胞活性，減少炎癥因子釋放，進而減輕血管內皮細胞損傷。在胎盤組織中，ERCR的表達降低則會減少活化蛋白C生成，使機體炎癥反應激活，對血管內皮細胞造成損傷，引起血管痙攣，進而誘發早發型重度子癇前期[19-20]。而晚發型重度子癇前期的ERCR表達無明顯變化，這可能與胎盤灌注障礙不是此類型的主要影響因素、病變為直接母體反應有關。同時，胎盤組織的ERCR表達減少，會導致活化蛋白C水平降低，使血管內皮損傷加劇，此時結合型ERCR會經由胎盤內皮細胞進入血漿中，此時血漿游離ERCR水平會過度表達。而血漿游離ERCR水平升高會加劇機體炎癥反應，進一步損傷血管內皮細胞，抑制蛋白C抗凝活性，并增加血管壁沖擊力、血液張力，引起血壓升高，繼而誘發早發型重度子癇前期。

綜上所述，重度子癇前期的發生、發展與胎盤組織和血漿中的ERCR表達存在一定關系，而早發型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR表達明顯升高，而晚發型重度子癇前期孕婦胎盤組織和血漿中的ERCR無明顯變化，ERCR可作為早發型重度子癇前期的預測指標。

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（收稿日期：2021-03-10）