雙孢蘑菇菌種培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)*

羅燕娜，王靜靜，李旭東，張愛萍，趙 亮

（第六師農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，新疆 五家渠 831300）

雙孢蘑菇又稱白蘑菇、洋蘑菇，隸屬擔(dān)子菌亞門層菌綱傘菌目傘菌科蘑菇屬。因其口感爽滑、蛋白質(zhì)含量高、脂肪含量低，又有助消化、降血壓、防癌抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等功效，深受消費(fèi)者喜愛。

雙孢蘑菇是世界第一大菇，栽培規(guī)模大，普及地區(qū)廣，現(xiàn)有100多個(gè)國家和地區(qū)生產(chǎn)，在發(fā)達(dá)國家雙孢蘑菇栽培已進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)代。我國的雙孢蘑菇栽培始于20世紀(jì)20至30年代，生產(chǎn)地主要在上海。1958年改用牛糞栽培后，栽培面積迅速擴(kuò)大，目前栽培規(guī)模僅次于美國，名列世界第二，但是多數(shù)產(chǎn)區(qū)仍處于季節(jié)性、零散、廣種薄收的初級(jí)生產(chǎn)水平階段[1]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株

雙孢蘑菇菌種A15為本實(shí)驗(yàn)室從蘑菇種植戶大棚采集的一潮菇，通過組織分離、純化、擴(kuò)繁后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基配方：麥粒200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，蛋白胨1 g，瓊脂20 g，加水1 000 mL[2]。

原種培養(yǎng)基配方5 種，分別為配方A：麥粒32.5%，高粱粒65.0%，石膏1%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方B：谷子57.5%，高粱粒40.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方C：麥粒19.5%，高粱粒78.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方D：谷子37.5%，高粱粒60.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方E（CK）：麥粒97.5%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%。

栽培種培養(yǎng)基配方2種，分別為配方Z1：麥粒25.0%，高粱粒72.5%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方Z2：麥粒19.5%，高粱粒78.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方Z3（CK1）：麥粒97.5%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 母種培養(yǎng)基制備方法

稱取麥粒200 g，用800 mL左右的開水煮沸1 h，過濾收集汁液，用少量的涼水溶解蛋白胨和瓊脂粉，然后和其他輔料一起加入過濾好的汁液，燒開后關(guān)火，期間不停地?cái)嚢瑁苊庹冲仭嚢韬玫呐囵B(yǎng)料裝入試管，塞緊試管塞，121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，擺斜面，冷卻備用。

目前世界各國在分析波磨對(duì)車輛通過的影響時(shí)，主要采用三維彈性體滾動(dòng)接觸理論來進(jìn)行蠕滑計(jì)算并分析車輛的動(dòng)力學(xué)性能。其中精度最好、使用最多的是荷蘭學(xué)者Kalker創(chuàng)立的三維彈性體非線性滾動(dòng)接觸理論，但是由于Kalker在分析時(shí)做了幾個(gè)方面的假設(shè)，其中最重要的一條假設(shè)就是整個(gè)滾動(dòng)過程是穩(wěn)態(tài)的，因此其具有局限性。在穩(wěn)態(tài)滾動(dòng)接觸的過程中，接觸斑的形狀、大小保持不變，因此蠕滑率、法向力、切向力也保持不變。但如果在滾動(dòng)過程中，接觸斑的形狀、大小產(chǎn)生較大變化，從而導(dǎo)致蠕滑率、法向力、切向力隨時(shí)間變化發(fā)生較大的改變，這種情況就是非穩(wěn)態(tài)滾動(dòng)接觸。

1.2.2 原種培養(yǎng)基制備方法

根據(jù)配方計(jì)算出各原料所需要的量，按照如下方法制備：稱取麥粒，裝入網(wǎng)兜，用50%的咪鮮胺1 000倍液浸泡麥粒16～18 h，清洗3～4次后，在開水中（加入0.2%石灰）煮沸20 min左右，直至麥粒無白心，撈出晾涼，拌入輔料，然后裝入容量300 mL的廣口組培瓶，預(yù)濕滅菌土，濕度控制在55%～60%，用滅菌土封面，蓋上蓋子，123 ℃高壓蒸汽滅菌2.5 h，冷卻待用[3]。

1.2.3 栽培種培養(yǎng)基制備方法

制作流程與原種培養(yǎng)基基本相同，只是不用滅菌土封面，最后裝入12 cm×24 cm聚丙烯蘑菇菌種袋。

1.2.4 接種培養(yǎng)

采用組織分離法制備雙孢蘑菇母種：選取個(gè)頭大、菇形圓整、菇蓋厚、色白、無病蟲害的一潮菇，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用酒精棉球消毒后，使用滅菌小刀切取菌蓋與菌柄交界處組織，然后接種到試管內(nèi)，塞緊試管塞，25 ℃恒溫培養(yǎng)。10 d后轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行純化，然后再轉(zhuǎn)接到試管進(jìn)行擴(kuò)繁。

雙孢蘑菇原種接種時(shí)，采用1支母種接3瓶原種的比例，每個(gè)配方各接種80瓶，注明配方、品種和接種日期，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

雙孢蘑菇栽培種接種時(shí)，采用1瓶原種（用原種培養(yǎng)基配方C培養(yǎng)）接20袋栽培種的比例，每個(gè)栽培種培養(yǎng)基配方各接種700袋，注明配方、品種和接種日期，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

觀察內(nèi)容及方法：（1）接種后24～ 48 h，觀察記錄雙孢蘑菇A15母種在5個(gè)原種培養(yǎng)基配方上的萌發(fā)時(shí)間，以及原種在3個(gè)栽培種培養(yǎng)基配方上的萌發(fā)時(shí)間；（2）培養(yǎng)過程中，觀察記錄原種、栽培種菌絲長勢(shì)與顏色，及時(shí)挑出污染瓶（袋），并記錄數(shù)量；（3）培養(yǎng)過程結(jié)束，記錄菌絲長滿的時(shí)間，計(jì)算滿瓶或滿袋所用時(shí)間和污染率。

1.3 栽培試驗(yàn)

將雙孢蘑菇菌絲生長情況較好的配方Z1和配方Z2培養(yǎng)出來的栽培種各取500袋，做栽培試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)在昌吉市泰源食用菌專業(yè)合作社的8號(hào)和6號(hào)智能溫室，以其購買的進(jìn)口菌種為對(duì)照，播種面積：8號(hào)智能溫室配方Z1栽培種和進(jìn)口菌種各240 m2；6號(hào)智能溫室配方Z2栽培種和進(jìn)口菌種各240 m2；播種量均為730 g/m2。記錄出菇產(chǎn)量。具體觀察內(nèi)容及方法：分別統(tǒng)計(jì)各配方栽培種前兩潮菇的產(chǎn)量和總產(chǎn)量，并計(jì)算出單位面積產(chǎn)量，第一潮菇記錄出菇第1天至第7天的產(chǎn)量，第二潮菇記錄出菇第8天至第14天的產(chǎn)量，總產(chǎn)量為30 d的出菇總量。

2 結(jié)果與分析

2.1 母種在培養(yǎng)基上的生長情況

經(jīng)觀察，雙孢蘑菇組織分離并接種到試管后，其菌絲萌發(fā)時(shí)間需要48～72 h，在培養(yǎng)皿內(nèi)純化后，轉(zhuǎn)接試管進(jìn)行擴(kuò)繁，此時(shí)，菌絲萌發(fā)時(shí)間需24～36 h，長滿試管需12～15 d，菌絲顏色潔白，生長勢(shì)強(qiáng)。

2.2 原種在不同培養(yǎng)基上的生長情況

原種培養(yǎng)基配方A和配方C培養(yǎng)出來的雙孢蘑菇原種比配方E（CK）生長速度快，菌絲顏色白、密集且污染率較低（見表1）。培養(yǎng)出來的原種松散度好，不易結(jié)塊，轉(zhuǎn)接率高。

原種培養(yǎng)基配方B和D培養(yǎng)出來的雙孢蘑菇原種與配方E（CK）相比菌絲萌發(fā)時(shí)間相同，但生長速度緩慢，菌絲稀疏、長勢(shì)較弱且邊緣不整齊，培養(yǎng)出來的原種松散度較差，結(jié)塊多，污染率較高，與對(duì)照相比，無明顯優(yōu)勢(shì)（見表1）。

表1 不同配方培養(yǎng)基雙孢蘑菇原種生長情況

2.3 栽培種在不同培養(yǎng)基上的生長情況

栽培種培養(yǎng)基配方Z2培養(yǎng)的雙孢蘑菇栽培種菌絲萌發(fā)時(shí)間早，滿袋所需時(shí)間最短，菌絲濃密、長勢(shì)強(qiáng)，且顏色較白，其次是栽培種培養(yǎng)基配方Z1，配方Z3（CK1）的培養(yǎng)效果最差，菌絲長勢(shì)較弱，且麥粒攤晾的時(shí)間不易掌握，若含水量過高，容易導(dǎo)致栽培種袋子底部積水，影響菌絲生長；若含水量過低，菌絲長勢(shì)弱，袋口容易感染木霉菌，滿袋所需時(shí)間比栽培種培養(yǎng)基配方Z2多出1周時(shí)間（見表2）。

表2 不同配方培養(yǎng)基雙孢蘑菇栽培種生長情況

2.4 栽培試驗(yàn)

栽培種培養(yǎng)基配方Z1和配方Z2菌絲生長情況較好，各取500袋，分別栽培到8號(hào)和6號(hào)智能溫室，記錄總產(chǎn)量，并根據(jù)播種面積計(jì)算出單位面積產(chǎn)量。由于溫控系統(tǒng)出了問題，第三潮菇損失嚴(yán)重，出菇總量統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表3所示。在相同的栽培面積和管理?xiàng)l件下，栽培種培養(yǎng)基配方Z2的栽培種與進(jìn)口菌種前兩潮菇產(chǎn)量僅相差5.5個(gè)百分點(diǎn)，總產(chǎn)量僅相差4.1個(gè)百分點(diǎn)，平均單產(chǎn)僅相差1.0 kg/m2。

表3 雙孢蘑菇栽培試驗(yàn)產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)

3 小結(jié)與討論

現(xiàn)有的雙孢蘑菇培養(yǎng)基原材料多為麥粒，麥粒菌種具有營養(yǎng)豐富、菌絲生長快、轉(zhuǎn)接率高等優(yōu)點(diǎn)，但是在制作和培養(yǎng)過程中，若滅菌不徹底，或煮制時(shí)間過長，麥粒爆裂，很容易感染木霉菌，導(dǎo)致污染率較高[4]。本試驗(yàn)用高粱粒做主要原料，麥粒占少部分，制備雙孢蘑菇的原種和栽培種，由于高粱粒不易感染木霉菌，且外殼較厚，煮制過程中不易破裂，污染率明顯降低；攤晾時(shí)表面水分揮發(fā)快，制作時(shí)間縮短，提高了工作效率；同時(shí)采用混合培養(yǎng)基，營養(yǎng)更全面，菌絲生長速度和長勢(shì)明顯優(yōu)于純麥粒的培養(yǎng)基；而且由于高粱粒的顆粒要小于麥粒，菌種的轉(zhuǎn)接率更高，因而在播種時(shí)，用種量也能相應(yīng)地減少。在栽培試驗(yàn)中，栽培種培養(yǎng)基配方Z2培養(yǎng)出來的栽培種出菇產(chǎn)量與進(jìn)口菌種僅相差1%，經(jīng)計(jì)算，菌種成本相較進(jìn)口菌種可節(jié)約25%以上。所以，在制作雙孢蘑菇的原種時(shí)，可以選擇原種培養(yǎng)基配方A或配方C，在制作雙孢蘑菇的栽培種時(shí)，可以選擇原種培養(yǎng)基配方B作為參考，從而提高雙孢蘑菇菌種的質(zhì)量和制作效率。