凌云烏雞高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)與效果分析

黃雪嬌 吳克富 羅強(qiáng) 郁再洛

（1，廣西凌云縣泗城鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站 533199；2，廣西凌云縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 533199）

凌云烏雞是廣西優(yōu)良地方雞品種之一，具備耐粗飼、覓食能力和抗病力強(qiáng)、羽毛漂亮、肉質(zhì)細(xì)嫩、味美香濃、食用藥用價(jià)值高等特點(diǎn)，是餐桌上的滋補(bǔ)佳品，具有很好的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)潛力。近年來(lái)，凌云縣人民政府把凌云烏雞生態(tài)特色養(yǎng)殖作為“十三五”脫貧攻堅(jiān)戰(zhàn)特色養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)項(xiàng)目來(lái)抓。采取“公司+基地+合作社+貧困戶”和“政府主導(dǎo)+公司+基地+合作社+貧困戶”等精準(zhǔn)扶貧新模式作為加快扶貧產(chǎn)業(yè)發(fā)展新途徑，有效帶動(dòng)了一大批貧困戶發(fā)展產(chǎn)業(yè)實(shí)現(xiàn)脫貧致富。為確保凌云縣政府實(shí)施凌云烏雞特色生態(tài)養(yǎng)殖項(xiàng)目的順利進(jìn)行，凌云縣動(dòng)物疫病防控中心承擔(dān)項(xiàng)目技術(shù)支撐，從動(dòng)物疫病防控、免疫與監(jiān)測(cè)為烏雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供技術(shù)支撐，把禽流感免疫工作作為免疫工作的主要措施來(lái)抓。為及時(shí)掌握凌云烏雞的免疫情況和免疫效價(jià)，筆者通過(guò)對(duì)凌云烏雞規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和部分散養(yǎng)戶高致病性禽流感免疫抗體情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，全面評(píng)估高致病性禽流感的免疫效果。旨在客觀評(píng)估免疫工作，為科學(xué)指導(dǎo)防控工作提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗來(lái)源及用量

重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活苗（H5N1Re-11 株+Re-12 株，H7N9H7-Re3 株）免疫用苗由政府統(tǒng)一采購(gòu)，哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2020019。胸部肌肉或頸部皮下注射，15～35 日齡，每只0.3ml；35 日齡以上的雞，每只0.5ml。預(yù)防H5亞型2.3.4.4d 分支、2.3.2.1d 分支和H7亞型禽流感病毒禽流感。

1.2 樣品來(lái)源與數(shù)量

監(jiān)測(cè)樣品來(lái)自凌云縣瑞東農(nóng)牧有限公司烏雞保種場(chǎng)、廣西百色凌泰養(yǎng)殖有限責(zé)任公司凌云烏雞核心產(chǎn)業(yè)區(qū)等6 個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)，按1%的比例隨機(jī)抽取。散養(yǎng)戶采集泗城鎮(zhèn)后龍村凌云烏雞產(chǎn)業(yè)扶持點(diǎn)，隨機(jī)平行采集。采血部位為翅靜脈，血清分離后，置冰箱凍存待檢。

2 診斷試劑與儀器

2.1 診斷試劑來(lái)源

診斷試劑生產(chǎn)廠家為哈爾濱國(guó)生生物科技有限公司，其中H7-Re3 株禽流感間接血凝試驗(yàn)抗原批號(hào)20201118，陽(yáng)性血清批號(hào)20 201105；H5-Re11 珠禽流感間接血凝試驗(yàn)抗原批號(hào)20191217，陽(yáng)性血清批號(hào)20 191210；H5-Re12 株禽流感間接血凝試驗(yàn)抗原，批號(hào)20 190819；陽(yáng)性血清批號(hào)20191216。

2.2 主要儀器設(shè)備

離心機(jī)、單道移液器、多道移液器、微振蕩器、水浴鍋、96 孔V 型微量反應(yīng)板等，移液器等計(jì)量器均通過(guò)校正合格。

2.3 檢測(cè)方法

參照2020 年新頒布的《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2020）規(guī)定的微量法，采用血凝試驗(yàn)（HA）與血凝抑制試驗(yàn)（HI）進(jìn)行。

2.4 結(jié)果判定

以完全抑制4 個(gè)HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度，陽(yáng)性血清對(duì)照HI 效價(jià)達(dá)8log2(1:152) 以上試驗(yàn)成立。免疫時(shí)間達(dá)21d 后，H5和H7亞型的HI 抗體效價(jià)≥4log2 為陽(yáng)性，判定為合格。HI 抗體效價(jià)＜4log2 為陰性，判定為不合格。

3 結(jié)果與分析

從表1 可知，規(guī)模場(chǎng)H5Re-11 株、H5Re-12、H7Re-11的抗體合格率規(guī)模場(chǎng)分別為94.23%、95.19%、92.78%，散養(yǎng)分別為82.19%、87.67%、73.97%。由此可見(jiàn)，規(guī)模場(chǎng)的抗體合格率比散養(yǎng)的抗體率理想。

表1 規(guī)模場(chǎng)及散養(yǎng)戶不同亞型的免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

從表2 可知，肉雞H5Re-11 株、H5Re-12、H7Re-11 的抗體合格率分別為87.75%、90.18%、82.99%，蛋雞分別為96.67%、98.33%、95%。監(jiān)測(cè)表明，不同生產(chǎn)性能的雞其免疫抗體合格率存在差異。蛋雞飼養(yǎng)周期長(zhǎng)，經(jīng)過(guò)3 次免疫，保持較高的抗體水平。

表2 不同和產(chǎn)性能的抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

從表3 可知，在監(jiān)測(cè)樣品中，經(jīng)過(guò)一次免疫，H5Re-11株、H5Re-12、H7Re-11 的抗體合格率85.47%、88.89%、77.78%，而經(jīng)過(guò)二次以上免疫的抗體合格率分別為96.67%、98.33%、99.16%。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)二免的雞抗體合格率比只進(jìn)行一免的免疫抗體水平高。

表3 不同免疫次數(shù)的抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

4 討論與小結(jié)

4.1 實(shí)現(xiàn)一次免疫同時(shí)防控多流行毒株

從監(jiān)測(cè)結(jié)果看，凌云烏雞禽流感H5、H7亞型免疫抗體合格率都比較高，免疫應(yīng)答顯著，群體合格率均超過(guò)國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)達(dá)70%以上，對(duì)防控禽流感提供有效的免疫保護(hù)作用[1]。同時(shí)也說(shuō)明重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活苗免疫原性良好，安全有效，該苗的推廣使用避免了單苗注射、降低了成本，減少了家禽應(yīng)激次數(shù)，實(shí)現(xiàn)一次免疫同時(shí)防控H5N1Re-11 株+Re-12 株，H7N9H7-Re3 株亞型禽流感流行毒株的目的[2]。

4.2 對(duì)不同飼養(yǎng)方式、不同性能的禽類別抗體效價(jià)有差異

從檢測(cè)結(jié)果看，規(guī)模場(chǎng)的禽流感免疫抗體水平比農(nóng)村散養(yǎng)禽流感免疫抗體水平高，主要原因是農(nóng)村散養(yǎng)的雞局限于春秋兩防突擊性免疫，不能按規(guī)定的日齡計(jì)劃免疫，加上飼養(yǎng)管理水平欠缺，環(huán)境條件差易導(dǎo)致家禽營(yíng)養(yǎng)不良，對(duì)禽流感的免疫效價(jià)和保護(hù)作用有一定的影響。同時(shí)筆者注意到，不同規(guī)模場(chǎng)的抗體合格率存在差異，抗體滴度高低不齊，抗體相對(duì)不穩(wěn)定，以雞的個(gè)體差異，雞群健康狀況，免疫注射操作不規(guī)范、疫苗接種劑量密切相關(guān)，劑量不足產(chǎn)生不了免疫應(yīng)答，劑量超大造成免疫抑制或麻痹，其抗體水平不一定很理想。此外，疫苗運(yùn)輸、保存條件同樣影響免疫效價(jià)，監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)凌泰養(yǎng)殖有限責(zé)任公司山邏村金礦養(yǎng)殖區(qū)的抗體水平非常低或無(wú)抗體，通過(guò)調(diào)查了解，雞場(chǎng)管理人員將疫苗按不規(guī)定保存，造成疫苗效價(jià)大幅下降，導(dǎo)致免疫失敗，動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)立即下發(fā)整改通知，責(zé)成該場(chǎng)補(bǔ)免。

4.3 不同的免疫程序?qū)α柙茷蹼u禽流感的免疫群體保護(hù)至關(guān)重要

從監(jiān)測(cè)結(jié)果看，二免的免疫抗體合格率達(dá)90%以上，而僅進(jìn)行一免的雞抗體滴度參差不齊，無(wú)抗體或抗體水平很低的雞為病毒感染埋下隱患。試驗(yàn)證明：一次免疫僅給機(jī)體一個(gè)刺激，產(chǎn)生的抗體效價(jià)不高，且抗體維持時(shí)間不長(zhǎng)，免疫產(chǎn)生的抗體水平難以保護(hù)群體不受野毒攻擊或疫情的潛在威脅。只有通過(guò)二免，一方面可以減少或消除人為因素的影響，如漏免或疫苗劑量不足等。另一方面可以在初免的基層上加強(qiáng)刺激免疫系統(tǒng)，使之產(chǎn)生更高的免疫抗體及免疫保護(hù)維持時(shí)間[3]。凌云烏雞飼養(yǎng)期一般為120d，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)最理想是15～20 日齡進(jìn)行第一次基礎(chǔ)免疫，間隔3 周后再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫。農(nóng)村散養(yǎng)家禽實(shí)施集中免疫，對(duì)超免疫期或新補(bǔ)欄家禽及時(shí)補(bǔ)免。

4.4 加大督查力度

通過(guò)這次凌云烏雞抗體監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)有漏免和疫苗保管不當(dāng)?shù)葐?wèn)題，要針對(duì)性采取形式多樣的宣傳、技術(shù)培訓(xùn)和指導(dǎo)，提高防疫隊(duì)伍業(yè)務(wù)素質(zhì)和養(yǎng)殖者的防疫意識(shí)，規(guī)范免疫操作。同時(shí)，動(dòng)物疫病監(jiān)督管理部門要加大督查力度，對(duì)不按要求開(kāi)展禽流感計(jì)劃免疫的單位或個(gè)人給予批評(píng)教育，拒不接受強(qiáng)制免疫的給予相應(yīng)處罰。

4.5 強(qiáng)化家禽免疫監(jiān)測(cè)效果評(píng)估工作

加強(qiáng)凌云烏雞免疫是預(yù)防與控制高致病性禽流感最有效的措施，通過(guò)免疫抗體監(jiān)測(cè)掌握群體免疫抗體水平，了解免疫狀況，對(duì)控制疫病起至關(guān)重要的作用。進(jìn)一步強(qiáng)化家禽免疫監(jiān)測(cè)評(píng)估工作。按照“農(nóng)業(yè)農(nóng)村部高致病性禽流感等主要?jiǎng)游镆卟”O(jiān)測(cè)方案”的要求，定期對(duì)散養(yǎng)戶、養(yǎng)殖場(chǎng)采取集中監(jiān)測(cè)、常規(guī)監(jiān)測(cè)和隨機(jī)檢測(cè)相結(jié)合的辦法，開(kāi)展家禽免疫抗體效價(jià)評(píng)估，總結(jié)免疫中存在的問(wèn)題，提出整改措施，對(duì)未達(dá)到免疫抗體保護(hù)水平的應(yīng)及時(shí)補(bǔ)免，全面提高防疫密度和防疫質(zhì)量，建立穩(wěn)固的免疫屏障，有效控制禽流感疫情的發(fā)生，保護(hù)凌云烏雞特色生態(tài)產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。