11種液體醫(yī)院制劑微生物限度方法的研究

姬 俊 牛萌萌 王立云 朱世真 王尊文

1.青島市食品藥品檢驗研究院，山東青島 266071；2.青島市婦女兒童醫(yī)院，山東青島 266034

醫(yī)療機構制劑是指醫(yī)療機構根據(jù)本單位臨床需要經(jīng)批準而配制、自用的固定處方制劑[1]。顛茄口服溶液、小兒鹽酸異丙嗪糖漿等11種制劑是青島市婦女兒童醫(yī)院制劑中心根據(jù)臨床需要配制的液體醫(yī)院制劑，其標準收錄于《山東省醫(yī)療機構制劑規(guī)范》及山東省食品藥品監(jiān)督管理局制定的醫(yī)療機構制劑標準中。醫(yī)院液體制劑在制備和使用過程中存在易染菌、穩(wěn)定性較差等[2-3]問題。因此為有效控制本研究的醫(yī)院液體制劑質(zhì)量，保障用藥安全，本研究根據(jù)2020年版《中華人民共和國藥典》四部通則1105、1106[4]的規(guī)定，對這11種液體醫(yī)院制劑進行方法適用性研究，建立微生物限度檢驗方法，同時也為確定和改善制劑生產(chǎn)條件提供有效依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 藥品

顛茄口服溶液（批號：20201130、20201217、20201229）、氯化鉀溶液（批號：20200904、20201027、20201208）、硫酸鎂溶液（批號：20201112、20201204、20201230）、青桑合劑（批號：20191105、20191120、20191210）、呋麻滴鼻液（批號：20201124、20201210、20201222）、硫酸鋅合劑（批號：20200914、20201105、20201216）、水 合 氯 醛 溶 液（批 號：20201103、20201203、20201229）、小兒鹽酸異丙嗪糖漿（批號：20201120、20201202、20201228）、紫 冰 搽 劑（批 號：20191205、20191219、20191220）、1%聚維酮碘（批號：20201026、20201127、20201211）、爐甘石洗劑（批號：20200929、20201106、20201225）。以上藥品由青島市婦女兒童醫(yī)院生產(chǎn)。

1.2 儀器

PYX-DHS40×50隔水式培養(yǎng)箱由國營創(chuàng)新醫(yī)療器械廠生產(chǎn)，SHP-160生化培養(yǎng)箱、GNP-9160E隔水式培養(yǎng)箱由上海三發(fā)科學儀器有限公司生產(chǎn)，INE500型電熱恒溫培養(yǎng)箱由德國MEMMERT公司生產(chǎn)。

1.3 培養(yǎng)基和試劑

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號：VM876358）由德國Merck公司生產(chǎn)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基（批 號：20190930）、沙 氏 葡 萄 糖 液 體 培養(yǎng) 基（批 號：20190630）、麥 康 凱 液 體 培 養(yǎng) 基（批號：20190410）、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（批 號：20190703）、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號：20191013）、溴化十六烷三甲銨瓊脂培養(yǎng)基（批號：20190730）由青島日水生物技術有限公司生產(chǎn)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（批號：20190610）、pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（以下簡稱試劑A，批號：20190222）、大豆卵磷脂（批號：20190701）由青島海博生物科技有限公司生產(chǎn)。吐溫-80（批號：20181108）由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，無菌十四烷酸異丙酯（批號：20190102）由北京牛?；蚣夹g有限公司生產(chǎn)。

1.4 菌種

銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試液制備

顛茄口服溶液、氯化鉀溶液、硫酸鎂溶液、青桑合劑、呋麻滴鼻液、硫酸鋅合劑、水合氯醛溶液、小兒鹽酸異丙嗪糖漿、1%聚維酮碘、爐甘石洗劑：取供試品10 ml，加試劑A至100 ml，制備成1∶10供試液，取1∶10供試液用試劑A制備成1∶50供試液。紫冰搽劑：取供試品10 ml，加20 ml無菌十四烷酸異丙酯，加100 ml試劑A，振搖萃取，靜置分層，取水層作為1∶10供試液。爐甘石洗劑：取供試品10 ml，以含3%吐溫-80、0.3%卵磷脂的試劑A為稀釋液，加稀釋液至100 ml，制備成1∶10供試液，取1∶10供試液用稀釋液制備成1∶50供試液。

2.2 計數(shù)方法適用性試驗

2.2.1 試驗組①平皿法：取原液、1∶10或1∶50供試液10 ml分別加至無菌試管中，加入各試驗菌菌液0.1 ml，使試管中的菌液濃度≤100 cfu/ml。取上述含菌供試液1 ml注入平皿中，立即傾注熔化的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（需氧菌）或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（霉菌和酵母菌）。②薄膜過濾法：取原液或1∶10供試液1 ml，加至20 ml試劑A中，全部過濾。用試劑A沖洗濾膜，每次100 ml，共沖洗3次，在最后一次沖洗液中分別加入≤100 cfu的試驗菌。將濾膜分別置于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（需氧菌）或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（霉菌和酵母菌）平皿上。

2.2.2 陽性對照組用相應稀釋液代替供試液，參照試驗組試驗。

2.2.3 供試品組用試劑A代替菌液，參照試驗組試驗。

以上胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿置于32.5℃培養(yǎng)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平皿置于22.5℃培養(yǎng)，逐日計數(shù)，計算回收結(jié)果。

2.2.4 試驗結(jié)果11種液體醫(yī)院制劑的計數(shù)方法適用性試驗結(jié)果見表1。表1數(shù)據(jù)表明各藥分別按對應方法進行試驗，各試驗菌的回收比值最終均在0.5～2范圍內(nèi)，符合藥典要求。

表1 11種醫(yī)院制劑計數(shù)方法適用性試驗結(jié)果

2.3 控制菌方法適用性試驗

2.3.1 試驗組①大腸埃希菌：取1∶10供試液10 ml加至200 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，加入≤100 cfu的大腸埃希菌，32.5℃培養(yǎng)24 h。取上述培養(yǎng)物1 ml接種至100 ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，42℃培養(yǎng)24 h。用無菌接種環(huán)取麥康凱液體培養(yǎng)基培養(yǎng)物，劃線接種至麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，32.5℃培養(yǎng)24 h。②金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌：取1：10供試液10 ml加至200 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，分別加入≤100 cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌，32.5℃培養(yǎng)24 h。用無菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物，分別劃線接種至甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（金葡）、溴化十六烷三甲基瓊脂培養(yǎng)基（銅綠）平皿上，32.5℃培養(yǎng)24 h。

2.3.2 陽性對照組用相應稀釋液代替供試液，參照試驗組試驗。

2.3.3 供試品組用試劑A代替菌液，參照試驗組試驗。

2.3.4 陰性對照組用相應稀釋液代替供試液，用試劑A代替菌液，參照試驗組試驗。

2.3.5 試驗結(jié)果各藥控制菌的方法適用性試驗結(jié)果見表2。供試品組和陰性對照組均未檢出，試驗組和陽性對照組均檢出對應試驗菌。表2數(shù)據(jù)表明，各藥按常規(guī)法進行控制菌方法適用性試驗，符合藥典要求。

表2 11種醫(yī)院制劑控制菌方法適用性試驗結(jié)果

3 討論

《中華人民共和國藥典》通則1105中規(guī)定“如供試品有抗菌活性，應盡可能去除或中和”[5]。本研究中，根據(jù)所檢制劑的特點，采用不同的方法，消除藥品的抗菌活性，以1%聚維酮碘和爐甘石洗劑為例。聚維酮碘是一種中效消毒劑，其釋放的游離碘進入細胞膜，使細胞蛋白質(zhì)變性、凝固，從而發(fā)揮殺滅菌體、滅活病毒的作用[6]。爐甘石洗劑含有爐甘石和氧化鋅[7]，其中氧化鋅具有抑菌、消炎等作用，能抑制部分葡萄球菌，對炎癥部位有較好的消炎、復生作用[8]。這兩種制劑用平皿法進行計數(shù)方法適用性試驗時，均具有較強的抑菌活性，尤其對金黃色葡萄球菌的回收率均＜ 0.5。1%聚維酮碘因流動性較好，故采用薄膜過濾法使回收結(jié)果＞ 0.5。爐甘石洗劑含有不溶于水的成分，若采用薄膜過濾法易堵塞薄膜，故以卵磷脂和吐溫-80作為中和劑[9-11]，結(jié)合平皿法使金黃色葡萄球菌回收結(jié)果符合要求。

醫(yī)院制劑室不僅承擔配制和生產(chǎn)醫(yī)院制劑的責任，更需要為所生產(chǎn)制劑的質(zhì)量、臨床用藥安全提供有效管理和保障。醫(yī)院制劑室進行制劑的微生物限度檢查時，存在未按藥典進行檢驗方法升級、微生物檢出率較高、抑菌藥物抑菌性未完全消除等問題[12]。本研究在探討醫(yī)院制劑微生物限度方法時，充分考慮各制劑的特點，制訂出適宜的方法，消除具有抑菌活性藥品的抑菌性，從而為檢出可能存在的微生物、有效控制制劑質(zhì)量提供保障。雖然本研究的醫(yī)院制劑按照所得方法進行微生物限度檢查，結(jié)果均符合規(guī)定，但醫(yī)院制劑室還應加強日常質(zhì)量控制，從工作人員、儀器設備、原料試劑、操作規(guī)程、生產(chǎn)環(huán)境等各個方面加強管理[12-15]。定期檢測生產(chǎn)、實驗、存儲場地的環(huán)境指標，重點檢查易引起醫(yī)院液體制劑微生物污染的關鍵環(huán)節(jié)（如純化水[2]、包裝[13]等）的微生物數(shù)量。通過過程監(jiān)控，使制劑室的微生物得到有效控制，從而保證醫(yī)院制劑的質(zhì)量。