梁王茶不同極性部位抗氧化及抑制酪氨酸酶活性研究

蘭圓圓 楊苗 黃志強 朱開梅

【摘要】目的：研究梁王茶不同極性部位抗氧化和抑制酪氨酸酶活性的作用。方法：采用有機溶劑萃取法萃取得到梁王茶乙酸乙酯、正丁醇和水相部位，采用DPPH法、ABTS法、L-DOPA法評價各萃取部位對自由基的清除能力和酪氨酸酶抑制活性。結論：梁王茶提取物具有較好的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制作用，乙酸乙酯提取物為其主要活性部位，具有開發成護膚品的潛在應用價值。

【關鍵詞】梁王茶;抗氧化;酪氨酸酶[1]

基金項目：廣西創新驅動發展專項項目（桂科AA18118015）;桂林市科學研究與技術開發計劃項目（2020011203-1，2020011203-2）

異葉梁王茶（Notho panax davidii）系五加科梁王茶屬植物，是喀斯特地區的特色藥材，在廣西桂西北、桂東北及貴州、云南等少數民族地區被廣泛飲用，具有抗風濕、強筋骨、治療胃病、咽喉熱痛等功效。現代研究發現梁王茶屬植物具有鎮痛、抗腫瘤、抗病毒、抑菌、調節免疫、防治心腦血管疾病以及解酒保肝等作用。

近年來，人們越來越關注皮膚的健康與保養，如抗衰老、美白、色素沉著等。各種自由基所引發的氧化損傷是導致衰老的原因之一;酪氨酸酶過度激活導致的肌膚色素沉著，也是引起衰老的重要原因。由于化學合成的抗氧化、美白產品會對人體有一定副作用，因此尋找有效、安全、天然的抗氧化劑及酪氨酸酶活性抑制劑是國內外學者的研究熱點。本文對梁王茶藥材各萃取部位的抗氧化和抑制酪氨酸酶活性活性進行評價，為梁王茶的開發利用提供參考價值和科學依據。

1 實驗儀器與材料

N-1300D EYELA旋轉蒸發儀（上海巴玖實業有限公司）;ReadMax 1200型光吸收全波長酶標儀（上海閃譜生物科技有限公司）。無水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等（天津致遠化學試劑有限公司產品）;DPPH（梯希愛有限公司）;ABTS試劑盒（碧云天生物技術公司）;酪氨酸酶（九鼎化學有限公司）;抗壞血酸Vc、熊果酸（津一方科技有限公司）;除另有說明外，所有試劑均為分析級，實驗用水為超純水。

2 實驗方法

2.1 梁王茶乙醇提取物及不同溶劑提取物的制備

異葉梁王茶采自廣西植物研究所。參考文獻方法，稱取梁王茶干燥品500g，按料液比1：10加入95%乙醇，60℃回流提取，減壓濃縮得梁王茶乙醇提取物。采用有機溶劑萃取法，得到梁王茶乙酸乙酯、正丁醇以及剩下的水相部位，將各極性部位萃取物減壓濃縮，作為實驗樣品。

2.2 抗氧化活性研究

2.2.1 DPPH法

參考文獻方法，以VC為陽性對照，將不同濃度的樣品和DPPH工作液加入到96孔板的各孔中，同時以無水乙醇代替DPPH工作液作為對照空白，并以無水乙醇代替樣品作為樣品空白。混合后室溫避光反應30 min，在517 nm波長處測吸光度。

2.2.2 ABTS法

按試劑盒說明取相同體積的ABTS溶液以及氧化劑溶液。參考文獻方法，將96孔板內加入200 μL ABTS工作液后，進行分組實驗，一組加入不同濃度的Trolox溶液，用來繪制標準曲線，另一組加入10 μL不同濃度提取液，作為樣品組。同時用PBS代替樣品溶液作為空白對照。室溫孵育5 min，在405 nm處測定吸光度。參照標準曲線計算出樣品的總抗氧化能力。

2.3 酪氨酸酶抑制活性研究

參考文獻方法并稍作修改。吸取不同濃度梁王茶樣品和熊果酸于96孔板中，加入80 μL PBS緩沖液和40 μL底物溶液，于37 ℃的恒溫箱孵育10 min 后，迅速加入40 μL 酪氨酸酶啟動反應，反應30 min后，在475 nm 處測定吸光度A。

3 結果

3.1 DPPH自由基的清除能力

由圖1可知，在0.05～0.8 mg/mL濃度范圍內，梁王茶各萃取物對DPPH自由基均具有一定程度的清除作用，呈正量效關系。樣品對DPPH自由基清除大小依次為VC>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>醇提部位>水相部位。梁王茶乙酸乙酯部位在其質量濃度為0.8 mg/mL時清除率高達94.18 %。梁王茶乙酸乙酯部位其清除能力僅次于Vc，Vc對DPPH自由基的IC50= 0.02982 mg/mL，而乙酸乙酯部位的IC50= 0.04677 mg/mL。

3.2 ABTS自由基的清除能力

如圖2所示，梁王茶各極性萃取物均有不同程度的抗氧化能力，不同部位之間抗氧化活性相差較大。整體上看，當提取物質量濃度達0.4 mg/mL后，清除率曲線變化緩慢。各萃取部位中，乙酸乙酯部位清除ABTS自由基能力最強，在0.8 mg/mL時高達1.3667 mmol/L，與Vc的抗氧化能力相當。樣品對ABTS自由基清除大小為：VC≥乙酸乙酯部位>正丁醇部位>醇提部位>水相部位。

3.4酪氨酸抑制活性評價

結果如表3所示。梁王茶各萃取部位均表現出不同的抗酪氨酸酶活性。其對酪氨酸酶抑制活性強弱依次為熊果酸>乙酸乙酯部位>正丁醇部位≥醇提部位>水相部位。乙酸乙酯部位對于酪氨酸酶的抑制作用最好，其IC50為0.2170 mg/mL。說明梁王茶中發揮抑制酪氨酸酶作用的活性成分主要溶解在乙酸乙酯部位。

4 討論

本研究表明，異葉梁王茶各萃取部位均有不同程度的抗氧化以及抑制酪氨酸酶活性的作用，且成濃度依賴性。在相同質量濃度下，梁王茶乙酸乙酯部位對DPPH、ABTS的清除能力優于其它部位P<0.05。梁王茶乙酸乙酯部位提取物抑制酪氨酸酶活性的能力也最強，其IC50為0.082 mg/mL，僅次于陽性對照熊果酸。以上實驗結果提示，梁王茶乙酸乙酯部位具有較強的清除自由基的能力，降低了自由基對黑色素細胞的損傷;可抑制酪氨酸酶的活性，從而抑制機體黑色素合成，因此推斷乙酸乙酯部位可能是梁王茶抗衰老、防止色素沉著的主要有效部位。本文首次報道了異葉梁王茶不同提取部位的抗氧化及抑制酪氨酸酶活性，證明其乙酸乙酯部位的藥效相對較強，因此可將其作為研究重點，其最優的單一活性成分還需做進一步研究。

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通信作者：朱開梅（1967-），女，漢，教授，主要從事糖尿病并發癥及藥物治療。

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