miRNA對三陰性乳腺癌診斷價值的Meta分析

周杰超

廣東省江門市五邑中醫(yī)院檢驗科，廣東江門 529000

目前乳腺癌已成為女性最常見的惡性腫瘤，嚴重威脅全球女性健康，三陰性乳腺癌(TNBC)相對于其他類型的乳腺癌具有發(fā)病年齡早、癌細胞容易發(fā)生轉(zhuǎn)移、治療后復發(fā)率高等特點，早期診斷能提高患者的生存率和改善預后。2015版美國癌癥協(xié)會(ACS)乳腺癌篩查指南推薦乳腺癌一般風險女性應從45歲起常規(guī)進行乳房影像學篩查[1]，我國的乳腺癌發(fā)病率逐年上升且發(fā)病高峰期比歐美國家有所提前，《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2019年版)》建議乳腺癌一般風險女性篩查起始年齡為40歲，由于X線對40歲以下女性乳腺癌的篩查效果欠佳，需與乳腺超聲聯(lián)合檢測提高靈敏度[2]。目前常用的腫瘤標志物糖類抗原153(CA153)對早期乳腺癌的診斷靈敏度不高[3]，其他惡性腫瘤中也可見到CA153表達水平升高，然而臨床需要高靈敏度和高特異度的指標來提高早期乳腺癌的篩查能力，大量研究表明，微小RNA(miRNA)檢測技術(shù)對診斷早期乳腺癌具有較高的靈敏度和特異度[4]，且隨著檢測方法的快速發(fā)展，miRNA檢測技術(shù)日益成熟[5]。miRNA是小分子非編碼單鏈RNA，長度一般為20～25個堿基，miRNA與另一種蛋白復合物形成RNA誘導的沉默復合體，通過與其靶基因信使RNA(mRNA)分子的3′端非翻譯區(qū)域互補匹配，最終抑制mRNA分子的轉(zhuǎn)錄翻譯，miRNA具有重要的基因表達調(diào)控功能。miRNA在乳腺癌細胞的表達、增殖、遷移中都扮演著重要的調(diào)控角色[6]。鑒于公開發(fā)表的有關(guān)miRNA診斷乳腺癌的文獻多為單中心、樣本量小、研究結(jié)果差異大，本文對這些研究進行綜合分析，以評價miRNA對TNBC的診斷價值。

1 材料與方法

1.1文獻來源 以“乳腺癌(breast cancer)、三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer)、miRNA、microRNA、微小RNA”等為主題、主題或(和)關(guān)鍵詞、題名或關(guān)鍵詞組成相應高級檢索信息或條件檢索中英文數(shù)據(jù)庫，包括萬方數(shù)據(jù)庫、中國知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫、維普網(wǎng)數(shù)據(jù)庫、中國生物醫(yī)學文獻服務系統(tǒng)、PubMed、Web of Science、Embase、Cochrane Library。檢索時間為建庫至 2021年6月29日。

1.2文獻的選擇標準 納入標準：(1)采用病例對照研究，凡是文獻中提到有“病例對照”的中英文文獻，無論是否采用盲法和分配隱藏，均納入；(2)經(jīng)病理組織細胞學確診為乳腺癌，或經(jīng)《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2019年版)》或《美國癌癥協(xié)會乳腺癌篩查指南(2015年版)》相關(guān)標準診斷為乳腺癌；(3)干預措施為采用miRNA檢測診斷乳腺癌；(4)研究對象未使用過抗腫瘤藥物；(5)真陽性例數(shù)(TP)、假陰性例數(shù)(FN)、假陽性例數(shù)(FP)及真陰性例數(shù)(TN)可以通過文獻直接得出或計算得出；(6)檢驗方法為實時熒光PCR(qRT-PCR)法等。排除標準：(1)綜述、Meta分析、未具體說明的文獻；(2)動物試驗文獻；(3)非病例對照研究；(4)組間均衡性差，基線不一致，兩組無法比較的文獻；(5)重復發(fā)表的文獻；(6)干預措施不是采用miRNA檢測診斷乳腺癌；(7)研究對象使用過抗腫瘤藥物的、凡是文獻中提到有合并其他腫瘤或癌細胞轉(zhuǎn)移的(乳腺癌轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)除外)；(8)無健康或良性對照組，研究對象無具體的年齡和性別等基本描述；(9)TP、FP、TN、FN數(shù)據(jù)不全；(10)經(jīng)QUADAS-2文獻質(zhì)量評分得分較低的文獻。

1.3納入文獻的質(zhì)量評價方法、發(fā)表偏倚分析與數(shù)據(jù)提取 采用質(zhì)量評價工具QUADAS-2對納入文獻進行質(zhì)量評價，采納得分≥7分的文獻，如2名研究者的評價意見不一致時，交由第3名人員進行評價。采用Review Manager 5.3對納入文獻進行發(fā)表偏倚分析，剔除發(fā)表偏倚明顯的文獻。文獻提取的數(shù)據(jù)為第一作者、發(fā)表年份、國家地區(qū)、種族、性別、年齡、對照組類型、檢測標本類型、檢測方法、TP、 FN、 FP及TN等。

1.4統(tǒng)計學處理 Meta分析使用軟件MetaDiSc1.4和STATA15.1完成。主要分析的效應量為靈敏度、特異度、陽性似然比、陰性似然比、綜合受試者工作特征(SROC)曲線的曲線下面積(AUC)診斷比值比(DOR)、Fagan列線圖、Spearman相關(guān)系數(shù)、發(fā)表偏倚等，采用I2檢驗評估異質(zhì)性，I2<25%為輕度異質(zhì)性，25%～75%為中度異質(zhì)性，>75%為高度異質(zhì)性，當I2<25%時采用固定效應模型合并各效應量，當I2≥25%時采用隨機效應模型合并各效應量。

2 結(jié) 果

2.1納入文獻的基本信息及質(zhì)量評價 通過選定數(shù)據(jù)庫檢索得到文獻(n=6 887 082)，進一步將以上所有數(shù)據(jù)庫高級檢索詞之間的關(guān)系改為與、并且、AND之后檢索,剔除重復文獻，閱讀文獻題目和摘要后剔除不相關(guān)主題文獻,再進行全文閱讀，剔除非病例對照研究、無法準確計算TP、FP、TN、FN和研究組或?qū)φ战M病例不符合納入標準的文獻,最終納入7篇文獻，其中包含9項研究，均為英文文獻，納入的文獻均為病例對照分組，納入文獻的研究組和對照組在年齡、病程等方面基線統(tǒng)一，總共有647例患者被納入，其中研究組218例，對照組429例。納入對象的年齡為21～90歲。納入文獻的基本資料見表1。QUADAS-2文獻質(zhì)量評分顯示本次納入文獻的質(zhì)量評分均較高，從Review Manager 5.3對納入文獻的發(fā)表偏倚分析中得出，本次研究納入的文獻均為發(fā)表偏倚不明顯的文獻。

表1 文獻的基本資料

2.2異質(zhì)性分析 閾值效應分析顯示，SROC曲線平面圖不呈“肩臂”狀分布，Spearman相關(guān)系數(shù)為-0.211,P=0.586，不存在閾值效應引起的異質(zhì)性。非閾值效應分析表明，DOR森林圖顯示數(shù)據(jù)排列不沿同一直線，Cochran-Q=32.45，P<0.001，I2=75.3%，提示本研究可能存在由非閾值效應引起的異質(zhì)性。將數(shù)據(jù)按研究人群的地區(qū)、年齡分布、對照組類型、檢測標本類型、檢測方法進行評估，根據(jù)P值大小，逐個剔除，發(fā)現(xiàn)上述效應量與異質(zhì)性均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Deeks′漏斗圖顯示回歸線呈雙側(cè)對稱，P=0.23，提示納入研究的發(fā)表偏倚不明顯。

2.3各效應量合并分析 采用相對應的模型合并標準對9項研究進行各效應量合并后得到，miRNA合并的靈敏度為0.86(95%CI：0.81～0.91)，特異度為0.86(95%CI：0.82～0.89)，陽性似然比為4.65(95%CI：2.75～7.86)，陰性似然比為0.15(95%CI：0.06～0.35)，DOR為46.40(95%CI：13.08～164.66)，AUC為0.945 8，Q=0.885 0，SROC曲線見圖1。

2.4Fagan列線圖分析 Fagan列線圖分析顯示，對檢測前有25%概率患TNBC的患者來說，當miRNA檢測陽性時，患TNBC的概率為75%，miRNA檢測陰性時，則檢測后患病概率降低為2%。對于檢測前有50%概率患TNBC的患者，當miRNA檢測陽性時，其患TNBC的概率為90%，miRNA檢測陰性時，檢測后患病概率降低為6%。對于檢測前有75%概率患TNBC的患者，當miRNA檢測陽性時，其患TNBC的概率為96%，miRNA檢測陰性時，檢測后患病概率降低為16%。見圖2。

注：每個圓點代表一篇文獻，圓點的大小代表文獻中納入的樣本量的大?。虎诒硎維ROC曲線，①、③表示95%CI。

注：A為檢測前概率為25%的Fagan列線圖；B為檢測前概率為50%的Fagan列線圖；C為檢測前概率為75%的Fagan列線圖。

3 討 論

隨著乳腺癌的發(fā)病年齡逐漸年輕化，臨床對于部分無癥狀的隱匿型乳腺癌往往會漏診，而大部分乳腺癌患者確診時已為中晚期階段，TNBC早期診斷更為重要。

NAM等[14]研究表明，術(shù)前CA153水平不能作為TNBC總生存率(OS)的預后判斷指標，ARAZ等[3]研究表明術(shù)前CA153水平與早期乳腺癌亞型無關(guān)，王海疆等[15]研究表明CA153在TNBC中的診斷效能一般，LI等[16]研究表明CA153在多種惡性腫瘤中表達水平升高，可見CA153診斷乳腺癌的靈敏度和特異度都不夠理想，臨床需要具有更高診斷效能的腫瘤標志物來輔助診斷TNBC。

目前液體活檢技術(shù)篩查和輔助診斷乳腺癌的方法尚未廣泛應用于臨床，更多還處于科學研究階段，查閱公開發(fā)表的關(guān)于循環(huán)腫瘤細胞(CTC)、循環(huán)腫瘤脫氧核糖核酸(ctDNA)、循環(huán)腫瘤游離脫氧核糖核酸(cfDNA)甲基化、miRNA、長鏈RNA(lncRNA)、環(huán)狀RNA(circRNA)用于乳腺癌診斷和藥物治療靶點研究的文獻，發(fā)現(xiàn)其中KANDETTU等[17]研究表明，miRNA對乳腺癌的診斷似乎有很好的潛在價值，然而目前的研究數(shù)據(jù)對于miRNA是否可用于乳腺癌的臨床輔助診斷尚未有明確的定論。VOLOVAT等[18]研究表明，在TNBC細胞的發(fā)生發(fā)展過程中可存在多種miRNA基因異常表達。OZAWA等[19]研究表明，miRNA檢測作為一種無創(chuàng)液體活檢技術(shù)輔助診斷乳腺癌具有很好的優(yōu)勢。KELLER等[20]研究表明，miRNA在乳腺癌發(fā)生很久之前就可以出現(xiàn)異常表達。CHEN等[21]研究表明，結(jié)合人工智能構(gòu)建miRNA譜預測模型在診斷乳腺癌中達到84%的準確性。ZOU等[22]研究表明，在乳腺癌患者和健康人群中檢測miRNA并篩選出4種miRNA作為研究指標，4種miRNA的AUC都大于0.9。SONG等[23]研究表明，以聚二甲基硅氧烷(PDMS)作為高通量平臺制作一種金納米棒(AuNRs)作為表面增強拉曼散射(SERS)的活性基板，能大大提高miRNA檢測診斷乳腺癌的靈敏度，為將來構(gòu)建超靈敏傳感器診斷乳腺癌及實現(xiàn)乳腺癌生物醫(yī)學即時檢測(POCT)提供支持。GUO等[24]研究表明，血漿miRNA在早期乳腺癌中表達顯著上調(diào)。FAHIM等[25]研究表明，miRNA簇在炎癥性乳腺癌(IBC)中有1種miRNA表達顯著上調(diào)，其他3種miRNA表達顯著下調(diào)。HU等[26]研究表明，干擾miRNA-155能促進TNBC細胞凋亡。LEE等[27]研究表明，miRNA-496在TNBC標本中表達下調(diào)，與早期TNBC患者更高的OS相關(guān)。YANG等[28]研究表明，TNBC組中miRNA-21的表達水平顯著高于其他乳腺癌亞組和正常組。BAR等[29]研究表明，miRNA-210在TNBC癌細胞和腫瘤微環(huán)境中均呈高表達。ANDRADE等[30]研究表明，4種miRNA可作為TNBC的預后預測生物標志物。CROSET等[31]研究表明，miRNA-30家族成員能降低乳腺癌細胞侵襲能力，可能是防治TNBC轉(zhuǎn)移的有效手段。因此進行大樣本數(shù)據(jù)分析TNBC中miRNA基因譜的表達具有重要意義。為此，本研究主要探索miRNA在TNBC診斷中的應用，為開展miRNA檢測診斷TNBC提供循證醫(yī)學證據(jù)支持。

從表1可以看出，當運用單個miRNA輔助診斷TNBC時，miR-155和miR-221具有較高的靈敏度，miR-3182和miR-221具有較高的特異度。miR-21,miR-221,miR-210聯(lián)合檢測均具有較高的靈敏度和特異度，miRNAs合并效應量的AUC可達到0.945 8。由于上述研究的樣本量較少，因此在鑒別TNBC和NTNBC及健康人群時，以上miRNA的運用僅供參考，在實際臨床應用前仍需通過檢測大量樣本對其診斷效能進行驗證。以上綜合評價表明miRNA檢測對于TNBC的輔助診斷具有重要的意義和臨床價值，或許適合作為TNBC早期診斷的標志物。

為提高本次研究的可信度和降低研究風險，本次研究收集的文獻比較全面，收集標準明確，但仍然存在不足之處：(1)僅納入公開發(fā)表的文獻，未納入灰色文獻；(2)由于語言限制，本次研究僅分析了中英文文獻；(3)沒有納入無法計算或無法通過統(tǒng)計學計算獲得所需研究數(shù)據(jù)的文獻；(4)沒有納入靈敏度或特異度計算結(jié)果不準確的文獻。

綜上所述，miRNA檢測對TNBC的早期診斷具有重要的意義和臨床應用價值，能為TNBC早期診斷選擇較好的標志物提供參考依據(jù)。然而，在實際應用前仍需大量的臨床樣本研究來驗證其診斷效能。