H型高血壓患者MTHFR基因C677T多態性與Hcy及血脂水平的關系*

邱 巍，陳素梅，劉東聲

徐州醫科大學附屬宿遷醫院檢驗科/江蘇省宿遷市檢驗醫學重點實驗室，江蘇宿遷 223800

高血壓是一種與心腦血管疾病風險密切相關的疾病，血壓水平與心血管風險呈連續、獨立、直接的正相關關系[1]。目前，在我國高血壓人群中，最主要的并發癥是腦卒中，其次是冠心病、心力衰竭、左心室肥厚、心房顫動和終末期腎病等[2]。研究表明，我國心血管疾病發病率持續上升且病死率仍居首位，高于腫瘤及其他疾病，其危險因素主要包括高血壓、血脂異常、糖尿病、慢性腎臟病、代謝綜合征、睡眠障礙和大氣污染等[3]。高血壓作為心血管疾病的主要危險因素，常伴有高同型半胱氨酸(Hcy)、高血脂[4]。而高Hcy與葉酸代謝途徑中的關鍵酶亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的基因多態性相關[5]。本研究分析H型高血壓患者MTHFR基因C677T多態性與血清Hcy及血脂水平的關系，并對H型高血壓患者進行年齡與性別的分組研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年12月在徐州醫科大學附屬宿遷醫院診斷為H型高血壓的患者404例，年齡22～95歲，其中男297例、平均年齡(59.52±12.95)歲，女 107 例、平均年齡(67.08± 12.99)歲。梁榮珍等[6]發現MTHFR基因突變與老年高血壓患者的Hcy和血脂水平有一定相關性，故本研究將研究對象按年齡分為<65歲和≥65歲進行不同基因型間Hcy和血脂水平的比較。入選標準：符合《高血壓基層診療指南：2019年》中高血壓診斷標準[1]；符合《H型高血壓診斷與治療專家共識》中空腹Hcy≥10 μmol/L的標準[5]。排除標準：繼發性高血壓；合并嚴重的肝腎功能不全；存在嚴重心腦血管疾病及嚴重臟器疾病；正在服用會影響Hcy和血脂的藥物。本研究經醫院醫學倫理學委員會批準，所有患者均知情同意。

1.2儀器與試劑 ABI 7500 PCR儀(美國賽默飛世爾公司生產)；Eppendorf 5424R離心機(德國艾本德公司生產)；Beckman AU5800(美國貝克曼庫爾特有限公司生產)；MTHFR基因677C/T檢測試劑盒(深圳泰樂德醫療有限公司生產)；血清Hcy檢測試劑盒(深圳泰樂德醫療有限公司生產)；血脂四項檢測試劑盒(廣州科方生物技術股份有限公司生產)。

1.3方法

1.3.1血清Hcy及血脂水平檢測 所有入組者禁食12 h后，空腹采集促凝靜脈血5 mL及EDTA-K2抗凝的全血2 mL，促凝血經3 000 r/min離心15 min后檢測血清Hcy、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.3.2基因分型 按照MTHFR基因677C/T檢測試劑盒說明書對EDTA-K2抗凝的全血標本進行基因分型。取25 μL全血標本放于1.5 mL離心管內，提取基因組DNA。反應體系：10 μL R5、0.25 μL R6、5.75 μL雙蒸水和4 μL的陰性對照、陽性對照或待檢樣本DNA。程序設置如下：50 ℃ 2 min 1個循環；95 ℃ 2 min 1個循環；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，45個循環。熒光信號的收集定為FAM和VIC，數據的采集定在60 ℃，通過收集到的熒光信號進行分析。

2 結 果

2.1患者血脂、Hcy水平 404例患者血清Hcy水平為(18.13±6.09)mmol/L，TC水平為(4.65±1.00)mmol/L，TG水平為(1.89±0.41)mmol/L，HDL-C水平為(1.33±0.28)mmol/L，LDL-C水平為(2.74±0.78)mmol/L。

2.2基因型分組 對入組的404例患者進行MTHFR C677T基因分型：TT型130例，占32.18%；CT型184例，占45.54%；CC型90例，占22.28%。CC型為野生型，CT型為雜合突變型，TT型為純合突變型。突變基因型為274例，占67.82%。不同基因型患者一般資料見表1。

表1 不同基因型患者一般資料

2.3不同基因型患者Hcy和血脂水平比較 TT型患者血清Hcy水平均明顯高于CT、CC型(P<0.05)，而CC型患者血清Hcy水平與CT型比較差異均無統計學意義(P>0.05)。TT型患者血清TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平與CT、CC型比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.4按年齡、性別分組的不同基因型患者Hcy和血脂水平比較 <65歲和≥65歲TT型患者的血清Hcy水平與CT、CC型比較差異均有統計學意義(P<0.05)；≥65歲TT型患者血清HDL-C水平與CT、CC基因型比較差異均有統計學意義(P<0.05)，而≥65歲TT型患者血清TC、TG、LDL-C水平與CT、CC型比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表3。男、女TT型患者的血清Hcy水平與CT、CC型比較差異均有統計學意義(P<0.05)，而男、女TC、TG、HDL-C、LDL-C水平在不同基因型間差異均無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表2 不同基因型患者Hcy和血脂水平比較

表3 年齡分組不同基因型患者Hcy和血脂水平比較

表4 性別分組不同基因型患者Hcy和血脂水平比較

3 討 論

Hcy是一種含硫氨基酸，為蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中的重要中間產物，在血漿中主要與清蛋白以二硫鍵形式結合[7]。Hcy有3種代謝途徑：第一，是在維生素B6參與的胱硫醚縮合酶(CBS)和胱硫醚酶催化下生成半胱氨酸；第二，是甜菜堿作為甲基供體，由甜菜堿Hcy甲基轉移酶甲基化成為蛋氨酸；第三，是在5-甲基四氫葉酸和維生素B12的輔助下，由甲硫氨酸合成酶催化成蛋氨酸[5]。5-甲基四氫葉酸是MTHFR還原5，10-亞甲基四氫葉酸的產物，也是血清中葉酸的主要存在形式。因此，葉酸缺乏或MTHFR活性下降都會導致血清Hcy水平升高。

目前，對于MTHFR基因多態性與Hcy及血脂水平相關性的研究多集中在C677T位點。MTHFR基因的677位密碼子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)置換后，導致222處密碼子的氨基酸丙氨酸被纈氨酸取代，攜帶等位基因T的突變型CT型和TT型都會導致MTHFR活性下降，引起葉酸代謝障礙和血清Hcy水平升高[7]。較多的研究認為純合突變型TT型患者血清Hcy水平顯著高于雜合突變型CT型和野生型CC型[8-11]。MTHFR基因 C677T多態性與血脂水平的相關性研究結論存在差異。梁榮珍等[6]研究顯示，MTHFR基因C677T的TT型患者有較高的Hcy水平，明顯高于CT型和CC型，TC、TG、LDL-C水平也明顯高于CT型和CC型；而本研究的結論為MTHFR基因C677T的TT型患者Hcy水平明顯高于CT、CC型，≥65歲的TT型患者血清HDL-C水平高于CT、CC型，而≥65歲的TT型患者血清TC、TG、LDL-C水平與CC、CT型間差異無統計學意義(P>0.05)，與該研究結論不一致。原因可能是前者的研究對象集中在老年患者，而本研究中研究對象各年齡段均有分布，老年人的血脂代謝異常要明顯重于年輕人。有研究表明，TT型患者Hcy水平高于CT、CC型，而CT型患者Hcy水平與CC型差異無統計學意義(P>0.05)，各基因型的TC、TG、HDL-C及LDL-C水平差異均無統計學意義[12-13]。而劉爽等[14]的研究表明，MTHFR基因C677T多態性與Hcy有相關性，與血脂水平無相關性，MTHFR基因A1298C和MRTT基因A66G位點與Hcy和血脂水平均無相關性。這些研究證實了在H型高血壓患者中MTHFR基因C677T基因多態性與Hcy水平相關，TT型患者有較高的Hcy水平，而MTHFR基因C677T基因多態性與血脂無關。本研究的結論與眾多研究的結果保持一致，在對年齡分組的分析中發現≥65歲的TT型患者血清HDL-C水平顯著高于CT和CC型，說明MTHFR基因C677T基因多態性與血脂水平的相關性可能與年齡有關，但還需要進一步擴大樣本量證實該結論。