血清抗PLA2R抗體和sST2在特發(fā)性膜性腎病中的水平及臨床意義*

楊 晶，邱曉楠，柳彩俠△

徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院：1.腎內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室；2.腎內(nèi)科，江蘇徐州 221000

膜性腎病(MN)是成人原發(fā)性腎小球疾病的常見(jiàn)病因之一，占成人腎病綜合征的22%～33%[1]，其病理學(xué)特征表現(xiàn)為腎小球上皮下的免疫復(fù)合物沉積，基底膜增厚及釘突形成。MN按照病因分為特發(fā)性MN(IMN)和繼發(fā)性MN(SMN)。IMN占MN總發(fā)病率的75%～80%[2]，嚴(yán)重影響患者健康，如何有效對(duì)IMN患者進(jìn)行診斷和病情評(píng)估，對(duì)臨床診療具有重要指導(dǎo)意義。腎小球足細(xì)胞上的磷脂酶A2受體(PLA2R)是IMN的主要抗原，與抗PLA2R抗體結(jié)合成為原位免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體導(dǎo)致足細(xì)胞損傷，致尿蛋白產(chǎn)生。可溶性致癌抑制因子2(sST2)屬于白細(xì)胞介素(IL)-1受體家族成員之一，是IL-33的負(fù)性調(diào)節(jié)劑，通過(guò)IL-33/ST2軸在一些慢性免疫性及炎癥性疾病中起至關(guān)重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，sST2可能參與急性腎損傷、糖尿病腎病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制[3-5]。IMN作為一種腎小球非炎癥性器官特異性自身免疫性疾病，sST2與其的相關(guān)研究較少。本研究擬探討血清抗PLA2R抗體及sST2在IMN患者中的水平，并分析其與臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系，以期為臨床診療提供新的線索，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年12月在本院腎內(nèi)科住院的110例腎病綜合征患者作為研究對(duì)象，入選患者均行經(jīng)皮腎組織活檢病理檢查，且在檢查前均未使用糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑治療，按病理結(jié)果并結(jié)合病史資料和實(shí)驗(yàn)室檢查分為IMN組和非IMN組。IMN組78例，男45例，女33例；非IMN組32例，男18例，女14例，包括狼瘡性腎炎10例，IgA腎病7例，腎小球微小病變型腎病8例，系膜增生性腎小球腎炎5例，糖尿病腎病2例。所有IMN患者按照 Ehrenreich-Churg病理分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期18例，Ⅱ期31例，Ⅲ期14例，Ⅳ期15例，患者血清標(biāo)本均在進(jìn)行腎組織活檢前留取。另選取30例健康體檢者作為對(duì)照組,其中男17例，女13例。IMN組和非IMN組患者一般資料除年齡有一定差異外，評(píng)價(jià)腎臟損傷的其他指標(biāo)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。本研究符合本院倫理委員會(huì)所制訂的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

表1 IMN組、非IMN組與對(duì)照組基線資料比較或M(P25,P75)]

組別n腎小球?yàn)V過(guò)率[mL/(min·1.73 m2)]尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(個(gè)/μL) 血清總膽固醇(mmol/L)血清三酰甘油(mmol/L)血紅蛋白(g/L)IMN組 78109.1(89.1,120.0)26.9(6.9,47.5)?7.5(6.2,9.3)?2.1(1.5,3.2)?130.0(120.2,143.0)非IMN組32116.8(90.8,120.0)10.9(5.5,32.1)?7.3(6.0,9.4)?2.5(1.8,4.3)?129.5(107.5,136.8)對(duì)照組30119.4(89.7,120.0)1.8(0.0,3.2)4.3(3.4,5.6)1.2(1.0,1.7)130.0(110.2,138.8)

1.2方法 采集所有研究對(duì)象清晨空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血5 mL，3 000 r / min離心10 min。分離血清，并分裝保存于-80 ℃ 冰箱待用。采用量子點(diǎn)熒光免疫法測(cè)定血清抗PLA2R抗體水平，儀器及試劑盒為南京諾維贊醫(yī)療科技有限公司的AFS-1000干式熒光檢測(cè)儀及配套的量子點(diǎn)熒光免疫PLA2R抗體IgG檢測(cè)試劑盒。血清PLA2R抗體陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：≥14.0 RU/mL為陽(yáng)性病例，<14.0 RU/mL為陰性病例。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量測(cè)定血清sST2水平，sST2試劑盒購(gòu)于上海江萊生物科技有限公司，測(cè)定時(shí)按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.13組血清抗 PLA2R 抗體、sST2水平比較 IMN組血清抗PLA2R抗體水平高于非IMN組和對(duì)照組，IMN組和非IMN組血清sST2水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 3組血清抗PLA2R抗體、sST2水平比較

2.2血清抗PLA2R抗體、sST2單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷IMN的效能比較 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清抗PLA2R抗體聯(lián)合sST2檢測(cè)對(duì)IMN患者的診斷價(jià)值最高，ROC曲線下面積為0.913(95%CI：0.853～0.954)，見(jiàn)圖1、表3。

圖1 抗PLA2R抗體、sST2單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷IMN的ROC曲線

表3 血清抗PLA2R抗體、sST2單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷IMN的效能比較

2.3不同抗PLA2R抗體滴度水平IMN患者血清清蛋白及尿蛋白定量水平比較 在IMN患者中，血清清蛋白及尿蛋白定量水平與PLA2R抗體滴度有明顯相關(guān)性，抗體滴度越高者，其血清清蛋白水平越低，尿蛋白定量水平越高，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 不同抗PLA2R抗體滴度水平IMN患者血清清蛋白及尿蛋白水平比較[ M(P25,P75)]

2.4IMN患者血清sST2水平與血清清蛋白、尿蛋白定量的關(guān)系 為了解IMN患者血清sST2水平與臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系，本研究對(duì)血清sST2水平與尿蛋白定量及血清清蛋白水平進(jìn)行了相關(guān)分析。結(jié)果顯示，血清sST2水平與尿蛋白定量水平呈正相關(guān)(r=0.593，P<0.01，圖2A)，與血清清蛋白水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.513，P<0.01，圖2B)。

圖2 IMN患者血清sST2水平與尿蛋白定量及血清清蛋白水平的相關(guān)性

2.5不同病理分期IMN患者抗PLA2R抗體、sST2水平比較 4種病理分期IMN患者抗PLA2R 抗體、sST2水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；進(jìn)一步兩兩比較，Ⅲ期、Ⅳ期患者抗PLA2R 抗體、sST2水平均高于Ⅰ期、Ⅱ期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 不同病理分期IMN患者抗PLA2R抗體、sST2水平比較[ M(P25,P75)或

3 討 論

近年來(lái)有研究顯示，MN的發(fā)病率不斷攀升，成為腎穿刺組織活檢的最常見(jiàn)病理類型[6-7]。然而，組織病理學(xué)不能完全解釋疾病的病因，其中30%由感染、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腫瘤及藥物毒性引起的MN被歸為SMN，另外70%稱為IMN。IMN是一種足細(xì)胞被破壞的自身免疫性腎病，其基本病理變化是免疫復(fù)合物在腎小球上皮下沉積，激活補(bǔ)體、促進(jìn)攻膜復(fù)合物形成，進(jìn)一步誘導(dǎo)終末分化的足細(xì)胞凋亡，其中免疫因素可能與其密切相關(guān)[8]。血清抗PLA2R抗體因其具有較高的靈敏度和特異度，且與IMN病情密切相關(guān)被廣泛應(yīng)用[9-10]，為IMN的臨床和免疫病理鑒別診斷提供了重要信息。sST2是一種IL-33受體，位于輔助性T細(xì)胞2(Th2)、肥大細(xì)胞和上皮細(xì)胞上，誘導(dǎo)釋放細(xì)胞因子及趨化因子，引發(fā)瀑布式炎性反應(yīng)，參與Th2活性[11]。ST2以跨膜形式和可排泄的可溶性形式存在。在一些自身免疫性疾病、超敏反應(yīng)性疾病及心血管疾病中起至關(guān)重要的作用[12]。

本研究中IMN組和非IMN組患者除年齡有一定差異外，評(píng)價(jià)腎臟損傷的其他指標(biāo)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這主要與MN中老年人發(fā)病居多有關(guān)。本研究檢測(cè)到75.6%的IMN患者血清抗PLA2R抗體陽(yáng)性，這與國(guó)內(nèi)外多種方法檢測(cè)其陽(yáng)性率為69%～78%的報(bào)道相符[13-15]。大約75%的IMN患者具有循環(huán)中的抗PLA2R抗體，而抗PLA2R抗體陰性的MN患者中約10%具有抗1型血小板反應(yīng)蛋白7A域抗體。另外一些病因未明的MN患者可能與Nel樣1型分子基因、中性肽鏈內(nèi)肽酶、exostosin 1/2等有關(guān)[16-17]。鑒于抗PLA2R抗體雖然具有較高的靈敏度和特異度，但仍存在一定的假陰性和假陽(yáng)性，本研究發(fā)現(xiàn)，血清抗 PLA2R 抗體聯(lián)合sST2檢測(cè)診斷IMN的ROC曲線下面積最大，診斷效能較高。因此，多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)IMN的診斷可提供更多的參考依據(jù)。

血清清蛋白、尿蛋白定量可作為衡量腎損害程度及評(píng)價(jià)療效的主要指標(biāo)，PLA2R參與的自身免疫反應(yīng)目前被認(rèn)為是IMN的主要發(fā)病機(jī)制，患者體內(nèi)抗體水平與疾病進(jìn)展密切相關(guān)[18]。本研究結(jié)果顯示，患者抗體滴度越高者，其血清清蛋白水平越低，尿蛋白定量水平越高。sST2是IL-33的負(fù)性調(diào)節(jié)劑，可能參與許多免疫介導(dǎo)疾病的發(fā)病機(jī)制[19]。本研究對(duì)3組研究對(duì)象血清sST2水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，其總體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IMN組和非IMN組血清sST2水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但I(xiàn)MN組和非IMN組血清sST2水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IMN患者血清sST2水平與尿蛋白定量水平呈正相關(guān)(P<0.05)，與血清清蛋白水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。本研究還發(fā)現(xiàn)，Ⅲ期、Ⅳ期IMN患者抗PLA2R 抗體、sST2水平均明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期患者，表明抗PLA2R 抗體、sST2水平升高可能與IMN病情進(jìn)展有關(guān)，血清抗PLA2R 抗體、sST2水平可作為評(píng)估IMN疾病進(jìn)展和治療干預(yù)效果的生物標(biāo)志物。

綜上所述，血清抗PLA2R抗體和sST2聯(lián)合檢測(cè)可提高IMN的診斷效能，二者均能在一定程度上反映IMN的病情。但是本研究仍存在樣本量少、機(jī)制研究不足、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法單一等問(wèn)題，在后續(xù)研究中還需要通過(guò)進(jìn)一步隊(duì)列研究評(píng)估抗PLA2R抗體和sST2與疾病轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性。