羥苯磺酸鈣藥物濃度對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的干擾試驗分析

錢 芳,陳 玉

1.江蘇省宿遷市泗洪縣人民醫院檢驗科，江蘇宿遷 223900；2.江蘇省宿遷市泗洪縣中醫院檢驗科，江蘇宿遷 223900

血清肌酐是評價腎小球濾過功能的有效指標，能夠監測腎功能，可作為臨床腎衰竭患者的主要透析指標，因此，肌酐測定水平的可靠性對臨床診斷和治療有非常重要的意義。肌酐檢測的方法有多種，主要有苦味酸法(Jaffe法)、酶法和高效液相色譜法。Jaffe法主要缺點是特異度不高，存在“假肌酐”的干擾且試劑的穩定性差，定標周期短；酶法的特異度比較高，試劑的穩定性好；高效液相色譜法特異度高、準確性好，但不適合作為常規方法，一般用作參考方法[1]。目前，多家醫院檢測肌酐一般采用酶法，其試劑主要成分是肌氨酸氧化酶，但近年來有報道顯示羥苯磺酸鈣對此法有干擾作用[2]。作者于2021年3月20日遇見1例由于口服羥苯磺酸鈣導致血清肌酐檢測結果假性降低案例，為進一步研究羥苯磺酸鈣對此方法學的干擾程度，本研究收集10份不同肌酐水平的新鮮血清(10例患者均未服用羥苯磺酸鈣)標本，并進行了相關性研究和分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1標本來源 收集10份不同肌酐水平的新鮮血清標本，無溶血、無黃疸、無脂血。

1.1.2干擾藥物 羥苯磺酸鈣，每粒0.5 g，由上海朝暉藥業有限公司生產。

1.2儀器與試劑 儀器為日立7600全自動生化分析儀，肌氨酸氧化酶肌酐試劑為浙江金華市生物科技有限公司產品，校準品為配套校準品，質控品為貝克曼公司質控品。

1.3方法

1.3.1羥苯磺酸鈣配制 取0.5 g羥苯磺酸鈣溶于500 mL去離子水中，配成濃度為1 000 mg/L備用，再按比例稀釋成800、600、400、200、100 mg/L。

1.3.2含干擾物的標本制備 各種濃度的羥苯磺酸鈣溶液與被測肌酐血清分別按1∶19稀釋(干擾溶液10 μL+血清190 μL)，配制一系列含相應濃度的羥苯磺酸鈣實驗血清 (50、40、30、20、10、5 mg/L)。

1.3.3參照標準 相對偏倚=(實驗樣品均值-對照樣品均值)/對照樣品均值×100%，根據文獻[3]生物變異和參考美國 CLIA′88 能力比對檢驗的分析質量要求肌酐的可接受范圍為15%[2]，按照1/2偏差7.5%作為干擾試驗的可接受標準，>7.5%為有干擾。

1.3.4檢測過程 試劑用配套校準品校準，當日質控均在控，未加干擾物的原血清為對照樣品，加一系列干擾物的為實驗樣品，上機檢測，每份標本均測量3次。

1.4統計學處理 采用Excel 2010繪制表格，采用SPSS23.0統計軟件進行數據分析處理。 以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1相對偏倚 本研究發現，實驗樣品加入羥苯磺酸鈣濃度越大，其肌酐水平與對照樣品均值相差越大，干擾就越嚴重，相對偏倚也越大，并呈負向干擾，見表1。

表1 羥苯磺酸鈣濃度對肌酐水平的干擾(相對偏倚)

2.2相關性分析 10份不同肌酐水平血清標本經Pearson相關分析，其r值均為負值，并接近-1，隨著干擾物(羥苯磺酸鈣溶液)濃度不斷增大，干擾越嚴重，且呈負向干擾(-1

表2 加入不同濃度羥苯磺酸鈣溶液后相關性分析

3 討 論

目前，我國檢測肌酐的主要方法有Jaffe法和酶法，因Jaffe法的特異度較差，血液中的蛋白質、乙酰乙酸、丙酮、葡萄糖等物質可與苦味酸發生反應，使結果假性偏高，并且對環境影響較大，所以大多數都選擇酶法中的肌氨酸氧化酶法，其具有特異度高和很強的抗干擾能力的特點[4]，血清肌酐的檢測結果會受很多因素，特別是藥物的干擾，且不同藥物對不同檢測方法的干擾方向也不同[5]。目前，泗洪縣人民醫院仍采用Jaffe法，作者曾遇見1例由于口服羥苯磺酸鈣導致血清肌酐檢測結果假性降低案例。2021年3月20日，作者接到1例患者反饋，3 d前在外地一家醫院檢查腎功能顯示肌酐正常，而到泗洪縣人民醫院檢查高于正常值，為265 μmol/L，尿素氮、尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白結果也偏高，但是肝功能正常，血糖偏高。當即查看標本無異常，復檢，肌酐結果為262 μmol/L。詢問患者病史，得知該患者為慢性腎病，于1周前開始口服羥苯磺酸鈣，考慮是否為羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐產生干擾。因為不知道患者之前就診醫院肌酐檢測方法，無從考證。得知泗洪縣中醫院檢驗科用的酶法，當即將此患者標本轉運過去，測得肌酐水平為103 μmol/L。關于羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的干擾，有文獻報道，羥苯磺酸鈣具有調節微血管的生理功能，是臨床上治療微血管循環障礙的常見藥物[6]，對糖尿病引起的視網膜病變、微循環障礙引起的心、腦、腎疾病等均有治療作用[7-8]，因此，其廣泛用于糖尿病微血管病變、糖尿病腎病、慢性腎功能不全等的治療。健康人口服500 mg羥苯磺酸鈣后，約4 h達到血藥濃度峰值(13 mg/L),消除半衰期約為5 h，腎功能正常患者24 h血藥濃度均在6 μg/mL以上，所以服藥期間采血對肌氨酸氧化酶法均會有干擾。其干擾機制可能與羥苯磺酸鈣的還原性有關，其消耗了肌氨酸氧化酶反應中參與Tinder反應的H2O2，抑制了紅色醌亞胺化合物的氧化顯色[9]，造成假性降低。為此，原中華人民共和國衛生部臨床檢驗中心還做了此方面的調研，對羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的干擾引起了重視，其濃度越大干擾越嚴重[10]，本研究也得到了證實。

當臨床上發生肌酐水平與臨床病情不符時，要考慮藥物的干擾，對于腎功能不全患者用藥后結果出現差異，若與其他同期腎功能指標不符時，審核報告時要謹慎，與臨床做好溝通，有條件時改用其他方法復核[11]。